GBT4789.32-2003食品卫生微生物学检验大肠菌群的快速检测.pdf 7页

'免费标准网(www.freebz.net)标准最全面·.,’,·+,,%食品卫生检验新技术标准规程手册!!!!!!!!!食界论坛!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!www.sinofood.com.cn/bbs!!!!!!!!!!!!!!!!!!!食品卫生微生物学检验大肠菌群的快速检测!"#$%&’()*+—+,,++,,+年-月.*日发布+,,+年.,月.日实施.范围本标准规定了食品中大肠菌群的快速检验和计数方法。本标准适用于食品中大肠菌群的快速检验和计数。+规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。!"%&’()*食品卫生微生物学检验大肠菌群测定!"%&’()+’食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂/01%’*+：.((.（2）微生物学———大肠菌群菌落计数法通则*术语和定义下列术语和定义适用于本标准*).大肠菌群34567489:;3<=86;大肠菌群是革兰氏阴性、无芽孢、氧化酶阴性的杆状细菌，为需氧和兼性厌氧，可在有胆盐（或具有其他抑制生长的表面活性剂）存在的情况下生长，通常可在*->?+>发酵乳糖并产酸和醛。具有半乳糖苷酶。在本标准设定的条件下，大肠菌群为能分解半!@!@乳糖苷、使培养基发出荧光或生成紫色（或红色）菌落的一群革兰氏阴性无芽孢杆菌。%原理%).最可能数（ABC）法大肠菌群可产生半乳糖苷酶，分解液体培养基中的酶底物———%@甲基伞形酮@!@!@D@半乳糖苷（以下简称AE!;5），使%@甲基伞形酮游离，因而，在波长*--F9的紫外光灯照射下呈现蓝色荧光。%)+平板法大肠菌群可产生半乳糖苷酶，分解培养基中的酶底物———茜素@半乳糖苷（以!@!@D@下简称G56HI;5），使茜素游离并与固体培养基中的铝、钾、铁、铵离子结合形成紫色（或红色）的螯合物，使菌落呈现相应的颜色。免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)标准最全面第二部分食品卫生微生物学检验标准规程·#-(#·!!!!!!!!!食界论坛!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!www.sinofood.com.cn/bbs!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!试剂和培养基!"#磷酸盐缓冲液按$%&’()"*(—#))&中+"**规定进行制备。!"*生理盐水!"*"#成分氯化钠("!,蒸馏水#---./!"*"*制法将氯化钠溶于蒸馏水，#*#0蒸汽灭菌#!.12。!"+34$56肉汤!"+"#成分胰蛋白胨或胰酪胨*-"-,氯化钠!"-,无水磷酸氢二钾*"’!,无水磷酸二氢钾*"’!,月桂基硫酸钠-"#,34$5（6纯度不低于))7）-"-(,蒸馏水#---./!"+"*制法将各成分加热溶于蒸馏水中，以#!78*-7氢氧化钠溶液调整9:值，分装于*-..;#!-..试管，每管)./，##<0蒸汽灭菌#-.12，最终9:值’"-8’"*。待培养基冷却后，以无菌手续于每管培养液内加入-"#./经无菌水稀释的!--头孢磺碇液或!,=./于#---./灭菌培养液内加#./经无菌水稀释的!.,=./头孢磺啶液并以无菌操作分装试管。注：双料34$56肉汤除蒸馏水外，其他成分加倍。!"&>61?@,51琼脂!"&"#成分胰蛋白胨或胰酪胨*-"-,氯化钠!"-,无水磷酸氢二钾*"’!,无水磷酸二氢钾*"’!,月桂基硫酸钠-"#,>61?@,5（6纯度不低于)’7）-"-!,异丙基硫代半乳糖苷-"-+,硫酸铝钾-"!,柠檬酸铁铵-"!,琼脂#!"-,免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)标准最全面·!":(·(""’食品卫生检验新技术标准规程手册!!!!!!!!!食界论坛!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!www.sinofood.com.cn/bbs!!!!!!!!!!!!!!!!!!!蒸馏水!"""#$%&’&(制法将各成分放入蒸馏水中，加热使溶化，以!%)*(")+,-.调整/.值，分装烧瓶，!!01蒸汽灭菌!"#23，最终/.值4&"*4&(。0设备和器材0&!培养箱：5416!1。0&(冷藏箱："16’1。0&5天平：感量"&"!70&’均质器或乳钵。0&%平皿：直径8"##。0&0试管：("##9!%"##。0&4吸管：!&"#$和!"&"#$。0&:广口瓶或三角瓶：容量%""#$。0&8玻璃珠：直径约%##。0&!"试管架。0&!!紫外灯（波长5003#）。0&!(其他。4检验程序见图!。图!检验程序免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)标准最全面第二部分食品卫生微生物学检验标准规程·#)!1·!!!!!!!!!食界论坛!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!www.sinofood.com.cn/bbs!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!样品的制备!"#以无菌手续取$%&’（或$%(）样品，加于含$$%&’无菌磷酸盐缓冲液（或生理盐水）的广口瓶（或三角瓶）内（瓶内预置适当数量的玻璃珠），充分振摇或用均质器以!)))*+&,#))))*+&均质#&-.成#/#)稀释液。!"$用#&’无菌吸管吸取#/#)样品稀释液#")&’，注入含0")&’无菌磷酸盐缓冲液（或生理盐水）的试管内，振摇均匀，即成#：#))样品稀释液。!"1另取#")&’无菌吸管，按上法制备#)倍递增样品稀释液。