HPLC测定虎杖茎中虎杖苷含量的研究毕业论文.doc 22页

'HPLC测定虎杖茎中虎杖苷含量的研究毕业论文目录摘要IAbstractII前言11材料与方法41．1材料、仪器与试剂41．2对照品溶液的制备51．3标准曲线的绘制51．4超临界二氧化碳流体萃取工艺流程51．5萃取物中虎杖苷含量的测定51．6单因素试验61．7最佳萃取工艺条件实验设计62结果与分析72．1虎杖苷对照品标准曲线的绘制72．2单因素试验结果82．3正交试验结果直观分析83结论15参考文献16致谢184 4HLPC测定虎杖茎中虎杖苷含量的研究邵阳学院生物与化学工程系08级生物工程422000敖普章指导老师蒋盛岩摘要目的:研究超临界CO2萃取压力、温度、时间和携带剂甲醇的添加量对虎杖茎中虎杖苷提取的影响，探讨虎杖茎中虎杖苷的最佳提取参数。方法:采用正交试验，用超临界CO2萃取虎杖茎中虎杖苷，并用HPLC和紫外分光光度计对提取液进行分析。结果:正交试验结果表明，影响虎杖茎中虎杖苷CO2超临界萃取的主要因素为D＞C＞B＞A（A为萃取压力，B为萃取温度，C为萃取时间，D为携带剂甲醇的添加量），其最佳组合是D1C3B2A2。结论:超临界CO2萃取虎杖茎中虎杖苷的最佳参数为：萃取温度30℃，萃取剂甲醇的添加量为50mL，萃取时间是60min，萃取压力是12Mpa。关键词:虎杖；虎杖苷；超临界CO2萃取；高效液相色谱4 DeterminationofPolydatininPolygonumcuspidatumSiebetZuccstembyHighPerformanceLiquidChromatographyAopuzhang(DepartmentofBiologyandChemistryEngineering,ShaoyangUniversity,Shaoyang422000,China)Counselor:JIANGShengyanAbstractObjective：ResearchsupercriticalCO2extractionpressure,temperature,timeandpresoakermethanoleffectonpolydatinextractionfromPolygonumcuspidatumSiebetZuccstem,anddiscussesthebestpolydatinextractionparameterfromPolygonumcuspidatumSiebetZuccstem.Methods:Theexperiment,usingsupercriticalCO2extractionofpolydatinfromPolygonumstem,andwithHPLCandUVspectrophotometricanalysisoftheextract.Result:OrthogonalexperimentresultsshowthattheinfluenceofPolygonumcuspidatumSiebetZuccstempolydatinsupercriticalfluidCO2extractionthemainfactorsofD>C>B>A(AforextractingpressureB,forextractingtemperature,Cforextractiontime,Dforpresoakermethanol),thebestparametercombinationisD1C3B2A2.Conclusion:TheoptimumsupercriticalCO2extractionconditionswereextractiontemperature30℃,presoakermethanol50mL,extractiontime60min,pressure12Mpa.Keywords：PolygonumcuspidatumSiebetZucc；Polydatin；SupercriticalCO2extraction；HPLC44 4 前言虎杖(PolygonumcuspidatumSiebetZucc.)