GBT16345-1996饮料中乙酰磺酸钾(安赛蜜)的测定.pdf 6页

'免费标准下载网(www.freebz.net)Gs/T16345-1996前台A本标准非等效采用国外标准。本标准的附录A是提示的附录。本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准负责起草单位：卫生部食品卫生监督检验所；参加起草单位：北京市卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所。本标准主要起草人：杨祖英、张平伟、孙淳、姚孝元、郑兰波。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。免费标准下载网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准下载网(www.freebz.net)中华人民共和国国家标准GB/T16345一1996饮料中乙酸磺胺酸钾（安赛蜜）的测定DeterminationofacesulfameKinbererage1范围本标准规定了饮料中乙酞磺胺酸钾的测定方法。本标准适用于汽水、可乐型饮料、果汁、果茶等食品中乙酞磺胺酸钾的测定。也适用于糖精钠的测定。本法取样量为2.5g时，最低检出限为乙酞磺胺酸钾、糖精钠各50mg/kg(L),2原理样品中乙酞磺胺酸钾、糖精钠经高效液相反相柱c,，分离后，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。3试剂有机溶剂需重蒸。3.1甲醇：分析纯。3.2乙睛：分析纯。3.30.02mol/L硫酸钱溶液：称取硫酸按2.642g，加水溶解至1000mLo3.4硫酸溶液：10%。3.5中性氧化铝：层析用，100-200目。3.6乙酞磺胺酸钾、糖精钠标准储备液：精密称取乙酞磺胺酸钾、糖精钠各0.1000g，用移动相溶解后移入100mL容量瓶中，并用移动相稀释至刻度，即含乙酞磺胺酸钾、糖精钠各1mg/mL的溶液。3.7乙酞磺胺酸钾、糖精钠标准使用液：吸取乙酞磺胺酸钾、糖精钠标准储备液2mL于50mL容量瓶，加移动相至刻度，然后分别吸取此液1mL,2mL,3mL,4mL,5mL于10rnL容量瓶中，各加移动相至刻度，即得各含乙酞磺胺酸钾、糖精钠0.004mg/mL,0.008mg/rnL,0.012mg/mL,0.016mg/mL,0.020mg/mL的混合标准液系列。3.8移动相：0.02mol/L硫酸铁(740^-800mL)＋甲醇(170-150mL)＋乙睛(90^50mL)+100oH,SO,(1mL)。4仪器曰14.高效液相色谱仪。04.‘超声清洗仪（溶剂脱气用）。月几﹃﹂离心机。月月﹃﹃抽滤瓶。月－﹄﹃︺G3耐酸漏斗。月C﹃U微孔滤膜：0.45rm,，1层析柱，用10mL注射器筒代替较好，内装3cm高的中性氧化铝。中华人民共和国卫生部1996一06一19批准1996一09一01实施免费标准下载网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准下载网(www.freebz.net)Gs/T16345一19965分析步骤5.，样品处理5.1.1汽水：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气。吸取样品2.5mL于25mL容量瓶中。加移动相至刻度，摇匀后，溶液通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。5.1.2可乐型饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，吸取已除去二氧化碳的样品2.5mL,通过中性氧化铝柱，待样品液流至柱表面时，用移动相洗脱，收集25mL洗脱液，摇匀后超声脱气，此液备作HPLC分析用。5.1.3果茶、果汁类食品：吸取2.5mL样品，加水约20mL混匀后，离心15min(4000r/min)，上清液全部转入中性氧化铝柱，待水溶液流至柱表面时，用移动相洗脱，收集洗脱液25mL，混匀后，超声脱气，此液作HPLC分析用。5.2测定5.2.1HPLC参考条件分析柱：SpherisorbC,8,4.6mmX150mm，粒度5pm,移动相：0.02mol/L硫酸铁(740^800mL)＋甲醇(170.150mL)＋乙睛(90^-50mL)+100oH2S04(1mL)。波长：214nm,流速：0.7mL/mino5.2.2标淮曲线：分别进含乙酸磺胺酸钾、糖精钠0.004mg/mL,0.008mg/mL,0.012mg/mI.,0.016mg/mL,0.020mg/mL混合标准溶液各10tiL，进行HPLC分析，然后以峰面积为纵坐标，以乙酞磺胺酸钾、糖精钠的含量为横坐标，画标准曲线。