每递增一次，换一支#")&’无菌吸管。!"2根据食品卫生标准要求或对样品污染程度的估计，选择三个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种三管培养基（345法）或两个平皿（平板法）。0大肠菌群的345计数0"#将待检样品和样品稀释液接种36789肉汤管，每管#")&’（接种量在#")&’以上者，接种双料36789肉汤管）。每个样品接种三个连续稀释度，每个稀释度接种1管培养基。同时另取$支36789肉汤管（或双料36789肉汤管）加入与样品稀释液等量的上述无菌磷酸盐缓冲液（或生理盐水）作空白对照。0"$将接种后的培养管置于1:;<#;培养箱培养#!=,$2=。0"1将培养管置于暗处，用波长1>>.&的紫外光灯照射，如显蓝色荧光，为大肠菌群阳性管；如未显蓝色荧光，则为大肠菌群阴性管。0"2结果报告：根据大肠菌群阳性管数，查345表（见附录?），报告每#))&’（(）食品中大肠菌群345值。#)大肠菌群的菌落计数#)"#用灭菌吸管吸取待检样液#")&’，加入无菌平皿内。每个样品接种三个连续稀释度，每个稀释度接种两个平皿。#)"$于每个加样平皿内倾注#%&’2%;,%);的?9-@A(89琼脂，迅速轻轻转动平皿，使混合均匀。待琼脂凝固后，再倾注1&’,%&’?9-@A(89琼脂覆盖表面。同时将?9-@A(89琼脂倾入加有#&’上述无菌磷酸盐缓冲液（或生理盐水）的无菌平皿内作空白对照。#)"1待琼脂凝固后，翻转平板，于1:;<#;培养箱培养#!=,$2=。取出平板，计数紫色（或红色）菌落。#)"2结果报告#)"2"#当平板上的紫色（或红色）菌落数不高于#%)个，且其中至少有一个平板紫色（或红色）菌落不少于#%个时，按式（#）计算大肠菌群数：!"!#（#）（$#%$$）&式中：!———样品的大肠菌群数，个+&-。或(；!#———所有计数平板上，紫色（或红色）菌落数之总和；免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)标准最全面·!#)’·"##’食品卫生检验新技术标准规程手册"""""""""食界论坛""""""""""""""""""""""""www.sinofood.com.cn/bbs"""""""""""""""""""!!———供计数的最低稀释倍数的平板数；!"———供计数的高一稀释倍数的平板数；"———供计数的样品最低稀释度（如!#$!，!#$"，!#$%等）。!#&’&"如接种所有（%个）稀释样品的平板上，紫色（或红色）菌落数均少于!(个时，仍按式（!）计算，但应在所得结果旁加“!”号，表示为估计值。!#&’&%如接种未稀释样品和所有稀释样品的平板上，紫色（或红色）菌落数均少于!(个时，报告结果为：每毫升（克）样品少于!(个大肠菌群。!#&’&’如接种未稀释样品和所有稀释样品的平板上，均未发现紫色（或红色）菌落数时，报告结果为：每毫升（克）样品少于!个大肠菌群。!#&’&(如平板上的紫色（或红色）菌落数高于!(#个时，按式（!）计算，在结果旁加“!”号表示估计值或视情况重新选择较高的稀释倍数进行测定。免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)标准最全面第二部分食品卫生微生物学检验标准规程·&,5.·!!!!!!!!!食界论坛!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!www.sinofood.com.cn/bbs!!!!!!!!!!!!!!!!!!!附录!大肠菌群最可能数（"#$）检索表（规范性附录）表!%&阳性管数-./可信限"#$&,,’(（)）&’(（)）*+,%&’(（)）*+,%,&’(（)）*+下限上限,,,1+,,,&+,1.-,,,02,,,+-,,&,+,,&&2,1.&+,,&0-,,&+&0,,0,2,,0&-,——,00&0,,0+&2,,+,-,,+&&+,——,+0&2,,++&-,&,,3,1.0,,&,&4,&,0&,&,0&&,&,+&.,&&,4,&,0+,&&&&&,+,+2,&&0&.,&&+&-,&0,&&,+,+2,&0&&.,&000,,&0+03,&+,&2,&+&0,,——&+003,&++0-,免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)标准最全面·!’31·/’’0食品卫生检验新技术标准规程手册"""""""""食界论坛""""""""""""""""""""""""www.sinofood.com.cn/bbs"""""""""""""""""""阳性管数,-.可信限)*+!’’"#（$）!"#（$）%&’(!"#（$）%&’(’!"#（$）%&下限上限/’’,’!’&1’/’!!0’&’&2’/’//’’/’&/1’/!’!-’&’00’/!!/’’2’3,’/!//2’/!&&0’//’/!’0’02’//!/3’!’’!-’’///&-’//&0/’/&’/,’/&!&1’——/&/00’/&&-&’&’’/&’0’/!’’&’!&,’2’!&’’&’/10’!-’&3’’&’&,-’&/’,&’!-’&3’’&/!!-’’&’’00’’&///!’’&-’02’’&/&/,’’&&’/0’’&1’!&’’’&&!01’’2!’/0’’’&&/!!’’’!-’’03’’’&&&!/0’’’注!：本表采用&个稀释度［!"#（$）、’(!"#（$）和’(’!"#（$）］，每稀释度&管。注/：表内所列检样量如改用!’"#（$）、!"#（$）和’(!"#（$）时，表内数字相应降低!’倍；如改用’(!"#（$）、’(’!"#（$）和’(’’!"#（$）时，则表内数字应相应增加!’倍。其余可类推。免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载'