是蓼科蓼属多年生灌木状草本植物，虎杖的干燥茎和根，性苦寒，归肝、肺、胆经，具有祛风利湿、祛痰止咳、清热解毒、活血化瘀之效。中医临床用于治疗湿热黄疸、肺热咳嗽、疮痈肿毒、关节痹痛、经闭经痛，其根茎富含虎杖苷、大黄素、白藜芦醇等多种活性成分。药理学研究表明，其主要活性成分虎杖苷具有较强的生物活性。研究表明,虎杖苷能抑制心肌细胞收缩性、抑制血小板聚集、降血脂、抗脂质过氧化、抗休克等作用,此外还能减轻多种因素造成的组织器官损伤[1,2]。虎杖苷对心肌细胞的作用,金春华等[3]报道,通过PD对大鼠心肌细胞的研究表明,其强心作用可能是通过增加单个细胞中的游离钙离子浓度而直接增强心肌收缩性；PD的这种效应,使其在理论上具有比洋地黄类强心苷更优越的强心功能,它不但使心肌收缩更有力,而且使心肌舒张更彻底,从而大大的提高心肌工作效率。虎杖苷具有降低全血粘度，王瑜等[4]采用大鼠急性血瘀模型,以全血高切变率及低切变率粘度值、红细胞压积值、血小板粘附率、纤维蛋白原含量、血浆粘度为观察指标,探讨了虎杖苷降低急性血瘀模型大鼠血液粘度的作用。结果显示虎杖苷可以显著降低模型大鼠的纤维蛋白原含量和血小板粘附率,其药效对血浆粘度降低所致全血粘度降低比其它原因所致更显著,它主要通过降低血浆粘度来降低全血粘度从而显著改善大鼠血液循环。虎杖苷对血管平滑肌细胞(VSMC)的作用，PD对细胞内钙、pH有双向调节作用。正常情况下PD既促进VSMC外钙离子进人细胞内,又能诱导细胞内钙释放,增加细胞内游离钙;同时升高pH以提高血管张力。休克时降低细胞内钙浓度及降低细胞内pH以降低血管张力,使血管扩张;能通过促进细胞外钠离子内流使用细胞去极化来调节血管,其作用可能与钠、钾通道开放有关,并受肾上腺素能受体、H2受体系统及鸟苷酸环化酶系统的反向调节[5]。虎杖苷用于防治脑缺血，采用改良的线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO)研究白藜芦醇苷对大鼠局灶性脑缺血的保护机制,结果发现PD能减轻脂质过氧化反应,降低缺血脑组中丙二醛(MDA)含量、提高体内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化(GSH-PX)及过氧化氢酶(CAT)活性,抑制或减轻脑水肿形成,保护细胞膜功能,减轻缺血神经元功能损害,对局灶性脑缺血损伤具有明显的保护作用,18 这表明PD对大鼠局灶性脑缺血有明显的保护作用,其机制可能是通过有效的拮抗自由基损伤,提高脑组织抗氧化能力来实现的[6]。另外,陈文斗等[7,8]观察了白藜芦醇苷注射液对大鼠全脑缺血再灌注损伤脑保护作用的剂量依赖性关系,白藜芦醇苷注射液7.5、15、30mg/kg组均舌下静脉给药,结果显示白藜芦醇苷注射液各剂量组大鼠大脑右半球含水量明显低于模型组,并均能明显升高脑组织中SOD活性,降低MDA含量,减少乳酸的聚积,抑制单胺氧化酶活性,且呈剂量依赖趋势。表明白藜芦醇苷注射液能显著减轻脑缺血再灌注损伤引起的氧自由基损害,减少过氧化脂质的形成,并且可以减轻脑水肿,从而改善脑组织微循环及缺血、缺氧。王月刚等[9]研究表明PD可以降低缺血缺氧损伤后升高的血管平滑肌细胞(VSMC)胞浆蛋白激酶(PKC)活性,并促进PKC的正常转位,使病理性PKC异常改变恢复到接近正常,这可能是PD防治脑缺血的分子机制之一。虎杖苷具有抗血小板聚集和改善微循环作用，单春文等[10]研究发现PD在体内外都有抑制花生四烯酸(AA)、二磷酸腺着(ADP)和肾上腺素(AD)诱导的兔血小板聚集作用;其抑制强度随着PD浓度的降低而减弱,存在量效关系,这对防治血栓栓塞性疾病有一定的应用价值。另外注射PD,可使烧伤大鼠的心输出量恢复至烧伤前的91%,心室功能达10%,全身外周阻力恢复到接近正常,大鼠成活率明显提高。主要原因是PD静脉注射能促进微循环中出现动脉血流,减轻烧伤后微血栓形成,改善微循环[11]。