Pb2＋对城市污水处理厂污泥中苏云金芽孢杆菌发酵的影响-论文 8页

第25卷第8期环境科学研究Vo1．25，No．82012年8月ResearchofEnvironmentalSciencesAug．，2012常明，摆亚军，孙启宏，等．Pb对城市污水处理厂污泥中苏云金芽孢杆菌发酵的影响[J]．环境科学研究，2012，25(8)：933-940．CHANGMing，BAIYajun，SUNQihong，eta1．EffectofleadionsonBacillusthuringiensisfermentationwithsewagesludgeasmedium[J]．ResearchofEnvironmentalSciences，2012，25(8)：933—940．Pb2+对城市污水处理厂污泥中苏云金芽孢杆菌发酵的影响常明，摆亚军，孙启宏，陈晨，倪晋仁1．中国环境科学研究院，环境基准与风险评估国家重点实验室，北京1000122．北京大学环境工程系，教育部水沙科学重点实验室，北京100871摘要：以城市污水处理厂污泥为培养基，研究了添加Pb对Bt(Bacillusthuringiensis，苏云金芽孢杆菌)生长和晶体蛋白合成的影响，同时分析了Bt发酵过程中有效态Pb含量(以P计)的变化，并采用FTIR(傅立叶红外光谱)和XPS(x射线光电子能谱)，初步探讨了Pb。在Bt表面的作用机制．结果表明：污泥培养基在支持Bt生长代谢和降低重金属有效态含量方面均优于商用培养基，当初始P(Pb)高达400mg／L时，与未添加Pb相比，污泥培养基中Bt活菌数与晶体蛋白产量约分别下降48％和54％，而商用培养基中约分别下降82％和75％，证实了污泥作为Bt发酵培养基的可行性；Bt对Pb。有较好的耐受性，当P(有效态Pb)在80mg／L以下时，Bt生长代谢不会受到显著影响．光谱学分析表明，Bt对Pb“有少量吸附，从而降低Bt发酵过程中Pb的生物有效性，吸附位点主要为羟基，部分C—O和S—O也参与了吸附反应．关键词：污泥；苏云金芽孢杆菌；铅；生物有效性；吸附中图分类号：X705文献标志码：A文章编号：1001—6929(2012)08—0933—08EffectofLeadIonsonBacillusthuringiensisFermentationwithSewageSludgeasMediumCHANGMing，BAIYa．jun，SUNQi．hong，CHENChen，NIJin．ren1．StateKeyLaboratoryofEnvironmentalCriteriaandRiskAssessment，ChineseResearchAcademyofEnvironmentalSciences，Beijing100012，China2．KeyLaboratoryofWaterandSedimentSciences，MinistryofEducation，DepartmentofEnvironmentalEngineering，PekingUniversity，Beijing100871，ChinaAbstract：TheeffectsofleadionsonthegrowthcurvesandcrystalproteinssynthesisofBacillusthuringiensis(Bt)wereinvestigatedinsewagesludge．ThevariationsofavailableleadwereanalyzedduringBtfermentation，andtheadsorptionmechanismofleadionsonBtcellswasalsodiscussedusingFouriertransforminfraredspectroscopyandX—rayphotoelectronspectroscopy．TheresultsshowthatthesewagesludgewassuperiortocommercialmediuminsupportingBtgrowthmetabolismandreducingtheavailableheavymetals．WiththeinitialconcentrationofPb“upto400mg／L，thenumberofviablecellsandconcentrationofcrystalproteindecreased48％and54％respectivelyinsewagesludge，whilethedecreasingrateswere82％and75％respectivelyinthecommercialmedium．