GBT26628.1-2011粮油检验储粮真菌标准图谱曲霉属.pdf 39页

'ICS65．020．01B04a亘中华人民共和国国家标准GB／T26628．1—2011粮油检验储粮真菌标准图谱第1部分：曲霉属Inspectionofgrainandoils--Standardatlasofstoredgrainfungi—Part1：Aspergillus2011-06-16发布2011-11一01实施丰瞀粥紫瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会厘111 标准分享网www.bzfxw.com免费下载刖瞢GB／T26628．1—2011GB／T26628(<粮油检验储粮真菌标准图谱》分为四个部分：——第1部分：曲霉属}——第2部分：青霉属；——第3部分：镰刀菌属；——第4部分：丝孢纲其他重要菌属。本部分为GB／T26628的第1部分。本部分的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。本部分由国家粮食局提出。本部分由全国粮油标准化技术委员会归口。本部分起草单位：国家粮食储备局成都粮食储藏科学研究所。本部分主要起草人：李荣涛、杨建、郭道临、兰盛斌、黎万武、付鹏程、王伟、王双林、赵小军、叶真洪、李浩杰。 粮油检验储粮真菌标准图谱第1部分：曲霉属GB／T26628．1—20111范围GB／T26628的本部分规定了储粮真菌标准图谱曲霉属检验的术语和定义、检验环境及粮食中常见曲霉菌落图和显微形态特征图。本部分适用于稻谷、小麦、玉米及杂粮中的曲霉属检验的辅助参考。2规范性引用文件下列文件中的条款通过GB／T26628本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB／T4789．282003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3术语和定义下列术语和定义适用于GB／T26628的本部分。3．1曲霉属Aspergillus半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、丛梗孢科的一属。主要特征为它的无性繁殖体由菌丝体上某部分细胞分化扩大为足细胞，向上长出分生孢子梗，梗的顶端膨大为顶囊，在顶囊上生出一层或两层小梗，从每个小梗的顶端生出一串分生孢子，组成一个头状体的结构，称为分生孢子头。一个带柄的分生孢子头就是曲霉菌无性繁殖体的基本特征和主要方式。有性繁殖只是在部分类群中出现，形成颜色鲜艳的子囊壳或称被子器，内生多数子囊，子囊内形成子囊孢子。有些曲霉能产生菌核。4检验环境4．1菌落观察：室内环境应光线充足、明亮，但不应在直射阳光下观察。如果需要照明，应有具有漫射光的照明光源，光照度宜在(450±100)lx范围内。4．2显微观察：根据不同物镜放大倍数，调整显微镜的光源强度和聚光镜的孔径光阑，聚光镜的孔径光阑应与所用物镜的数值孔径一致或稍大一些，使整个观察视野明亮适宜。具体的显微观察操作步骤见附录A。4．3显微拍摄：300万以上像素硬件图像分辨率，USB2．0接口输出，30位真彩色原色输出，自动曝光、自动白平衡，显示目镜图像和电脑图像同步齐焦，屏幕显示90％以上显微镜目镜视场的图像。5粮食中常见曲霉菌落图和显微形态特征图常见曲霉的主要形态特征描述参见附录B。粮食中常见曲霉菌落图和显微形态特征图分别见图1～图28。 标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T266281—20”51黄曲霉∽flavus) 52寄生曲霉(Apurasiticus)GB／T26628120b)图2 标准分享网www.bzfxw.com免费下载53杂色曲霉似versicolor)b)图3 54构巢曲霉(A．