虎杖苷具有收缩心肌细胞作用，用内毒素(LPS)刺激心肌细胞使细胞搏动减弱,收缩频率变小,甚至停跳,表明LPS可在细胞水平直接引起心肌细胞的收缩力减弱。当LPS损伤的心肌细胞给予虎杖苷处理后发现,PD不仅可以使肾上腺素能受体(β-AR)功能恢复数目Bmax以及与配体的亲和力Kd都恢复至接近正常),而且荧光抗体标记的β1-AR结果显示,PD能使减少的β-AR整体数目上升。这两方面的实验结果充分说明,PD调节心肌细胞收缩性的作用是与影响β-AR通路密切相关的[12,13]。　虎杖苷有保护肝脏,抑制类脂质过氧化物在肝脏堆积的作用。黄兆胜等[14]研究PD对CCl4损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用,发现它能有效地保护损伤的肝细胞,在1xl0-7-1xl0-4mmol/L浓度范围内使细胞存活率显著提高,lx10-5mmol/L使肝细胞存活率达88.7%,接近于正常培养肝细胞水平[15]。　虎杖的临床应用有清热活血、利胆退黄之功,常用于胆囊炎、胆石症、急性肝炎、妊娠期胆汁郁积症、高脂血症、脂肪肝等疾患，尤其适用于湿热瘀结者。如丁显春等[16,17]18 近年研究表明，虎杖中的主要成分虎杖苷(PD)及有效成分白藜芦醇甙有很强的抑制脂质过氧化作用而保护肝细胞。　虎杖微辛，可以透邪外出；苦寒则能清热利湿，但不甚苦,而不致败胃伤中；既入气分,又可入血分，兼有清气凉血活血之长，既能利小便，又可以通腑，具疏通之性,导湿热痰火下趋。如此，则对外邪与痰、热、瘀,皆可绾照，一药而兼数长，皆深合肺炎病理者也。在既往文献中,有单用虎杖干品500g，加水5000ml煎至1000ml，1日3次，每次100ml，用后体温在24h内退至正常，胸透肺部炎症亦吸收，疗程平均9d的报道。现代药理研究，虎杖对多种细菌、病毒以及钩端螺旋体都有抑制作用，此外还有镇咳、平喘、化痰、缓泻通便、利尿的作用。　肖厚安等[18]应用虎杖烫伤液治疗2200例烧伤患者，效果满意。根据临床疗效观察虎杖烫伤液对金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌抑菌作用较强。其中虎杖有效成份为黄酮类及综合型鞣质，具活血化瘀，止痛，收敛的功效。此药对中、小面积烧伤有明显的止痛消炎、收敛、防腐,促进上皮生长,减少烧伤后疤痕增生的特点,为治疗中小面积烧伤的理想外用药物。另刘长广等[19]采用虎杖内服外洗的方法治疗四肢骨折病人,也取得了显著的效果，虎杖为活血药物,能活血祛瘀以通经,又有通络定痛之功。应用虎杖外洗内服，能减轻断端疼痛,改善局部血液循环。配合功能锻炼，大大缩短了骨折的愈合时间，减少或避免骨折迟缓愈合、不愈合及关节强直等并发症,且药源广，价廉方便，不良反应小，很值得推广。　临床研究表明，虎杖治疗急性上消化道出血，具有显著疗效，总有效率为96.87%,其疗效明显优于西药对照组，具显著性差异(P<0.01)，且止血时间较短，平均2.86d。机理:虎杖可增加血小板和纤维蛋白原，缩短凝血时间、凝血活酶时间从而促进内凝血、抗纤溶、局部止血。祛瘀止血、增加大肠蠕动，有利于肠内血的排除,而不激惹胃、十二指肠与小肠,对出血病灶无妨[20]。虎杖对急性上消化道出血具有显著的止血作用，可能为蒽醌类衍生物与鞣质的双重作用[21,22]。张斌[23]等运用虎杖清肝汤治疗慢性乙型肝炎，结果显示虎杖清肝汤对慢性乙型肝炎有较好的临床疗效和抗肝纤维化作用郭小平[44]等运用金虎退黄汤治疗重度黄疸型肝炎32例，结果显示金虎退黄汤退黄效果明显。刘统峰[25]自拟参虎调肝汤合拉米呋啶治疗慢性乙型肝炎70例疗效观察，结果：临床基本治愈36例，显效20例，好转9例，无效5例，总有效率92.9%。曹文等[26]18 应用复方虎杖清热胶囊治疗风热型急性上呼吸道感染30例，并与用感冒退热冲剂治疗的20例作对照观察，临床研究表明，复方虎杖清热胶囊治疗急性上呼吸道感染风热证疗效好，对主症起效快，并有明显的改善白细胞异常及降低体温的作用，差异无统计学意义。