TheseresultsconfirmthefeasibilityofthesludgeasaBtfermentationmedium．TheresultsalsoindicatedthatBtcouldresistefficientlywithavailableleadconcentrationashighaft80mg／L．SpectroscopyanalysisindicatedthatBtcellscouldreducethebioavailabitityofleadbyadsorptionoftheleadionsontheirsurfaces．Themainadsorptionsiteswere收稿日期：2011—12—20修订日期：2012—05—04hydroxylgroups，andpartsofcarbonylandsulfhydrylgroups．基金项目：国家自然科学基金项目(41130743)；国家水体污染控制与Keywords：sewagesludge；Bacillusthuringiensis；lead；治理科技重大专项(2009ZX07208—002—001)bioavailability；adsorption作者简介：常明(1981一)，女，黑龙江哈尔滨人，助理研究员，博士，主要从事污泥资源化研究，changming@craes．org．en．·责任作者，倪晋仁(1965一)，男，山西江阴人，教授，博士，博导，主要Bt(Bacillusthuringiensis，苏云金芽孢杆菌)是一从事水沙环境与水污染控制研究。nijinren@ice．pku．edu．ca类能在代谢过程中产生伴孢晶体的革兰氏阳性细菌，\n934环境科学研究第25卷其制剂是目前世界上产量最大的微生物杀虫剂，广泛为培养基，通过与商用培养基在添加Pb“后Bt的生应用于防治农、林和果树害虫、仓储害虫以及医学昆长代谢情况，以及Pb在2种培养基中有效态含量作虫⋯．与化学杀虫剂相比，Bt制剂具有选择性强、对比较，考察污泥用于Bt发酵时对重金属的适应能力，人畜无害、环境友好等优点，尽管目前微生物杀虫剂同时利用光谱学分析初步探查Pb与Bt菌体吸附只占整个农药市场份额的3％～5％，但据世界卫生组的作用位点．织(WHO)预测，由于有机农业、森林防治等需求驱动，1材料与方法微生物杀虫剂将以每年10％～15％的速度递增，至1．1供试菌株2020年生物杀虫剂的市场份额将增至20％．Bacillusthuringiensissubsp．kurstakiHD-1(BtHD一城市污水处理厂污泥(简称污泥)是一种有益的1)引自中国农业科学院．废弃资源，其中含有丰富的碳、氮、磷等营养物质以及1．2供试污泥微生物生长所需的微量元素，曾一度成为污泥资供试污泥采自北京市高碑店污水处理厂，为未经源化的研究热点，包括生物堆肥、生物产氢’、L．消化的浓缩污泥．采回的污泥贮存在25L聚乙烯桶乳酸制备以及根瘤菌培养等，以污泥作为Bt的中，置于4oC冰箱中保存．理化性质见表1，分析方法发酵原料，其可行性也已得到证实¨“．然而，随着参照APHA的《水和废水标准监测方法》．该污泥各种污泥减量化技术的开发与应用，污泥中重金属污的总糖和蛋白质含量较为丰富，C／N约为l0，为Bt生染问题引起广泛关注．因此，在以污泥为原料生长与增殖提供了有利的物质基础．试验用污泥培产Bt生物杀虫剂的过程中，重金属影响成为新的研养基是将该污泥稀释至p(固形物)为2×10mg／L，灭究课题．重金属在污泥农用过程中的环境风险主要菌后无菌操作调节pH为7．0．4-0．1，用于Bt发酵．表现为在植物体内富集，随生物链传递，进而危害人表1供试污泥的理化性质类健康，因此关键是其生物有效性．重金属生物有效Table1Physical—chemica】propertiesofselectedsewagesludge性与重金属形态密切相关，按照在不同溶剂中的参数数值参数数值溶解性可将重金属存在形态分为可交换态、碳酸盐结pH6．86W(总磷)／(mg／g)8．21合态、铁锰氧化物结合态、有机结合态和残渣态¨．P(总固体)，(mg／L)3．8×10(NH一N)，(mg／g)0．20P(挥发性固体)／(mg／L)1．72×10(PO-P)／(mg／g)290一般认为重金属可交换态、碳酸盐结合态和铁锰氧化P(悬浮固体)／(mg／L)3．55×10(总糖)／(mg／g)500物结合态容易在土壤溶液中与水、有机配体、酸以及P(挥发悬固体)l49104W(蛋白质)／(mg／g)171(mg／L)‘(粗脂肪)／(mg／g)657生物等作用发生迁移，并且可被植物吸收，因此它们．