nidulans)GB／T266281—20自m∞$b)图4 GB／T266281—201155棕曲霉(A．ochraceus)b)图5 5．6棒曲霉(Aclavatus)GBIT266281—20b)图6 GB／T266281—201157巨大曲霉(Agiganteus)b)图7 58栖土曲霉(Aterricola)GB／T266281—20b)图8 GB／T266281—201159文氏曲霉(Awentii)b)图9 510灰绿曲霉群(Aglaucusgroup)GB／T266281—20h)图10 GB／T266281—2011静毯。j立。j彭‘d)图10(续) 511阿姆斯特丹曲霉(Aamstelodami)GB／T266281—20i要1 GB／T266281—2011512薛氏曲霉(Achevalieri)b)图12 513曲霉(Aruber)CB／T266281—20b)图13 GB／T266281—2011514近橄榄色曲霉(Asubolivaceus)b)图14心 515匍匐曲霉(Arepens)GB／T266281—20b)图15 GB／T266281—2011516局限曲霉(Arestrictus)b)图16l一、东 517爪甲曲霉(Aunguis)GB／T266281—20b)图17 GB／I’266281—2011518烟曲霉(A，Hmigatus)l，)图18 519黄叉曲霉(Aflaw，Hrcatis)GB／T266281—20／b)图19，’， GB／T266281—2011520无花果曲霉(Aficuum)b)图20 521泡盛曲霉(Aawamorl)GB／T266281—20b)图2 GB／T266281—2011522黑曲霉(Aniger)1))图22 523培宾曲霉(Atubingensis)培宾日S GB／T266281—2011524白曲霉(A．candidus)∽图24 525溜曲霉∽tamarii)GB／T266281—20b)图25 GB／T266281—2011526焦曲霉(Ansf“s)t、嘉^b)图26 527黄柄曲霉(Afluvipes)GB／T266281—20f摹f避7、_|豁乐蔷．．一／7醚誉荨?≯‘窿耋。誉二．≤r{等t“。一‘=>p翼≤．一’瞎。o樊。二。影⋯，峨：一，。7*#自}‘_mvipe‘b)图27 528土曲霉(Aterreus)b)图28 6图谱说明GB／T26628．1—20116．1菌落图谱中的30℃表示培养温度为(30_--t-1)℃，6D表示6天，CD表示培养基采用高盐察氏培养基，CA表示培养基采用察氏培养基。6．2显微特征图谱中的×××X代表放大倍数，如200x表示放大200倍。 GB／T26628．1—2011附录A(规范性附录)粮食中曲霉菌落观察及显微观察操作步骤A．1设备和材料A．1．1显微镜：放大倍数为l000倍以上，内置光源，强度可调，宜具备数码照相功能，数码照相机的分辨率宜在300万像素以上。A．1．2目镜测微计：具有lo倍的双目镜。A．1．3物镜：配备10倍、20倍、40倍、100倍(油镜)。A．1．4生物培养箱。A．1．5冰箱。A．1．6超净工作台。A．1．7放大镜。A．1．8酒精灯。A．1．9接种钩针。A．1．10解剖针。A．1．11滴瓶。A．1．12三角瓶。A．1．13载玻片。A．1．14盖玻片。A．1．15培养皿。A．1．16镊子。A．1．17高压蒸汽灭菌器。A．2培养基和试剂A．2．1A．2．2A．2．3A．2．4A．2．5A．2．6A．2．7乳酸一苯酚液：按GB4789．28察氏培养基：按GB4789．