GBT 1741-1979 漆膜耐霉菌测定法.pdf 6页

'中华人民共和国国家标准漆膜耐霉菌测定法GB1741-79(89)国家标准总局批准并发布1979-09-15批准1980-01-01实施 本标准适用于漆膜耐霉菌性能的测定。一、一般规定1.材料和仪器设备无色玻璃试管:直径15毫米，长150毫米;无色玻璃培养皿:直径90毫米;三角瓶:50毫升、100毫升、500毫升、1000量筒:100毫升;量杯:500毫升;无色玻璃漏斗;不锈钢刀;试管架:20-40孔;酒精灯:150毫升;喷雾器:医用喉头喷雾器;马口铁板:15x40X0.2-0.3毫米;铝板:LY12,15X40X1一2毫米;保温箱:25一60r-;高压灭菌锅:1.4公斤握米2.天平:感量为0.001克;接种环:如图。3a4i2n,1-柄(圆木涂漆);2一杆(似-3毫米，粗铝线改制);3一不锈钥丝(直径。5-0.8毫米)‘4一不锈钢丝一端的小环2.试剂硝酸钱(GB659-77):化学纯;磷酸氢二钾(HGB3155-60):化学纯;氯化钾(G13646-77):化学纯;硫酸镁(GB671-77);化学纯;硫酸亚铁((一;B664-77):化学纯;蔗糖:绵白糖或白砂糖;琼脂;吐温80-聚经基乙烯油酸山梨醇配;95%乙醇(GB679-65):化学纯。3.各种培养基及无菌水的制备(1)无基盐培养基(供检验样品用)的组成:434 A酸按:】.5克;磷酸氢二钾:1.0克;氯化钾:0.25克;硫酸镁:0.5克;硫酸Ilk铁:0.002克;琼脂:15-20克(用量冬少夏多);水(pH值6.8一7.0):1000毫升。按上列组成配好的培养基，放在三角瓶中，盛放量为瓶深的1/2,塞上棉塞(棉塞要求松紧适中，深人瓶口内约3厘米，瓶外部分能握住，保持整洁)，用纸包住棉塞。放人高压灭菌锅中，在1.07一1.1公斤刁里米z蒸汽压力下灭菌30分钟。待表压降至零时，开盖取出，稍凉就可趁热倒在培养皿中，培养基厚约5-7毫米。如当天不用，应将灭菌后的培养基存放在阴凉清洁处，用时再加热融化后倒人培养皿中，不能用培养皿盛放保存。(2)合成培养基(供培养霉菌用)的组成:硝酸钱:1.5克;磷酸氢二钾:1.0克;氯化钾:0.5克;硫酸镁:0.5克;硫酸亚铁:0.01克;蔗糖:30克;琼脂:15-20克(用量冬少夏多);水(pH值6.8一7.0):1000毫升。按上列组成配好的培养基放在三角瓶中，盛放量为瓶深的1/2，加热使琼脂完全融化后，用漏斗装人试管内3厘米深(装时不要让培养基沾及管口O沾及可用湿纱布擦去)。塞上棉塞(棉塞要松紧适中，深入管内2厘米，管外留2厘米，保持整洁)，扎成一捆，用纸包住棉塞。然后放人高压灭菌锅中，试管必须直立，在1.07-1.1公斤沪健米z蒸汽压力下灭菌30分钟。待表压降至零时，趁热取出试管，分开斜放在横棍上，使培养基顶部保持在试管的中部(除棉塞外)，待其自然凉成冻后，存放阴凉清洁处备用。(3)麦芽汁培养基(供交替培养霉菌用)将啤酒厂取得的未加苦酒花的麦芽汁，用水冲稀至糖度表10度，加人琼脂15一20克/升(用量冬少夏多)，加热使琼脂完全融化后，用漏斗装人试管〔详见方法(1)〕放人高压灭菌锅中，在0.7-0.8厘米“蒸汽压力下灭菌30分钟。待表压降至零时，趁热取出试管，分开斜放在横棍上，待其自然冷成斤月东后，存放阴凉清洁处备用。(4)马铃薯培养基〔供交替培养霉菌用，与麦芽汁培养基可任意选用)将新鲜马铃薯洗净去皮，用不锈钢刀切成长斜条，大小以能放人试管，斜块顶部保持在试管中部为宜，放人试管中。每管加1毫升水，塞上棉塞，扎成捆，用纸包住棉塞，放人高压灭菌锅中，在1.07-1.1公斤刁里米z蒸汽压力下灭菌30分钟。待表压降至零时，趁热取出试管，放在阴凉清洁处备用。(5)无菌水用100份蒸馏水加0.005份分散剂(吐温80)配成无菌水，放在100毫升三角瓶中，盛435 放量为瓶深的1/2，塞上棉塞，用纸包住棉塞。放人高压灭菌锅中，在1.07一1.1公斤刁更米2蒸汽压力下灭菌30分钟。待表压降至零时，取出后放阴凉清洁处备用。4.菌种及混合霉菌抱子(种子)悬浮液的制备(1)菌种:黄曲霉、黑曲霉、萨氏曲霉、土曲霉、焦曲霉、黄青霉、拟青霉、芽枝霉、毛壳霉、木霉。(2)菌种种植培养先将接种环在酒精灯_t烧红金属丝部分，杀死被站污的杂菌，再放人消毒(含乙醇70-75%的酒精)瓶中冷却，酒精量以没过金属丝2/3处为宜。