∞(总碳)，(mg／g)280的含量愈高，愈易造成污染危害，被称为有效态．(总氮)，(rng／g)276在评价污泥中重金属的影响时，应主要考虑其有效态含量．1．3对比培养基Pb是污泥中有效态含量较高的重金属，通常其以商用培养基作对比培养基，组分：P(黄豆粉)有效态含量可占其总量的40％左右，由于Pb易15．0g／L，P(葡萄糖)5．0g／L，p(玉米淀粉)5．0g／L，随生物链富集，已成为环境中毒性最强的重金属元素P(K2HPO)1．0g／L，P(MgSO·7H2O)0．3g／L，之一．研究表明，许多微生物可适应含Pb“的生存环P(KH2PO4)1．0g／L，P(FeSO4·7H2O)0．02g／L，境并有一定固铅作用．如Raungsomboon等¨采用蓝P(ZnSO4·7H2O)0．02g／L，P(CaCO3)1．0g／L，灭菌细菌粘球藻(Cyan0bacteriumGloeocapsasp．)去除水后无菌操作调节pH为7．0±0．1，用于Bt发酵．溶液中的Pb“，发现当P(Pb“)在20mg／L以下时，1．4含Pb“发酵培养基的准备Gloeocapsasp．的生长不会受到抑制；Dursun等在称取一定量的Ph(NO)：(北京化学试剂厂，分用黑曲霉(Aspergillusniger)吸附Pb“的研究中也发析纯)配成1．0×10mg／L的Pb储备液，置于4℃现，当初始P(Pb“)在100mg／L时，Aspergillusniger生冰箱中保存．培养基灭菌前，在一系列污泥培养基和长状态良好，对Pb“的吸附量最大．由于Bt在生长商用培养基中添加不同含量的Ph“储备液，使培养代谢过程中可产生伴孢晶体，具有结构上的特殊性，基中的初始P(Pb“)分别为0、50、100、200、400为探索Bt用于重金属固定的可行性，该研究以污泥mg／L，灭菌后无菌操作调节pH为7．0±0．1．\n第8期常明等：P1)对城市污水处理厂污泥中苏云金芽孢杆菌发酵的影响9351．5接种与发酵200目(74m)，采用ESCALab220i—XL型电子光谱对数营养体接种方式，摇瓶发酵．发酵过程仪(英国VG公司)，激发源A1K功率300W，本底中适当间隔取样，采用稀释平板法计活菌数(viable真空10I7Pa．courts，简称VC)。，每板计数在20～300CFU2结果与讨论(colonyformingunits)内有效；同时测定培养基中重2．1添加Ph的污泥与商用培养基中Bt的生长代金属有效态含量变化．48h发酵结束，采用电泳割胶谢情况比色法L263测定晶体蛋白产量．污泥与商用培养基中初始P(Pb)分别为0、50、1．6发酵过程中重金属有效态含量分析100、200、400mg／L时Bt的生长曲线如图1所示．从参考Tarvainen的单一浸提法，摸索出适用于图1(a)可以看出，当污泥培养基中初始P(Pb“)在少量发酵液的重金属有效态浸提方法．浸提液组成：100mg／L以下时，Bt生长几乎不受影响；初始1．0mol／LNHAc+1．0mol／LHAc+0．04mol／Lp(Pb)在200mg／L以上时出现生长缓慢；初始Na，EDTA，pH为4．0．具体操作：取发酵液3mL，加3P(Pb)为400mg／L时对数期生长略有延滞，但BtmL浸提液，振荡2h，然后置于离心机中以4000增殖仍较为迅速，不会受到明显抑制，发酵结束时VCr／min离心15min，将上清液移出适当稀释，用火焰原从不添加Pb时的约7．9×10CFU／mL降至4．1×子吸收光谱仪测定重金属离子含量．10CFU／mL，约下降48％．与之相比，商用培养基中1．7重金属吸附的光谱学分析Bt生长受到的影响较为明显．从图1(b)中可以看样品准备：取初始P(Pb)为200mg／L的液体培出，当商用培养基中初始P(Pb“)在100mg／L以下养基发酵48h得到的Bt晶孢混合物，充分洗涤并冷时，Bt对数期生长几乎不受影响，但发酵后期Bt活菌冻干燥即得到吸附Ph“的Bt菌粉，以不添加Pb“的数有所下降；当商用培养基中P(Pb“)为200mg／L以液体培养基制得的Bt菌粉作对照．上时，Bt对数期生长出现明显延滞，菌体增殖速度明FTIR(傅立叶红外光谱)：分别取一定量的吸附显缓慢，发酵结束时Bt活菌数明显下降；当P(Pb“)或未吸附Pb的Bt菌粉，与KBr混合研磨，压片，放为400mg／L时，VC从不添加Pb“时的6．2×10入样品室，采用FTIR一7600型傅立叶红外光谱仪CFU／mL降至1．1×10CFU／mL，约下降82％．由此可(上海精密仪器厂)在相同的扫描频率下测定红外吸见，当初始P(Pb“)相同时，Bt在污泥培养基中的生收全谱图．长状况明显优于商用培养基．