水处理生物实验细菌淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定 3页

南昌大学实验报告学生姓名：学号：专业班级：实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩：实验六细菌淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定一、实验目的：通过对淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定，加深对酶和酶促反应的感性认识。二、实验基本原理：酶是生物细胞产生的、能在体内或体外起催化作用的生物催化剂，是一类具有活性中心和特殊构象的生物大分子。生物体内的一切化学反应，几乎都是在酶的催化下进行的。微生物的酶按它所在细胞的部位分为胞外酶、胞内酶即表面酶。亦可根据其催化作用的底物的不同而命名，如淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等等。本实验对淀粉酶和过氧化氢酶（亦称接触酶）进行定性测定。细菌淀粉酶能将遇碘呈蓝色的淀粉水解为遇碘不显色的糊精，并进一步转化为糖。淀粉水解后，遇碘不再显蓝色。过氧化氢酶能将过氧化氢水解为水和氧。三、主要仪器设备及耗材：1、菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌；2、肉膏胨、淀粉琼脂培养基；0.2％淀粉溶液、革氏碘液、3～10％过氧化氢、枯草芽孢杆菌培养液；3、试管（18mm×180mm）、试管架、培养皿（φ120mm）、接种环四、实验步骤：（一）枯草杆菌培养液中淀粉酶的测定1、取4支干净的试管，按0(对照)、1、2、3编号。放在试管架上备用。2、往1、2、3号试管中分别加入5、10、15mL的枯草杆菌培养液，再往1、2号试管内分别加入10、5mL蒸馏水。往0（对照）号管内加入15mL蒸馏水。3/3\n3、分别往1、2、3号试管中加入0.2％淀粉溶液若干滴，迅速摇匀并记下反应的初始时间。4、迅速往以上4个试管内分别滴加若干滴碘液，迅速摇匀，这时各管均呈蓝色。5、观察结果。注意各管的变化，记下各管蓝色完全消失的时间，并对结果进行分析。（二）细菌淀粉酶在固体培养基中的扩散实验1、将肉膏胨淀粉琼脂培养基加热融化，待冷至45℃左右倒入无菌培养皿内（每皿约10mL），共倒5个，静置待冷凝即成平板。2、在无菌操作条件下，所有的平板在培养皿底部贴好标签后，用接种环分别挑取枯草杆菌和大肠杆菌分别在2个平板上点5个点。3、再打开一个平板，在空气中放置30分钟，盖上培养皿盖。4、剩余的两个平板处理如下：一个涂布接种土壤悬液，另一个让学生用手在平板里按手印，或取硬币在平板里按一下，或打开培养皿盖摇头、咳嗽等，所有平板倒置于37℃恒温培养箱内培养24-48小时。5、观察结果，取出平板，分别在5个平板内菌落周围滴加碘液，观察菌落周围颜色的变化。并记录结果。（三）过氧化氢酶的定性测定1、将培养好的枯草杆菌和大肠杆菌斜面各1支放在试管架上。2、用滴管吸取过氧化氢滴加入两管菌种斜面上。3、分析结果，把所观察到的现象记录下来，进行分析。五、实验数据及处理结果表一枯草杆菌培养液中淀粉酶的测定结果记录与分析试管编号0号1号2号3号蓝色消失时间结果分析：表二细菌淀粉酶在固体培养基中的扩散实验结果记录与分析培养皿编号1号2号3号4号5号3/3\n菌源淀粉酶产生情况注：产生记为阳性“+”，不产生记为阴性“－”。结果分析：表三过氧化氢酶的定性测定结果记录与分析菌种大肠杆菌枯草芽孢杆菌过氧化氢酶注：有记为阳性“+”，无记为阴性“－”。结果分析：六、实验体会及对实验改进的建议3/3