DB13T1006-2009鸡肉中四种氟喹诺酮类药物残留高效液相色谱-荧光检测法.pdf 10页

'免费标准网(www.freebz.net)ICS13C53DB13河北省地方标准DB13/T1006-2009鸡肉中四种氟哇诺酮类药物残留高效液相色谱一荧光检测法2009-03-09发布2009-03-24实施河北省质量:技术监督局发布免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)DB13/T1006-2009.‘‘..山.oI1吕本标准由秦皇岛市质量技术监督局提出。本标准起草单位:秦皇岛正大有限公司、秦皇岛市标准化协会。本标准主要起草人:刘俊华、丛思羞、石丽敏、鹿翠珍。免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)DB13/T1006-2009鸡肉中四种氟哇诺酮类药物残留高效液相色谱一荧光检测法范围本标准规定了鸡肉中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量检测的原理、仪器、提取和净化。本标准适用于鸡肉中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量的测定;鸡肝脏、肾脏中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量的测定也可参照执行。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理样品中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星用乙睛提取，用正己烷净化，用高效液相色谱-荧光检测法测定，外标法定量。4试剂与材料4.，所用试剂除另有指定外，均为色谱纯。4.2试验用水应符合GB/T6682中二级水的规定。4.3乙睛。4.4饱和正己烷:用乙睛饱和。4.5正已烷。4.6无水硫酸钠:分析纯，经640℃灼烧4h后，贮于密闭容器中备用。4.70.01moUL四T基澳化按溶液(pH=3.0):称取3.22g四丁基滨化按，用1000mL水稀释，冰醋酸调解pH值到3.004.8恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星标准品:纯度)95.0%04.9恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星标准储备溶液:分别称取恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星标准品10.0mg(按实际含量折算)，用0.03mol/LNaOH溶液10mL溶解，再用乙睛稀释定容于100mL棕色容量瓶中，此溶液浓度为1005g/mL。各标准储备溶液置于2`C^-8℃冰箱中冷藏保存，保存期为六个月。标准使用液用流动相稀释至适当浓度，使用时现配现用。!"i仪器15.高效液相色谱仪。配有荧光检测器。25.高速组织均质器，转速10000rpm以上。35.旋转蒸发器。45.离心机。55.涡旋混合器。免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)DB13/T1006-20095.6精密分析天平(感量0.0001g);天平(感量0.01g)05.7振荡器。5.8搅肉机。5.9尼龙微孔过滤膜:c0.25m06色谱条件6.1色谱柱:ZORBAXSB-AQ4.6X250mm,55m或相当者。6.2流动相:0.01mol/L四T基澳化钱(pH=3.0)+乙睛=(97.5+2.5,VN)o6.3流速:1.0mL/mino6.4检测波长:激发波长280nm，发射波长450ran,6.5柱温:40cC6.6进样量:20pLo7样品处理7.1样品制备取待检胸肉(或腿肉)样品，弃去筋、皮、骨和脂肪，切成小块后，用搅肉机搅碎。7.2提取准确称取绞碎鸡肉样品5g(精确至0.01g)于50mL塑料离心管，加人10g无水硫酸钠，加25mL乙睛，用高速组织均质器于15000rpm高速均质0.8min"v1.5min后，3500rpm离心10min，移取上清液转移到另一个50mL塑料离心管中，残渣用15mL乙睛重复提取一次，合并上清液。7.3净化在合并后的上清液中加入30mL饱和正己烷，置振荡器上高速振荡5min,3500rpm离心10mill,去除上层正己烷相，收集下层乙睛于蒸发浓缩瓶中，然后置40℃水浴上减压蒸发浓缩至干，准确加人2.0mL流动相溶解残渣，转移至离心管，加人2mL正己烷，置振荡器上高速振荡3min，于4000rpm离心5min.吸取下层液体用尼龙微孔过滤膜过滤，滤液待测。8测定8.1标准工作曲线的制作配制恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星混合标准溶液，使得溶液浓度为1.05岁mL(其中氧氟沙星浓度为3.05g/mL)，分别移取1.05g/mL的混合标准溶液25L,105L,205L,505L,1005L,2005L用流动相稀释成浓度分别为0.0025&L,0.015g/mL,0.025g/mL,0.055&L,0.15&L,0.25g/rL的混合标准溶液，供高效液相色谱分析，制作标准工作曲线。8.2液相色谱测定根据样品溶液中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样品溶液中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样品溶液等体积穿插进样进行测定。四种氟哇诺酮的出峰顺序和参考保留时间见表10表1药物名称保留时间氧氟沙星13.29min诺氟沙星17.39min环丙沙星21.19而n恩诺沙星31.48min免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)DB13/T1006-20098.3空白试验与空白添加回收试验每个试验批次的样品中至少必须同时做空白样品和空白添加样品(实际加人值为已知)。空白鸡肉添加样品的实际加人值水平可选在等于最大残留限量10gg/kg，或方法检测限2pg/kg或略高的实际加人值水平上操作;空白样品和空白添加样品的测定按步骤7操作。本试验用于计算试验的回收率Rc，试验的回收率用于对阳性的残留结果进行残留量的校正。回收率R滋公式(1)计算。。式一。‘，，八八，八C=—入I气入J勿(1)Am式中:凡—代表回收率;A一空白添加样品中四种氛喳诺酮类药物残留量测定值，5吮;Ao—空白样品中四种氟咬诺酮类药物残留量测定值，Ag/g;Am—空白样品中添加四种氛唆诺酮类药物含It,.g/mL;试样中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量(待校正值)按公式(2)计算。C=望二生塑立丝X1000(2)ASxm式中:c—样品中氧氛沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星残留量，Wg/g;A—样品溶液中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的峰面积Ao一一一空白实验被测物的色谱峰面积或峰高As—标准工作溶翔液中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的峰面积Cs—标准工作溶泊液中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的浓度，5g/mL;V—样品定容体积mL;m—样品的克重，go9检验报告结果报告值按公式(3)计算。(3)式中:C,—经过回收校正的样品中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量，Nglkg;C—未校正的样品中思诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量，5g/kg;R一回收率，%。9.1线性范围氧氟沙星在0.0035g/g-0.6pg/g范围内呈良好的线性关系，诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星在0.0015g/g-0.2pg/g范围内呈良好的线性关系，相关系数均大于0.999810检测限10.1鸡肉产品的检测限:恩诺沙星为25g/kg，环丙沙星为25g/kg，诺氟沙星为25g/kg,氧氟沙星为6jig/kg.10.2四种报哇诺酮类检测色谱图免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)DB13/T1006-2009四种氟喳诺酮类检测色谱图见图10从啊-一一一一仍。;6L!，。…仁6卜，.叮，Ng，朽p…一·。.尸。2JX·户。曰﹄二﹂︸0，0从未/人、、、了一~U切J韦一0.1扣200走的叹田8山1以田1之的1斌团1压的20.加22团24.00韶.田洲加旅田左.的34.山洲的鸳图14免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准网(www.freebz.net)aCCO!优CCL卜、代L留二免费标准网(www.freebz.net)无需注册即可下载'