陈晓莉[27]等比较虎杖片与辛伐他汀治疗高脂血症的疗效，将高胆固醇血症患者120例，随机分为两组，分别服用虎杖片和辛伐他汀，疗程均2个月，并观察治疗前后胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、动脉硬化指数等指标变化。结果：虎杖片和辛伐他汀治疗高脂血症的总有效率分别为91.7%和95%，差异无统计学意义，虎杖片降脂疗效与辛伐他汀相近。虎杖对复发性口腔溃疡、胆石症、慢性前列腺炎、男性不育、阑尾周围脓肿、小儿过敏性紫癜、褥疮及心脑血管疾病，疗效显著[28]。目前虎杖的药源主要来自野生资源,药材因产地、生长年限、生长环境及采收时间的不同,品质参差不齐,质量稳定性差。应加强虎杖资源调查、生物学特性、人工繁育技术、种质的遗传多样性、生态因子与品质相关性、优良种质的收集和筛选等方面的研究工作,为建立规范的虎杖生产基地,实现虎杖资源的可持续利用奠定基础。同时尚需更进一步对虎杖的品质评价体系进行系统研究,建立切实可行的评价方法和标准。在药效研究方面近年有较多的实验研究的报道,然在临床药理学、毒理学、药代动力学等方面尚缺乏系统规范的研究。本论文的研究目的：研究超临界CO2萃取压力、温度、时间和携带剂甲醇的添加量对虎杖茎中虎杖苷提取的影响，高效液相色谱、紫外分光光度法检测虎杖苷的含量，并以虎杖苷的提取率为参考指标，通过正交实验方法对超临界萃取法萃取取虎杖茎中虎杖苷的最佳提取参数进行探讨。1材料与方法1．1材料、仪器与试剂仪器：LC3600高效液相色谱仪系统(北京凯奥科技发展有限公司）、UV3600紫外检测器（北京凯奥科技发展有限公司）、超越3000色谱工作站（浙江大学智能信息研究所）)FY121-50-01型超临界CO2萃取装置(南通市飞宇石油科技开发有限公司)TDL—5Z高速台式离心机(长沙星科有限公司)FSJ-114植物标本粉碎机（牧渔业扶沟科技仪器厂）超低温冰箱（中科美菱）FD—1冷冻干燥机（北京德天佑科技发展有限公司）18 AUY220电子分析天平(SHIMADZUCORPORATONJAPAN)202-1A型电热恒温干燥箱（上海东星建材试验设备有限公司）HH-S数显恒温水浴锅（金坛市正基仪器有限公司）试剂：无水乙醇为分析纯；无水甲醇为色谱纯、萃取剂；ddH2O虎杖苷对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用)实验材料：虎杖（采于湖南省邵阳市）1．2对照品溶液的制备精密称取虎杖苷对照品4.00mg,置10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,得浓度为0.4mg.mL-1的对照品Ⅰ液。分别精密吸取对照品Ⅰ液5mL、2.5mL、1.25mL、0.625mL、0.03125mL放入5个10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，这样就分别得到了0.2mg/mL、0.1mg/mL、0.05mg/mL、0.025mg/mL、0.0125mg/mL五种浓度的标样。1．3标准曲线的绘制用紫外分光光度计检测不同浓度虎杖苷标样的OD值（检测波长：306nm），绘制标准曲线。高效液相色谱检测虎杖苷，绘制标准曲线：色谱柱：Nucleosil-CN分析柱(4.6mm×250mm×50mm)流动相:无水甲醇；流速:1.0mL/min；检测波长:306nm；柱温:室温；进样量:20μL；数据处理为外标法峰面积定量，以进样量(X)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线。1．4超临界二氧化碳流体萃取工艺流程将虎杖按根茎液分类晒干，粉碎，过60目筛，备用。称取100g虎杖茎粉装入500mL的不锈钢萃取釜中，开启主泵，达到设置条件，将虎杖茎粉静态萃取30min，再开启泵动态萃取，萃取完毕后即泻压关机，得到萃取液。1．