28一高盐察氏培养基：按GB4789香柏油。二甲苯。无菌水。75％乙醇。A．3操作步骤2003的3．24规定配制。2003的4．77规定配制。282003的4．78规定配制。A．3．1菌落观察A．3．1．1用种植分离法或稀释分离法把粮食籽粒上的曲霉分离并纯化，将纯化后的未知菌株保存于斜面试管中备用。A．3．1．2将分装于250mL或500mL三角瓶中已灭菌的高盐察氏培养基(A．2．3)熔化后，放人45℃水浴中保温备用。A．3．1．3将熔化培养基在超净工作台(A．1．6)中以无菌操作倾注于直径9cm～10cm的培养皿(A．1．15)中，每个培养皿注入12mL～15mL，凝固后备用。32 GB／T26628．1--2011A．3．1．4将接种针(A．1．9)经火焰灭菌并冷却后，从斜面试管(A．3．1．1)上蘸取极少量孢子，点植于培养皿中的培养基(A．3．1．3)上，一般点植成三角形的三点。A．3．1．6将接完种的培养皿倒置并放入30℃恒温培养箱(A．1．4)中培养6天，用肉眼或放大镜观察菌落的生长或发育速度、菌落的颜色、菌落表面质地、菌落边缘、培养基颜色变化等。A．3．2显微观察A．3．2．1取一片洁净的载玻片(A．1．13)，在中央滴一滴乳酸一苯酚液(A．2．1)。A．3．2．2用接种针(A．1．9)或解剖针(A．1．10)从培养皿(A．3．1．5)或试管(A．3．1_1)的纯化菌落上挑取少许含有子实体的菌体放人载玻片的液滴(A．3．2．1)中，并将菌丝体挑开，勿使成团。A．3．2．3用镊子(A．1．16)取盖玻片(A．1．14)，从一边轻轻加盖，避免产生气泡，如果有气泡，可在酒精灯(A．1．8)上微微加热除去。A．3．2．4用显微镜(A．1．1)观察载片标本中菌丝、子实体、孢子等的特征。A．4观察结果A．4．1将A．3．1．5的观察现象与第5章的菌落标准图[a)图)]对照，确定菌的种类。A．4．2将A．3．2．4的观察现象与第5章的显微特征标准图[b)图)]对照，确定菌的种类。 GB／T26628．1—2011附录B(资料性附录)常见曲霉的主要形态特征B．1黄曲霉(A．flavus)圈1菌落生长较快，在CD培养基上5天～7天直径3cm～4Cm或4cm～7cm，最初带黄色，然后变为黄绿色，反面无色或带褐色。在低倍显微镜下观察可见分生孢子头疏松放射状，继变为疏松柱状。顶囊烧瓶形或近球形，全部顶囊着生小梗，小梗单层、双层或单、双层同时生在一个顶囊上。分生孢子球形、近球形，粗糙。B．2寄生曲霉(A．parasiticus)图2菌落在cD培养基上生长较快，5天～7天直径4cm～7cm，平坦或带放射状沟纹，幼时带黄色，老后呈暗绿色，反面奶油色至淡褐色。低倍显微镜下观察，分生孢子头呈疏松放射状。分生孢子梗光滑或粗糙，顶囊近球形或烧瓶形。分生孢子球形，极粗糙，具小刺。B．3杂色曲霉(A．versicolor)图3菌落在CD培养基上生长较局限，5天～7天直径2cm～4cm，绒状、絮状或两者同时存在。颜色变化相当广泛，不同菌系可能局部淡绿、灰绿、浅黄甚至粉红色；反面近于无色至黄橙色或玫瑰色。有的菌落有无色至紫红色的液滴。分生孢子头疏松放射状，顶囊半椭圆形至半球形，上半部或四分之三部位上着生小梗，小梗双层。分生孢子球形，粗糙。B．4构巢曲霉(A．nidulans)图4菌落在CD培养基上生长较局限，5天～7天直径3cm～5CITI，绒状，绿色，有的菌系由于产生较多的闭囊壳而显现黄褐色，反面紫红色。分生孢子头短柱形，分生孢子梗极短，常弯曲。小梗双层。分生孢子球形，粗糙。B．5棕曲霉(A．ochraceus)图5菌落在cD培养基上生长较局限?5天～7天直径3Cm～5cm，褐色或浅黄色。反面带黄褐色或绿褐色。分生孢子头幼时球形，老后分裂成2个～3个柱状分叉。分生孢子梗有明显麻点。