XPS(X射线光电子能谱)：分别取一定量的吸附为进一步考察添加Ph后污泥与商用培养基中或未吸附Pb的Bt菌粉，用玛瑙研钵研磨到细度为晶体蛋白的合成情况，取发酵结束时的发酵液进行电jE暑当UU=：籁籁坦：【匾!}g蜒时间，h时间，h(a)污泥培养基(b)商用培养基—．_'1—’__2—--3—．--4—．r-5初始P(Pb”)／(mg／L)：1-0；2—5O；3～100；4—2OO；5～400．图1Bt在不同初(Pb)的污泥与商用培养基中的生长曲线Fig．1GrowthcurvesofBtinsewagesludgeandcommercialmediumwithdiferentinitialconcentrations0fPb\n936环境科学研究第25卷泳试验，并通过割胶比色测定了晶体蛋13产量．图2ku蛋白被称为原毒素，在碱性条件下其可经蛋白酶为不同初始P(Pb)下污泥与商用培养基发酵结束消化降解为70ku左右的多肽；而65ku的蛋白本身后Bt晶体蛋白的电泳图．从图2可以看出，当菌体就是不包含c端结构的毒蛋白，可以直接在碱性条数量受轻度影响时，晶体蛋13产量已受到明显影响．件下被激活而作用于靶目标．结构的复杂性使得总体来说，晶体蛋白产量随初始p(Pb)的增加而减130ku蛋白更易受到外界环境的影响．少，并且污泥培养基普遍优于商用培养基．Bt晶体蛋经过割胶比色，不添加Pb的污泥与商用培养白在SDS-PAGE电泳图上显示为130和65ku2条蛋基中130ku的晶体蛋白产量分别为790和650白带“．Pb“对晶体蛋白的影响仅限于产量，并不mg／L；受Pb“的影响，初始P(Pb。)为400rng／L时．二影响晶体蛋白的分子组成．Ph对130ku蛋白带影者产量分别降至360和165mg／L，约分别下降54％响较为明显，对65ku蛋白带影响较小．这与晶体蛋和75％．由此可见，当初始P(Pb)相同时，Bt在污白结构有关，130ku蛋白由N端的活性片断和C端泥培养基中的晶体蛋白产量明显高于商用培养基．的结构片断两部分构成．因有结构片段的存在，1302·2Bt发酵过程中Ph有效态含量的变化200ku一*l70ku—ll6ku畔76ku喇嘲_赫53ku罐(a)污泥培养基(b)商用培养基初始p(Pb)，(mg／L)：1～O；2—50；3一l0O；4—200：5—400．图2不同初始p(Pb)下的污泥与商用培养基中Bt晶体蛋白电泳Fig·2CrystalproteinelectrophoresisofBtinsewagesludgeandcommereia1mediumwithdifferentinitialconcentrationsofPb初始P(Pb“)相同时，Bt在污泥与商用培养基中效态含量远低于添加量．当商用培养基中初始的生长和代谢存在较大差异，由此推断Pb在2种培p(Pb“)为50mg／L时，P(有效态Pb)约为40mg／L：养基中的有效态含量可能不同．图3给出了发酵过当初始P(Pb“)为200和400mg／L时，P(有效态Pb)程中污泥与商用培养基中P(有效态Pb)的变化．从相应约为110和120mg／L．随着初始P(Pb)的增图3可以看出，受pH限制，以离子态添加的Ph因加，p(有效态Pb)占初始p(Pb¨)的比例明显下降．有部分直接沉淀析出或被培养基中的物质固定，其有从变化趋势来看，继续增加Pb时，P(有效态Pb)也一3O—基三金2O桶始颧籁妞ql0q时阃，h时间／h(a)污泥培养基(b)商用培养基—_．一I—__一2—_．|__3—_．一4初始P(Pb’)／(nag／L)：l一5O；2一Ioo；3—2OO；4—400．图3Bt在污泥与商用培养基中发酵过程pf有效态Pb)的变化Fig·3VariationofavailablePbcontentinsewagesludgeandcommercialmediumduringBtfermentation\n第8期常明等：Pb对城市污水处理厂污泥中苏云金芽孢杆菌发酵的影响937不会再有明显提高．与商用培养基相比，污泥培养基0一H与N—H的伸缩振动蓝移了50cm～，峰形变宽，中的P(有效态Pb)更低．当污泥培养基中初始峰强变大；一cH的c—H的伸缩振动红移了3am一；P(Pb“)为50—200mg／L时，P(有效态Pb)仅为13～酰胺I带的C—O的伸缩振动、酰胺Ⅱ带的N—H变16mg／L；初始P(Pb“)为400mg／L时，该值约为24形振动和糖醛酸COOH中c—O伸缩振动均蓝移了1mg／L，P(有效态Pb)占初始P(Pb“)的比例不足7％，cm一；酰胺Ⅲ的c—N伸缩振动和P—O伸缩振动蓝移说明污泥本身对Pb¨就有很好的固定作用，Pb在了2am～；糖羟基(一C一0一H)中的C—O振动和污泥中主要以生物无效态存在，并且状态很稳定，不S—O伸缩振动蓝移了6cm～，这些峰的峰型与峰强易向生物有效态转化．