DB34T1034-2009动物组织中呋喃唑酮和磺胺类药物的残留测定高效液相色谱法.pdf 7页

'DB34安徽省地方标准DB34/T1034—2009动物组织中呋喃唑酮和磺胺类药物的残留测定-高效液相色谱法2009-10-21发布2009-10-21实施安徽省质量技术监督局发布 DB34/T1034—2009前言本标准的附录A为资料性附录。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准由起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)、安徽农业大学。本标准起草人：汤春莲、许世富、丁作坤、阮祥春、丁在亮、明文庆、陈文帮、刘发全。本标准首次发布。标准分享网www.bzfxw.com免费下载 DB34/T1034—2009动物组织中呋喃唑酮和磺胺类药物的残留测定-高效液相色谱法1范围本标准规定了猪、牛、鸡、鸭的肌肉、肝脏、肾脏中呋喃唑酮、磺胺类药物检验的制样和高效液相色谱法（HPLC）测定方法。本标准适用于猪、牛、鸡、鸭的肌肉、肝脏、肾脏中呋喃唑酮、磺胺类药物的定量检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试样制备动物肌肉、肝脏、肾脏等动物组织，去筋后切成小块，制成糜状后，于－18℃以下温度冷冻保存。4原理www.bzfxw.com样品以乙腈提取，正己烷脱脂，然后用固相萃取柱净化，分步溶剂洗脱，最后用HPLC法进行分析。5试剂和溶液5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级水的规定。5.2呋喃唑酮对照品纯度≥98.0%。5.3磺胺嘧啶(SD)对照品纯度≥98.0%。5.4磺胺二甲嘧啶（SM2）对照品纯度≥98.0%。5.5磺胺间甲嘧啶(SMM)对照品纯度≥98.0%。5.6磺胺甲噁唑(SMZ)对照品纯度≥98.0%。5.7磺胺喹噁啉(SQ)对照品纯度≥98.0%。5.8甲醇，色谱纯。5.9乙腈，色谱纯。5.10乙腈。5.11无水硫酸钠。5.12磷酸。5.13正丙醇。5.14正己烷。5.15磷酸溶液：取1.4mL磷酸加水至1000mL。5.16磷酸-乙腈溶液：(5：95)。5.17流动相：磷酸溶液-乙腈(70：30)。5.18固相萃取柱：碱性氧化铝柱，2g/12mL，或相当者。 DB34/T1034—20095.19磺胺类药物标准贮备液（1mg/mL）：准确称取SD、SM、SMM、SMZ、SQ对照品各100mg，用甲醇溶解并稀释至100mL量瓶中，贮存于0℃～8℃冰箱中，有效期90d。5.20呋喃唑酮标准贮备液（1mg/mL）：准确称取呋喃唑酮对照品100mg，用甲醇溶解并稀释至100mL量瓶中，贮存于0℃～8℃冰箱中，有效期90d。5.21呋喃唑酮、磺胺类药物标准工作液：取呋喃唑酮贮备液、磺胺类药物贮备液适量，用流动相稀释成含呋喃唑酮、磺胺类药物0.005(0.01)μg／mL、0.01(0.02)μg／mL、0.05(0.1)μg／mL、0.1(0.2)μg／mL、0.5(1.0)μg／mL的呋喃唑酮、磺胺类药物标准混合溶液。贮存于0℃～8℃冰箱中，有效期7d。6仪器设备6.1高效液相色谱仪，配置二极管阵列检测器或紫外检测器。6.2旋转蒸发仪。6.3超纯水器。6.4冷冻离心机。6.5振荡器。6.6涡旋混合器。6.7分析天平：感量0.00001g，感量0.001g。6.8旋转蒸发仪。6.9鸡心瓶50mL。6.10离心管：50mL，10mL。6.11固相萃取装备。7测定步骤www.bzfxw.com7.1试样提取称取(5±0.05g)均质动物组织样品于50mL离心管中，加入20mL乙腈和4g无水硫酸钠，用玻璃棒充分搅拌以防止样品与无水硫酸钠在离心管结块，振荡5min后，置于离心机上以3000r／min离心10min，转移乙腈提取液于分液漏斗中，残渣再用20mL乙腈提取一次，合并两次提取液，转移到已加入20mL正己烷的分液漏斗中，分液并收集乙腈层(下层)，加入5mL正丙醇，40℃旋转蒸发浓缩至干，用流动相5mL溶解，备用。7.2试样净化取固相萃取柱，用3mL磷酸-乙腈溶液活化SPE小柱，加入全部溶解液，过SPE柱，经0.45μm滤膜过滤，待HPLC分析。7.3色谱条件色谱柱：C18(4.6×250mm，5μm)；流动相：磷酸溶液-乙腈(70：30)；柱温：30℃；进样：20μL；流速：1.0mL／min；使用二极管阵列检测器选择365nm和270nm同时测定。7.4定量测定取呋喃唑酮、磺胺类药物工作液和洗脱收集液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。8结果计算标准分享网www.bzfxw.com免费下载 DB34/T1034—2009按照下式计算试样中各种药物残留的含量：A×Cs×V×1000X=…………………………………………………………………（1）As×m式中：X——试样中各种药物的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；A——试样溶液对应的色谱峰面积响应值；As——标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V——加入流动相的体积，单位为毫升（mL）；Cs——标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；m——试样质量，单位为克（g）；平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度9.1灵敏度本方法呋喃唑酮和磺胺类药物的检出限分别为25.0μg/kg和50.0μg/kg。9.2准确度本方法回收率均为80％～120％。9.3精密度本方法的批内变异系数CV≤10％，批间变异系数CV≤15％。www.bzfxw.com DB34/T1034—2009附录A（资料性附录）色谱图A.1磺胺类药物对照溶液色谱图www.bzfxw.com图A.1磺胺类药物对照溶液色谱图A.2呋喃唑酮对照溶液色谱图图A.2呋喃唑酮对照溶液色谱图标准分享网www.bzfxw.com免费下载 DB34/T1034—2009A.3样品中添加磺胺类药物色谱图图A.3样品中添加磺胺类药物色谱图A.4样品中添加呋喃唑酮色谱图www.bzfxw.com图A.4样品中添加呋喃唑酮色谱图注：1——磺胺嘧啶(SD)2——磺胺二甲嘧啶（SM2）3——磺胺间甲氧嘧啶（SMM）4——呋喃唑酮5——磺胺甲噁唑（SMZ）6——磺胺喹恶啉(SQ)'