GBT26347-2010蚊虫抗药性检测方法生物测定法.pdf 8页

'ICs11。020CO5中华人民共和国国家标准GB/T2634⒎-201o蚊虫抗药性检测方法生物测定法TestFnethodsofmosquitoresistancetoinsecticides-ˉBioassaymethods⒛11-O⒈14发布⒛11-Os-01实施中华人民共和国卫生部发布中国国家标准化管理委员会 GB/T26347-201o刖舀本标准按照GB/T1.1-20o9给出的规则起草。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所、中国农业大学、北京疾病预防控制中心。本标准主要起草人:赵彤言、汪中明、董言德、曾晓亢、高希武、宋锋林、佟颖、韩玉华。标准分享网www.bzfxw.com免费下载 GB/T26347-201o蚊虫抗药性检测方法生物测定法1范围本标准规定了测定蚊虫对有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类等杀虫药剂抗药性的诊断剂量法和敏感基线法。本标准适用于淡色库蚊(C祝clzp犭pje,zsp臼JJe,os)、致倦库蚊(C=。歹pj幽s日勿J″g仍ernscj口J勿s)、白纹伊蚊(A纟d召s@J3o歹c勿s)、中华按蚊(A″op切J纟ssj″召″s饣s)等蚊虫抗药性的生物测定。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1敏感基线susceptibⅡebaseⅡinedata所测蚊虫的敏感品系对某种杀虫剂的毒力回归线(L冫p)。2.2诊断剂Ⅰdagnosticdose由敏感品系的敏感基线计算得到的与死亡率99%或99.9%相对应的杀虫药剂剂量值(LC99或LC9⒐9),一般以www.bzfxw.com2倍LC99或LC9⒐9值区别抗性和敏感种群。2.3F1代Flgeneration采集的样本繁殖后的第一代蚊虫。3试虫样本多点采集。幼虫浸渍法采用F1代四龄幼虫。成蚊接触筒法采用野外采集的幼虫或蛹羽化后,3d~5d未吸血雌蚊。4试剂丙酮、乙醚、白油、杀虫剂原药等。5仪器蚊笼、滤纸、接触筒(参见附录A)、吸蚊器。6测试条件温度:25℃±1℃,光周期:⒕L:10D,相对湿度:60%~80%。1 GB/T26347-2010∶7敏感基线法7.1原理依据杀虫剂应用剂量和死亡机率值关系建立毒力回归方程,以敏感品系得到的杀虫剂毒力回归线作为敏感基线。以待测昆虫种群得到的杀虫剂毒力回归线与敏感基线对比,来确定待测种群的抗性水平。具体是比较两条毒力回归线的D值变化以及回归线计箅得到的半数致死量的变化。7.2操作步骤7.2。l幼虫浸渍法每只烧杯量入⒕9水。将待测药剂用丙酮等比或一个系列浓度,通过预BO%,然后吸取实验确定药剂的浓度大于1mL已配制好的药(30只)连同50mL%~80%的温室水全部注人烧杯内,内,24h后检查死死亡率,将剂量取对数、将死亡率7.2.2成用白油与乙www.bzfxw.comg2的配比过预实验确定药剂的浓度系列每个浓度的药液均匀涂抹于15。垫于圆筒内壁,做为接触筒,用吸,开始计算接触时间,接触1h后葡萄糖水的棉花团置于隔板上的小与乙醚的混合物作为对照。根据每一位进行回归,求出LC5°值。7.3死亡判断7.3.1幼虫浸渍法轻轻触动幼虫,以不能逃避剌激视7.3.2成蚊接触法试虫完全不动视为死亡。7.4结果表述结果用抗性倍数表述,抗性倍数=待测种群LC50值/敏感种群LC5°值。7.5判别标准敏感品系和所测样本之间95%置信限不重叠,且抗性倍数≥5倍为抗性种群。2标准分享网www.bzfxw.com免费下载 GB/T26347-20108诊断剂I法8.l原理依据杀虫剂对敏感品系的毒力回归线,确定一个能够区分敏感个体和抗性个体或抗性杂合子的剂量。一般用2倍敏感品系的LC99值作为诊断剂量。根据待检测蚊虫种群在诊断剂量下的死亡率作为抗性判定标准。8.2操作步骒8.2.1幼虫浸渍法取1mL已配制好有149mL脱氨自来水的棒搅匀。把另一杯中预先挑选好的30条幼虫水,全部注人上述烧杯内,合计zO0使药剂的终浓度达到诊断剂量(常用杀虫药应溶剂处理为对照组。