5萃取物中虎杖苷含量的测定将所得萃取液处理后冷冻干燥后，将萃取物粗品用甲醇定容于50mL容量瓶中，用高效液相色谱外标法测定萃取粗品中虎杖苷含量，测定条件为：色谱柱，YWG-C18分析柱(4.6mm×250mm,10μm)；流动相:无水甲醇；流速:1.0mL/min；检测波长:306nm；柱温:室温；进样量:20μL。18 1．6单因素试验1．6．1携带剂甲醇的添加量对虎杖苷提取率的影响称取虎杖茎粉100g，在萃取温度25℃，萃取压力10Mpa，萃取时间20min条件下，分别加入携带剂甲醇用量50mL、75mL、100mL，进行超临界二氧化碳流体萃取，提取液用HPLC进行测定。1．6．2萃取时间对虎杖苷提取率的影响称取虎杖茎粉100g，在萃取温度30℃、萃取压力20Mpa、携带剂用量50mL，萃取时间分别为20min、40min、60min,进行超临界二氧化碳流体萃取，提取液用HPLC进行测定。1．6．3萃取温度对虎杖苷提取率的影响称取虎杖茎粉100g，在萃取压力10Mpa、萃取时间20min、携带剂用量50mL，萃取温度分别为25℃、30℃、35℃,进行超临界二氧化碳流体萃取，提取液用HPLC进行测定。1．6．4萃取压力对虎杖苷提取率的影响称取虎杖茎粉100g，在萃取温度30℃、萃取时间60min、携带剂用量50mL，萃取分别为压力10Mpa、12Mpa、15Mpa,进行超临界二氧化碳流体萃取，提取液用HPLC进行测定。1．7最佳萃取工艺条件实验设计在单因素试验结果的基础上,以虎杖苷提取率为主要考察指标,选定四因素三水平按L9(34)正交表进行正交实验设计，因素水平安排见表1.1,试验方案见表1.2。表1.1因素水平表Table1.1Factorsandlevels水平Levels因素FactorsA压力MpaB温度℃C时间minD携带剂（甲醇）mlPressureTemperatureTimepresoaker110252050212304075315356010018 表1.2　试验方案表Table1.2Resultsoforthogonalexperiment试A萃取压力B萃取温度C萃取时间D萃取剂虎杖苷含量验MPa℃minml/%、mg/g号1102520502103040753103560100412254010051230605061235207571525607581530201009153540502结果与分析2．1虎杖苷对照品标准曲线的绘制分别吸取虎杖苷标样液液0.2mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.025mg/ml、0.0125mg/ml在紫外分光光度计中分别测出五种浓度标样的OD值，绘制标准曲线（图2.1），得回归方程为Y=12.682X+0.0707(R2=0.9984)。图2.1虎杖苷标准曲线（紫外分光光度法）对标样液进行高效液相色谱测定，以进样量(X)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线（图2.2），得回归方程为Y=4E+06X-1333.1(R2=0.997)，结果表明，虎杖苷的进样量在0.02～0.2mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。18 图2.2虎杖苷标准曲线（高效液相色谱法）2．2单因素试验结果2．2．1携带剂的用量对虎杖苷提取率的影响实验结果表明，携带剂用量为75mL时，萃取率较低，携带剂用量为50mL，100mL时，萃取率较高；携带剂用量为50mL时比较适宜。2．2．3萃取时间对虎杖苷提取率的影响实验结果表明，萃取时间对萃取率有影响，萃取率随萃取时间的延长而增大。萃取时间为20min、40min时萃取率较低，萃取时间为60min时，萃取率较高,萃取时间选择60min比较适宜。2．2．3萃取温度对虎杖苷提取率的影响温度分别为25℃、30℃、35℃,进行超临界二氧化碳流体萃取，随着温度的不断升高,虎杖苷萃取率随之增加,30℃虎杖苷萃取率最高,超过30℃时萃取率下降，表明萃取温度选择30℃比较适宜。