顶囊球形。小梗双层，自顶囊全部表面密集着生。分生孢子球形至近球形，常粗糙。B．6棒曲霉(A．clavatus)图6菌落在CD培养基上生长较局限，5天～7天直径1cm～4cIn，绒毛状或厚毛毡状，灰淡青绿色，分生孢子头棍棒状。分生孢子梗粗大，表面光滑，无色。顶囊棍棒状。小梗一层，短，密生在顶囊表面。分生孢子椭圆形，光滑。B．7巨大曲霉(A．giganteus)图7菌落在CD培养基上生长较局限，5天～7天直径2cm～4CITI，绒毛状或厚毛毡状，淡蓝绿色至灰蓝绿色，分生孢子头近似棒状，但不如棒曲霉明显。分生孢子梗粗大，表面光滑，无色。顶囊棒状。小梗一层，短，密生在顶囊表面。分生孢子椭圆形，光滑。34 GB／T26628．1—2011B．8栖土曲霉(A．terricola)图8菌落在CD培养基上生长较快，5天～7天直径3cm～7cm，黄色或黄褐色，细密。分生孢子梗无色，光滑或具小颗粒。分生孢子头较小。小梗大部分双层，少数单层，单层和双层小梗通常可以在同一个分生孢子头内观察到。分生孢子有粗疏小刺。B．9文氏曲霉CA．wentii)圈9菌落在CD培养基上生长较快，5天～7天直径3crn～7cril，白色，密集成絮团状，菌落中间有棕褐色或咖啡色的分生孢子头区域。分生孢子头很大，圆球形。分生孢子梗很长。顶囊圆形。小梗二层，遍生于顶囊表面。分生孢子球形或椭圆形，表面通常粗糙，也有光滑的。B．10灰绿曲霉群CA．glaucusgroup)图10菌落在CD培养基上生长较快，5天～7天直径3cm～7cm，绒毛状或絮状，呈灰青绿色，老时变为褐绿色或暗绿色。分生孢子头疏松辐射状。分生孢子梗光滑，有隔膜。顶囊不大，圆球形或圆顶形。小梗一层生于顶囊的全部或上部，小梗较粗。分生孢子椭圆形到近球形，有短刺。部分种产生大量黄色、橙色或橘红色的子囊孢子。B．11阿姆斯特丹曲霉CA．amstelodami)图11菌落在CD培养基上生长较快，5天～7天直径3cro～7cin，绒毛状或絮状，菌落深绿色，带有硫黄色斑点，反面无色到淡黄色。子囊孢子扁豆形，表面粗糙，中央有明显的纵沟和隆起的边缘。B．12薛氏曲霉CA．chevalieri)图12菌落在cD培养基上生长较快，5天～7天直径3cm～7cnl，最初为白色的短羊毛状，后变成具有成块的淡青色区域和埋藏有橙色子囊孢子区域。子囊孢子扁豆形，表面平滑或近似平滑，中央有脊线或纵沟，脊薄，呈鸡冠状，形状如滑轮。B．13赤曲霉CA．ruber)图13菌落在CD培养基上生长较快，5天～7天直径3cm～7CiTI，绒毛状或絮状，菌落为锈红色到深红棕色。产生大量赤红色子囊孢子。子囊孢子扁豆形，表面平滑或近似平滑，中央有脊线或纵沟，脊低而钝圆，中央沟宽而浅。B．14近橄榄色曲霉(A．subolivaceus)图14菌落在CD培养基上生长较局限，5天～7天直径2cm～4ciil，菌落呈淡黄橄榄色或灰橄榄色，分生孢子头球形至放射状或柱状。小梗单层或双层，通常在同一菌种上可以看到这两种情况。分生孢子梗具有显著的小刺。分生孢子光滑或近于光滑。B．15匍匐曲霉CA．repens)图15菌落在CD培养基上生长较快，5天～7天直径3cm～7cIn，绒毛状或絮状，菌落污绿色混有黄色，产生大量橙红色子囊孢子。子囊孢子扁豆形，表面平滑或近似平滑，中腰有纵痕，无中央脊，也无中央沟。B．16局限曲霉CA．restrictus)图16菌落在CD培养基上生长局限，5天～7天直径1cm～3cm，菌落暗绿色到褐绿色。分生孢子头35 GB／T26628．1—2011小，为细长的柱状，类似青霉属中一些单轮生青霉穗。顶囊不大，近半球形。分生孢子卵圆形到圆桶形，表面粗糙。B．17爪甲曲霉(A．unguis)图17菌落在CD培养基上生长较局限，5天～7天直径1crn～3CITI，绒状，暗黄至绿色，具有镶饰盒细尖的菌丝存在。