24h后记录死亡8.2.2成蚊接劝药剂用白稀释至诊断嗍的诊断剂量参见表R2和表RL‘,待溶剂挥发5h后,将滤纸筒内壁,用吸血雌蚊,μ枷触筒内,关闭隔板,开始计算接触r嗨用浸有8%葡萄糖水的棉花团置www.bzfxw.com为对照。8.3结果表结果用死¨¨····⋯·⋯·⋯·¨·(1)式中:M——死亡率Nm——死亡虫数N——试虫总数。对照死亡率小于5%tt公式进行校正;对照死亡率大于⒛%为无效测定。依据Abbott公式校正死亡率,MⅡ=¨⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯¨⋯⋯⋯⋯⋯(2)1-Mc式中:——MⅡ校正死亡率;——⒕处理组死亡率;——贩对照组死亡率。8.4判别标准在诊断剂量下蚊虫的死亡率在98%~100%表明其为敏感种群;死亡率在80%~97%表明其为可能抗性种群;死亡率(80%表明其为抗性种群。 GB/T26347-2010附录A(资料性附录)世界卫生组织(WHo)推荐使用的接触筒每两个筒组成一套,一个用浸药滤纸衬垫于其内壁作为接触筒,另一个作为蚊虫接触药纸后恢复饲口,另一端有几圈外螺养的恢复筒。两个筒用有机玻璃制成,筒长12.5cm,直径5cm,一端用尼龙纱封5cm的纹。两个筒由一白色不透明的有机玻璃方隔板连接,隔板边长77cm,厚约0.5cm,中间有直径圆孔和高1cm的边圈(有内螺纹),隔板中间装有1块活动抽板,抽板长15cm,开有直径4.5cm的圆孔,拉动抽板可使隔板两侧的圆筒封闭或打通。参照示意图见图A。1。www.bzfxw.com注1:图中尺寸单位为mm,材料为钢化有机玻璃。注2:主要做法:接触简和饮复筒一端为1mm钢丝纱网,一端与隔板相连接,通过内外丝与简连接;抽板夹在隔板中间。抽板高150mm,宽60mm,下部预留直径45mm、15mm回孔。囡A。1成蚊接触筒示意图标准分享网www.bzfxw.com免费下载 GB/T26347-2010附录B(资料性附录)常用杀虫剂对蚊虫的诊断剂ⅠB。1表B.1给出了常用杀虫剂对淡色库蚊幼虫的诊断剂量。表B.1常用杀虫剂对淡色库蚊幼虫的诊断剂Ⅰ杀虫剂LCsO/(g/L)LCO。/(g/L)诊断剂量/(g/L)残杀威1.15×10ˉ41.80×4410ˉ5.00×10ˉ辛硫磷6.00×10ˉ64.30×5410ˉ5.00×10ˉ氯菊酯3.9×10ˉ°8.50×10ˉ°4.00×10ˉ5高效氯氰菊酯7.96×10ˉ72.33×10ˉ651.00×10ˉ丙烯菊酯4,98×10ˉ57.17×5410ˉ2.00×10ˉ4.87×10ˉ1.38×66溴氰菊酯"10ˉ3.00×10ˉ注:敏感品系来自军事医学科学院微生物流行病研究所蚊虫养殖室淡色库蚊北京株,测定时间为2003年3月。B。2表B。2给出了常用杀虫剂对淡色库蚊成虫的诊断剂量。www.bzfxw.com表B。2常用杀虫剂对淡色库蚊成蚊的诊断剂Ⅰ杀虫剂LC50/(g/L)LC9°/(g/L)0±sE诊断剂量/(酽L)敌敌畏0.llo.781.51=LO。207.7残杀威o.046o,3281.49=LO。223,3二氖苯醚菊酯o.18o.286.97-卜1。040.79高效铽氰菊酯o.0089o.0382.04=LO.400.25溴氰菊酯o.0047o.02361.83=LO.22o。2注:敏感品系来自军事医学科学院微生物流行病研究所蚊虫养殖室淡色库蚊北京株,测定时间为zO05年3月。B。3表B。3给出了WHO推荐几种杀虫剂对按蚊、埃及伊蚊和致倦库蚊成蚊的诊断剂量。表B。3WIIo推荐几种杀虫剂对按蚊、埃及伊蚊和致倦库蚊成蚊的诊断剂Ⅱ(接触1D单位为g/L杀虫剂按蚊a埃及伊蚊致倦库蚊DDT40.o40b40.Oc杀螟硫磷10.Od10.0马拉硫磷50.o8.o50.o恶虫威1.o残杀威1.o1.o1.o氟氨氰菊酯1.5溴氰菊酯0.5o.25 GB/T26347-2010表B。3(续)单位为g/L·杀虫剂按坟埃及伊坟致倦庠坟醛菊由5.o南效“““菊由o。50°o。3o。25二“苯良菊由7.52.52.5■我国主要是中华按坟、刂人按坟、大劣按坟和铰小按坟。·gOmh。接触c接触时间4h。d^,Bop无εJ纟ss。c△口ro切的接触时间2h。°按怂时间2h。www.bzfxw.com标准分享网www.bzfxw.com免费下载'