2．2．4萃取压力对虎杖苷提取率的影响实验结果表明，萃取压力对萃取率有一定影响，在萃取压力10Mpa、12Mpa、15Mpa时，萃取率较低，萃取压力为12Mpa,萃取率较高，所以萃取压力选择12Mpa比较适宜。2．3正交试验结果直观分析2．3．1CO2超临界萃取物紫外分光光度检测18 将不同条件下CO2超临界萃取的提取液用紫外分光光度计测定OD值，根据标准曲线计算不同条件下CO2超临界萃取物中虎杖苷的含量，结果见表2.3。表2.3紫外分光光度法测定虎杖苷的正交试验直观分析表Table2.3Orthogonalexperimentdirectanalyse实验号萃取压力（A)/Mpa萃取温度（B）/℃萃取时间（C)/min萃取剂（D)/ml虎杖苷含量(mg/g)1102520500.59482103040750.085331035601000.582441225401000.48855123060501.35016123520750.01897152560750.471781530201000.82819153540500.4283K11.26151.55501.44182.3732K21.85752.26251.00110.5749K31.72811.02962.40421.8990R0.59601.23291.40311.7983各参数代表的意义：Κn分别表示以n水平试验的提取率之均数；R表示因素的极差，即各因数的Κ1、Κ2、Κ3中最大数与最小数之差。2．3．2超临界CO2萃取物高效液相色谱检测将不同条件下CO2超临界萃取的提取液用高效液相色谱检测，数据处理为外标法峰面积定量，根据标准曲线计算不同条件下CO2超临界萃取物中虎杖苷的含量见表2.4，高效液相色谱图分别见图2.3～图2.11。由表2.4数据可知：D因素(萃取剂)的R值最大，因素的极差越大，说明该因素的变动对结果的影响越大，即D因素（萃取剂）为最重要的因素。根据表中R值的大小，排列出试验因素的主次顺序：主　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　次D(萃取剂)C(萃取时间)B(萃取温度)A(萃取压力)从表2.4可以看出，D因素Kn值中，K1最大，说明其最优水平为1[萃取剂醇的添加量是50mL]，同理C因素最优水平为3[萃取时间是60min]，B因素最优水平为2[萃取温度是30℃]，A因素最优水平为2[压力为12Mpa]，18 从正交实验结果可以得出：最佳组合为D1C3B2A2，即萃取剂甲醇的添加量为50mL，萃取时间是60min,萃取温度30℃，萃取压力是12Mpa。表2.4高效液相色谱测定虎杖苷的正交试验直观分析表Table2.4Orthogonalexperimentdirectanalyse实验号萃取压力（A)/Mpa萃取温度（B）/℃萃取时间（C)/min萃取剂（D)/ml虎杖苷含量(mg/g)1102520501.10212103040750.714431035601000.898641225401001.06495123060502.97886123520750.80597152560751.069981530201001.09819153540500.9395K12.71513.23693.00615.0204K24.84964.79132.71882.5902K33.10752.64404.94733.0616R2.13452.14732.22852.4302各参数代表的意义：Κn分别表示以n水平试验的提取率之均数；R表示因素的极差，即各因数的Κ1、Κ2、Κ3中最大数与最小数之差。