可见，污泥培养基不仅在Bt变化不大．从光谱图变化情况看，Bt对Pb“的吸附的发酵水平上优于商用培养基，在降低重金属生物有与蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)和黄孢原毛平革效态含量上也有明显优势，从而降低对Bt生长代谢菌(Phanerochaetechrysosporium)对Pb“的吸附特的影响．性类似，羟基或氨基可能是主要吸附位点，羰基、酰胺综上可以看出，Bt对Pb也有较好的耐受性，当基和糖苷键处也可能有少量吸附．P(有效态Pb)在80mg／L以下时，Bt的生长代谢不会表2Bt菌体吸附Pb前后的红外光谱数据受到显著影响，并且Bt生长代谢的受影响程度与Table2FTIRdataofBtcellsbeforeandafteradsorptiontOPbP(有效态Pb)具有较好的相关性．由于污泥中P(有效态Pb)远低于80mg／L，因此污泥中添加Pb“对Bt生长代谢的影响不大．2．3Pb“在Bt菌体表面的作用机制2．3．1Bt吸附Pb“的FTIR分析对未吸附和吸附Ph“的Bt菌体分别进行FTIR扫描，如图4所示．从图4可以看出，Bt菌体的强吸收峰集中在3650～3200cm和1800～1500cm区域．将谱带进行归属m，主要官能团信息如表2所示．由此推断，Bt菌体表面存在O—H、C—O、一NH：、P一0、S—O等蛋白质和糖类的特征基团．与之相比，添加Pb“的培养基发酵得到的Bt菌体红外光谱谱峰没有明显改变，也没有新的谱带出现，这表明Bt吸附Pb“后，自身结构并没有发生改变．注：VS代表很强；S代表强；m代表中强．2．3．2Bt吸附Pb“的XPS分析对吸附Pb“的Bt进行XPS扫描，如图5所示．由图5可知，吸附后的Bt菌体表面出现了Pb4f峰，其中a、b峰位分别位于138．33和143．19eV，与Pb“替代羟基H后的Pb4f7和Pb4f5峰位十分接30002000近，说明Pb“与Bt表面的羟基发生了相互作用．波数／cmBt主要含c、N、0元素，通过对这3种元素的结1一未吸附Pb的Bt菌体；2一吸附Pb的Bt菌体．合能变化分析可以得出重金属的作用位点．吸附图4Bt菌体吸附Pb前后的红外光谱图Pb“前后C、O和N的XPS谱图如图6所示．由图6Fig．4FTIRspectraofBtcellsbeforeand可知，吸附Pb“前后C、O和N各自1S轨道的电子结afteradsorptiontoPb合能没有变化，说明Bt菌体表面主要元素的化学环进一步分析谱峰漂移情况可知，吸附Pb后，境没变．对c1s进行手动分解得到3个峰，由低到高\n\n第8期常明等：Pb对城市污水处理厂污泥中苏云金芽孢杆菌发酵的影响939∽∽山UrJ强暖电子结合能／eV电子结合能／ev(a)吸附前(b)吸附后图7Bt菌体吸附Pb前后S2p轨道的XPS谱图ng．7XPSspectraofSonBtcellsbeforeandafteradsorptiontoPb[7]KAMALASKARLB，DHAKEPHALKARPK，MEHERKK，eta1．3结论HighbiohydrogenyieldingClostridiumsp．DMHC一10isolatedfroma)污泥培养基在支持Bt生长代谢和降低重金sludgeofdistillerywastetreatmentplant[J]．InterJHydroEnergy，属生物有效态含量方面均明显优于商用培养基，当初2010，35(19)：10639—10644．始P(Pb)高达400mg／L时，与未添加Pb“相比，污[8]NAKASAKIK，ADACHIT．EffectsofintermittentadditionofcellulaseforproductionofL-lacticacidfromwastewatersludgeby泥培养基中Bt活菌数与晶体蛋白产量约分别下降48％和54％，而商用培养基中Bt活菌数与晶体蛋白simultaneoussaccharificationandfermentation[J]．BiotechBioeng，2003，82(3)：363—370．产量约分别下降82％和75％，证实了污泥作为Bt发[9]REBAHBF，P~RVOSTD，TYAGIRD．Growthofalfalfain酵培养基的可行性．sludge-amendedsoilsandinoculatedwithrhizobiaproducedinb)Bt对Pb“具有较好的耐受性，当sludge[J]．