分生孢子头短柱形，分生孢子梗极短，常弯曲。小梗双层。分生孢子球形，粗糙，具有小刺。B．18烟曲霉(A．nmigatus)图18菌落在CD培养基上生长较局限，5天～7天直径2cm～4cm，绒状或带絮状，暗绿色、烟绿色，反面具有相同颜色。分生孢子头柱状，幼时青绿色。分生孢子梗短，表面光滑。顶囊瓶状。小梗一层，在顶囊的上半部或三分之二部密生。分生孢子球形，有小刺。B．19黄叉曲霉(A．flavpfurcatis)图19菌落生长较快，在CD培养基上5天～7天直径4crn～7cm，深黄绿至褐色然后呈暗褐色。分生孢子头较大，呈疏松放射状。顶囊烧瓶形或近球形，全部顶囊着生小梗，小梗单层、双层或单、双层同时生在一个顶囊上。分生孢子具有显著的小疣。B．20无花果曲霉(A．ficuum)图20菌落在CD培养基上生长较快，5天～7天直径3cm～5cm，粗地毡状，炭黑色，初期有白色羊毛状菌丝。分生孢子头大，圆球形。分生孢子梗长度不超过4．omm。顶囊圆球形。小梗二层，密生在顶囊的全部表面。分生孢子球形，成熟期直径在5．0pm以下，表面粗糙。B．21泡盛曲霉(A．awamori)图21菌落在CD培养基上生长较快，5天～7天直径3cm～5cm，粗地毡状，幼时呈灰橄榄褐色或深橄榄褐色，后变为红褐色。分生孢子头圆球形。分生孢子梗大部分长1．0mm～1．5mm，表面光滑。顶囊圆球形。小梗二层，密生在顶囊的全部表面。分生孢子球形，大部分直径4．0pm～4．5pm。B．22黑曲霉(A．niger)圈22菌落在CD培养基上生长较快，5天～7天直径3cm～5cm，粗地毡状，黑色、黑褐色，初期有白色羊毛状菌丝。分生孢子头大，圆球形。分生孢子梗很长表面光滑。顶囊圆球形。小梗二层，密生在顶囊的全部表面。分生孢子球形，表面粗糙iB．23塔宾曲霉(A．tubingensis)图23菌落在CD培养基上生长较快，5天～7天直径3cIil～5cm，表面疏松，暗黑色至褐色，反面无色。分生孢子头大，圆球形。分生孢子梗大部分长2mm～3mm，也有达5．0iTlm。表面光滑。顶囊圆球形。小梗二层，密生在顶囊的全部表面。分生孢子球形，大部分直径在3．opm～3．55pm。B．24白曲霉(A．candidus)图24菌落在CD培养基上生长较快，5天～7天直径3cm～5cm，绒状，白色，老熟时变为乳酪色。分生孢子头圆球形。分生孢子梗光滑。顶囊圆球形。小梗二层。分生孢子球形或扁球形，表面光滑。B．25溜曲霉(A．tamarii)图25菌落生长较快，在CD培养基上5天～7天直径3cm～4cm或4cm～7cm，深黄绿至褐色。在低36 GB／T26628．1—2011倍显微镜下观察可见分生孢子头疏松放射状。顶囊烧瓶形或近球形，全部顶囊着生小梗，小梗单层、双层或单、双层同时生在一个顶囊上。分生孢子具有显著的小疣。B．26焦曲霉(A．ustus)图26菌落在CD培养基上生长较快，5天～7天直径3cm～5CID．，絮状，最初为褐黄色，继变为褐色或紫灰色，反面黄色或橙色，老后呈褐色。分生孢子头放射状至疏松柱状。顶囊半球形至近球形。小梗双层。分生孢子球形，粗糙。B．27黄柄曲霉(A．ftavlpes)图27菌落在CD培养基上生长较局限，5天～7天直径2cm～4cm，淡黄色，反面黄褐色至红褐色。分生孢子头疏松柱状或趋于放射状。分生孢子梗壁较厚，近于光滑或微呈粒状。顶囊近球形或稍长。小梗双层生于顶囊顶部。分生孢子球形或近球形，光滑。B．28土曲霉(A．terreus)图28菌落在CA培养基上生长较快，5天～7天直径4cm～6C133，绒状或毛毡状，肉桂色到沙褐色，反面黄色到污褐色。分生孢子头长柱状。分生孢子梗光滑无色。顶囊半球形。小梗二层在顶囊上半部或三分之二部分着生。分生孢子球形或近球形，表面光滑。37'