5.2.3样品测定：进5.1项下的样品处理后的样品溶液10IcL,测定其峰面积，从标准曲线查得测定液中乙酸磺胺酸钾、糖精钠的量。HPLC色谱图如下：1一乙酸磺胺酸钾；2一糖精钠；3一咖啡因t4一天门冬酸苯丙氨酸甲醋图1HPLC色谱图免费标准下载网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准下载网(www.freebz.net)Gs/T16345一1996结果计算X一矶1000（1）－叭mXX1000式中：X—样品中乙酞磺胺酸钾、糖精钠的含量，g/kg(g/L);‘—由标准曲线上查得进样液中乙酞磺胺酸钾、糖精钠的含量，mg/mL;V,—样品稀释液总体积，mL;VZ—HPLC测定时进样的体积，mL;m—样品质量，9.6.2检出限仪器检出限0.04t.g；方法检出限：乙酞磺胺酸钾、糖精钠各0.004mg/mL(g)，标准曲线范围乙酞磺胺酸钾、糖精钠各为0.004mg/mL^-0.020mg/mL。方法回收率为88.000^"10500，平均回收率为92.12%,Sx=4.8，相对标准差（R.S.D)=5.0%.免费标准下载网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准下载网(www.freebz.net)GB/T16345一1996附录A（提示的附录）方法评价A1方法评价本标准规定了用高效液相法测定饮料中乙酞磺胺酸钾、糖精钠，并能同时测定咖啡因、天门冬酞苯丙氨酸甲酷，且简化样品处理，国内外未见同时测定这四种物质的报导。A2方法验证A2.1柱层析洗脱液的研究样品通过中性氧化铝小柱后，比较了水、移动相两种洗脱剂，结果表明水不能洗脱乙酞磺胺酸钾、糖精钠，而移动相能洗脱乙酞磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因、天门冬酞苯丙氨酸甲醋。A2.2乙酞磺胺酸钾、糖精钠在中性氧化铝柱上流出曲线吸取100mg/L的加标乙酞磺胺酸钾、糖精钠的可乐，通过已用少量水润湿的中性氧化铝小柱，然后以流动相洗脱，连续收集7管，每管5mL，用HPLC测定每管中乙酞磺胺酸钾、糖精钠量。结果表明，从第4管起均未检出乙酞磺胺酸钾、糖精钠。A2.3HPLC移动相的研究本标准研究了乙酸按缓冲液＋甲醇、乙酸馁缓冲液＋异丙醇系统，硫酸钱缓冲液＋甲醇系统，试验结果表明硫酸按缓冲液＋甲醇系统能分离乙酞磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因、天门冬酸苯丙氨酸甲醋。见表Al。表Al移动相试验表R,移动相乙酞磺胺酸钾糖精钠咖啡因天门冬酸苯丙氨酸甲酌0.02mol/L硫酸按＋甲醇+1000硫酸(1)700＋300十13.0103.6379.00210.870(2)720＋280+12.8703.47911.19713.582(3)750十250+13.2924.62213.96016.3200.02mol/L硫酸钱＋甲醇＋乙腊+10％硫酸(4)750十200+50+13.3294.4359.73414.520(5)740+170+90-x-13.9695.0509.91515.620从表Al看出移动相（5)较好。A2.4标准曲线在试验条件下，取不同浓度的乙酞磺胺酸钾、糖精钠混合标准使用液。.004mg/ml.,0.008mg/mL,0.012mg/mL,0.016mg/mL,0.020mg/mL，各进样10fiL，进行HPLC分析，然后以峰面积对乙酞磺胺酸钾、糖精钠浓度作图，画标准曲线。乙酞磺胺酸钾的回归方程为r=0.998,Y-99264.4+3.34X107X;糖精钠的回归方程为r=0.998,Y=161944十7.26X10"X。乙酞磺胺酸钾、糖精钠的线性范围是。^-0.020mg/ml,.A2.5回收试验选择不含乙酞磺胺酸钾、糖精钠的汽水、果汁、果茶进行加标试验，分别加入50mg/L,100mg几的免费标准下载网(www.freebz.net)无需注册即可下载 免费标准下载网(www.freebz.net)GB/T16345一1996两个不同浓度，依法操作，测得回收率为880o-1050o，平均回收率为92.120o,Sx=4.8，相对标准差(R.S.D)＝5.ON。A3验证结果本标准委托北京市卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所验证，验证时采用已加入100mg/L的乙酞磺胺酸钾、糖精钠的可乐饮料为统一样品。两单位平均测得值为：乙酞磺胺酸钾浓度为105.6mg/L，回收率为105.60o,S、一4.97，相对标准差（R.S.D）为4.710o；糖精钠测得浓度为98.3mg/L，回收率为98.30o,Sx=2.45，相对标准差（R.S.D）为2.49000免费标准下载网(www.freebz.net)无需注册即可下载'