图2.310Mpa、25℃、20min、携带剂50mL萃取条件下的样品HPLC图18 图2.410Mpa、30℃、40min、携带剂75mL萃取条件下的样品HPLC图图2.510Mpa、35℃、60min、携带剂100mL萃取条件下的样品HPLC图18 图2.612Mpa、25℃、40min、携带剂100mL萃取条件下的样品HPLC图图2.712Mpa、30℃、60min、携带剂50mL萃取条件下的样品HPLC图18 图2.812Mpa、35℃、20min、携带剂75mL萃取条件下的样品HPLC图图2.915Mpa、25℃、60min、携带剂75mL萃取条件下的样品HPLC图18 图2.1015Mpa、30℃、20min、携带剂100mL萃取条件下样品HPLC图图2.1115Mpa、35℃、40min、携带剂50mL萃取条件下样品HPLC图18 3结论虎杖苷的提取方法很多，主用稀醇回流提取，也有采用超声提取，微波提取等方法，但前面的各种方法提取率并不高。本实验主要是应用超临界二氧化碳流体萃取虎杖茎中的虎杖苷，采取正交试验法，进行了虎杖超临界二氧化碳流体萃取工艺的优化，是提取虎杖茎中虎杖苷很有效的方法。超临界二氧化碳流体萃取虎杖茎中的虎杖苷各因素影响程度(由大至小)为：萃取剂，萃取剂时间，萃取温度，萃取压力。最佳条件为:萃取剂甲醇的添加量50mL，萃取时间是60min，萃取温度30℃，萃取压力是12Mpa。18 参考文献[1]高守红,杨少麟,范国荣.虎杖苷的研究进展[J].药学实践杂志,2005,23(3):145-147.[2]舒仕瑜,卢仲毅,王兴勇.白藜芦醇苷生物活性及药理作用[J].儿科药学杂志,2002,8(1):9-11.[3]金春华,刘杰,黄绪亮,等.虎杖苷对心肌细胞收缩性的影响[J].中国药理学通报,2000,16(4):400.[4]王瑜,薛剑,孙晓东,等.虎杖苷降低急性血瘀模型大鼠血液粘度的研究[J].中国药房,2004,15(5):275-277.[5]金春华,刘杰,黄绪亮,等.虎杖苷对VSMC内钙信号的调节机制初探[J].中国药理学通报,2000,16(2):151.[6]黄斌,王兴勇,匡凤梧,等.白藜芦醇苷对大鼠局灶性脑缺血的保护作用[J].中国急救医学,2005,25(3):192-193.[7]陈文斗,孙莉莎,徐江平.白藜芦醇苷对全脑缺血再灌注大鼠脑保护的剂量依赖性作用[J].中国临床康复,2005,9(25):152-154.[8]郭胜蓝,孙莉莎,欧阳石,等.虎杖苷对大鼠急性脑缺血再灌注损伤的保护作用[J].时珍国医国药,2005,16(5):414-416.[9]王月刚,金春华,黄海潇,等.虎杖苷对缺血缺氧下平滑肌细胞蛋白激酶C的影响[J].中国药理学通报,2005,21(4):461-464.[10]单春文,杨素琴,何菌苔,等.3,4,5-三羟基－3－β-单－D－葡萄糖苷在体外对兔血小板聚集和产生血栓素B2的影响[J].中国药理学报,1990,11(6):527.[11]王瑜,孙晓东,于小江,等.虎杖苷抗血栓形成及改善微循环的研究上[J].陕西中药,2003,24(7):663.[12]赵清,黄海潇,金春华.虎杖苷对LPS作用下心肌细胞肾上腺素能受体的调节作用[J].中国药理学通报,2004,20(7):769-772.[13]陈莉延,梁标,金勋杰,等.白藜芦醇苷对大鼠慢性常压低氧性肺动脉高压的防治作用[J].实用医学杂志,2002,18(8):807-809.[14]黄兆胜,王宗伟,刘明平,等.虎杖苷对CCl4、损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用[J].中国药理学报,1998,14(6):543.[15]张明静,王兴勇,卢仲毅.白藜芦醇苷对内毒素休克肺损伤大鼠失衡的干预作用[J].儿科药学杂志,2003,9(3):1-4.[16]汤毅,邹恒琴.虎杖的化学及药理作用研究概况[J].中药材,1993,16(1):42.[17]黄兆胜,王宗伟,刘明平,等.虎杖苷对CCl4损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用[J]18 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