JEnvironQual，2002，31：1339—1348．P(有效态Pb)在80mg／L以下时，Bt的生长代谢不会[10]TIRADO-MONTIELML，TYAGIRD，VAL~ROJR．WastewatertreatmentsludgeasrawmaterialforBacillusthuringiensis受到显著影响．production[J]，WaterRes，2001，35(16)：3807—3816．c)采用FTIR和XPS初步探讨了Ph“在Bt表[11]常明，周顺桂，卢娜，等．微生物转化污泥制备苏云金杆菌生物面的作用机制，发现Bt对Pb“确有少量吸附，从而杀虫剂[J]．环境科学，2006，27(7)：1450—1454．降低重金属的生物有效性，吸附位点主要为羟基，部[12]冯春，杨光，杜俊，等．污水污泥堆肥重金属总量及形态变化分C—O和S—O基团也参与了吸附反应．[J]．环境科学研究，2008，21(1)：97—102．[13]CALVETR．BOURGEOISS。MSAKYJJ．Someexperimentson参考文献(References)：extractionofheavymetalspresentinsoil[J]．InternJEnvironAnal[I]MORRISON，CONVERSEV，KANAGARATNAMP，eta1．EffectChem，1990，39：31—45．ofculturalconditionsonspore-crystalyieldandtoxicityofBacillus[14]TESSIERA，CAMPBELLPG，BLSSONM．Sequentialextractionthutingiensissubapazawai(HD133)[J]．JInvertebrPathol，procedureforthespeciationofparticulatetracemetals[J]．Analyt1996，67：129—136．Chem，1979，5I(7)：844—851．[2]喻子牛．苏云金杆菌[M]．北京：科学出版社，1990．[15]黄雅曦，李季，李国学，等．污泥资源化处理与利用中控制重金[3]LOPEZ6，FERNANDEZJG，GILBMV．Newtrendsinpest属污染的研究进展[J]．中国生态农业学报，2006，14(1)：156一control：thesearchforgreenerinsecticides[J]．GreenChem，2005，l58．7：431-442．[16]TARVAINENT，KALLIOE．Baselinesofcertainbioavailableand[4]INOUES，SAWAYAMAS，OGIT，eta1．OrganiccompositionoftotalheavymetalconcentrationsinFinland[J]．AppliedGeochem，liquidizedsewagesludge[J]．BiomassBioenergy，1996，10(1)：37—2002，17：975—980．4O．[17]WANGChao，HUXin，CHENMaolin，eta1．Totalconcentrations[5]赵庆祥．污泥资源化技术[M]．北京：化学工业出版社，2002．andfractionsofCd，Cr，Pb，Cu，NiandZninsewagesludgefrom[6]CAIMulin，LIUJunxin，WEIYuansong．Enhancedbiohydrogenmunicipalandindastrialwastcwatertreatmentplants[J]．JHazardproductionfromsewagesludgewithalkalinepretreatment[J]．Mater，2005，119：245—249．EnvironSciTechnol，2004，38：3195—3202．[18]RAUNGSOMBOONS，CHIDTHAISONGA，BUNNAGB，eta1．\n940环境科学研究第25卷Removaloflead(Pb)bytheCyanobacteriumGloeocapsap．[26]LAEMMLIUK．Cleavageofstructuralproteinsduringtheassembly[J]．BioresTech，2008，99：5650—5658．oftheheadofbacteriaphageT4[J]．Nature，1970，227：680-685．