将新鲜培养基试管与老菌管并放在左手心上，由中央三指和掌心握住试管，先分别旋松两试管上的棉塞。右手用三指拿住接种环柄，自消毒酒精瓶中取出，并迅速使金属丝部分通过火苗，燎去酒精而不使环烧热。用右手小指和掌心同时夹住两管的棉塞，轻轻拔出。左手将试管微向上，靠近酒精灯火苗。右手接种环悬空伸人老菌管中，在菌种表面轻擦一下，环上就沾上霉菌抱子，再仔细地退出接种环，将近管口时，左手将两试管口稍离火苗，同时右手接种环迅速退出老菌管进人新鲜培养基管内，在培养基表面轻轻擦一下。退出接种环，按原管塞住棉塞。然后，在火苗上把接种环烧红灭菌，放在消毒酒精瓶中冷却。种好的新菌管用标签标明菌号、接种日期，集中在29一30℃保温箱中培养。老菌管暂存。新菌管培养5-7天后，取出与老菌管对照检查，应无错误、污染。将新菌管保存在阴凉清洁处。将老菌管灭菌后洗净。保存的菌种需要定时更换新菌，一般夏季每月更换一次，冬季两月更换一次。作为试验用菌种，培养10一14天，取出制备混合霉菌抱子悬浮液。霉菌菌种可用三种培养基交替培养，以保持生长良好。(3)混合霉菌抱子(种子)悬浮液将预先培养好的试验菌种，按每10毫升无菌水，菌种5环的量计算总的无菌水所需接种环数，再分别计算每种菌所需接种环数。抱子多的取种环数可少些，抱子少的，取种环数可多些。接种环先经烧红灭菌，在酒精中冷却。逐个将霉菌种子取出放在无菌水中，取完后，塞上棉塞，充分摇动，使霉菌种子在无菌水中充分的分散。混合橄菌抱子悬浮液，必须当天制备，当天使用。用过的菌管经高压蒸汽灭菌后洗净备用。二、测定方法5.甲法:培养皿法本方法适用于使用小片试样检验漆膜耐霉菌的性能。将三块马口铁板(水性漆可选用铝板)用溶剂擦洗干净，按漆膜制备法的喷涂法制备漆膜，待漆膜实干后，平放在无机盐培养基表面。用喷雾器将悬浮液均匀细密地喷在样板上，稍晾干后，盖上皿盖。盖口注明试样、编号和日期，放人保温箱中保持在29-30r-培养。三天后检查样板表面生霉是否正常，着生霉正常可将培养皿倒置，使培养基部分在上，这样培养墓不易干，样板表面凝露减少。若不见霉菌生长(从培养基上可以辨明)则需另喷混合霉菌泡子悬浮液。七天后检查试样生霉程度，十四天后总检查。按本标准评定等级。检验周期如产品标准中另有规定，按产品标准规定进行。6.乙法:局部法436 本方法主要适用于大型器件成品漆膜的耐霉菌性能的测定。在大件成品试样局部的漆膜表面上，均匀细密地喷洒混合抱子悬浮液。稍晾干后，先放_L半块平板培养荃，盖上留下半块平板培养基的圆皿(半个培养皿)，使上、下两个半块培养基互相交叉，构成优越的生霉环境。四周用胶布固定(但不能将盖缝封死)，标明试样编号和日期，放人保温箱中，在29-30℃培养。三天后检查样板表面生霉状况，如生霉正常，七天后检查生霉程度，十四天后总检查，按标准评定等级。检查周期如产品标准中另有规定，按产品标准规定进行。三、检查方法和评级标准直接从正面或侧面观察样板表面霉菌、菌体、菌丝生长状况。在十四天培养期内以不开盖检查为宜，以保持样板在培养过程的稳定状况，避免霉菌在温度改变时枯萎，影响检验的准确性。评级标准等级0无长霉l长霉斑点在1毫米左右，分布稀琉长霉斑点在z毫米左右或蔓延生长在2毫米范围内，每斑分布最大量不超过整个表面的z四分之一3长霉斑点在2毫米左右或分布量占整个表面的二分之一左右4长霉斑点大部分在5毫米以上或整个表面布满菌丝四、注意事项7.培养皿灭菌法将洗净晾干的培养皿，几个一起用纸包住，在1.3公斤洲惶米z蒸汽压力下灭菌1小时后取出，在110℃的烘箱中烘干。8操作室灭菌法"(1)甲醛熏蒸法把高锰酸钾放在地上的瓷盘内，然后倒人定量的甲醛，使高锰酸钾湿透，即迅速放出气体，有效地清洁了室内的空气。应注意在操作前必须使窗户及通风管道关闭。一般每米2用5克高锰酸钾，3毫升37%的甲醛即可。加完甲醛后，操作人员必须迅速退出并关好门，在24小时内不使人进人室内。(2)乳酸消毒法每100米3用80%乳酸100毫升，加热熏蒸30一60分钟。9.高压蒸汽灭菌锅操作法先检查压力表和安全阀，如用外加热，必须检查锅内水位保持安全位置。437 装好物品后，盖紧锅盖，打开放气口。通人蒸气或加热到放气口出现水汽时，表明锅内空气已被赶尽，关好放气口。继续加热升压至所需压力，保持压力到足够时间，停止加热。待冷却至表压0.2公斤/厘米2以下时，打开放气口，放掉剩余压力，即可开启锅盖，取出物品，晾干水汽，保存待用。注:自本标准实施之日起，原部标准HG2-740-77作废。438'