[19]DURSUNAAY，USLUAG，CUCIAY，eta1．Bioaceumulationof[27]CALABRESEDM，NICKERSONKW，LANELC．Acomparasioncopper(II)，lead(Ⅱ)andchromium(Ⅵ)bygrowingAspergillusofproteincrystalsubunitsizesinBacillusthuringiensis[J]．CanJniger[J]．ProcBiochem，2003，38(12)：1647—1651．Microbiol，1980，26：1006—1010．[2O]CLESCERILS，GREENBERGAE，TRUSSELLRR．Standard[28]丁学知．苏云金杆菌4．0718菌株的cry杀虫基因和功能蛋白methodsfortheexaminationofwaterandwastewater『M]．质组学研究[D]．长沙：湖南农业大学，2006．WashingtonDC：AmericanPublicHeahhAssociation(APHA)，[29]KILICM，KESKINME，MAZLUMS，eta1．Effectofconditioning1989．fnrPbandHg(II)biosorptiononwasteactivatedsludge[J][21]LACHHABK．TYAGIRD，VAL]~ROJR．ProductionofBacillusChemEngrProcess：ProcessIntensification，2008，47(1)：31—40．thuringiensisbiopesticidesusingwastewatersludgeasaraw[30]卢涌泉，邓振华．实用光谱解析[M]．北京：电子工业出版社，material：effectofinoculumandsludgesolidsconcentration[J]．1985．ProcBiochem，2001，37：197-208．[31]常建华，董绮功．波谱原理及解析[M]．北京：科学出版社，[22]常明，周顺桂，卢娜，等．污泥一废糖蜜联合发酵培养Bt生物杀2005．虫剂[J]．北京大学学报，2007，43(6)：763-767．[32]PANJianhua，GEXiaopeng，LIURuixia，eta1．Characteristic[23]ZHUANGLi，ZHOUShungui，WANGYueqiang，eta1．MosquitofeaturesofBacilluscereuscelSUrfaceswithbiosorptionofPb(1I)biolarvicideproductionbysequentialfermentationwithdualstrainsionsbyAFMandFT-IR[J]．ColloidsSurfB：Biointerfaees，2006，ofBacdlusthuringiensissubsp．israelensisandBacillussphaerieus52(1)：89—95．usingsewagesludge[J]．BioresTech，2011，102：1574-1580．[33]吴涓，钟升，李玉成．黄孢原毛平革菌(Phanerochaete[24]CHANGMing，ZHOUShungui，LUNa，eta1．EnhancedBacilluschrysosporium)对Pb的生物吸附特性及吸附机理[J]．环境科thuringiensisproductionfromsewagesludgewithalkalineand学研究，2010，23(6)：754—761．ultrasonicpretreatments[J]．WaterAirSoilPollut，2007，186：75—[34]SHALVOYRB，FISHERGB，STILESPJ．Bondionicityand86．structuralstabilityofsomeaverage-·valence·-fivematerialsstudied[25]CHANGMing，ZHOUShungui，LUNa，eta1．StarchprocessingbyX．rayphotoemission[J]．PhysRevB，1977，15：1680—1697．wastewaterasanewmediumforproductionofBacillusthuringiensis[J]．WorldJMicrobiolBioteeh，2008，24(4)：441-447．(责任编辑：孙彩萍)