DB13T 221-1994 玉米杂交种及自交系、小麦种子纯度检验方法－蛋白质电泳法.pdf 5页

'DB河北省地方标准玉米杂交种及自交系、小麦种子纯度检验方法一一蛋白质电泳法DB13/T221一941994-11--21发布___1994一12一01实施河北省技术监督局发布 河北省地方标准玉米杂交种及自交系、小麦种子纯度检验方法一一蛋白质电泳法DB13/T221-94主题内容与适用范围本标准规定了蛋白质电泳技术快速测定种子纯度原理和试验方法。本标准适用于玉米杂交种、玉米自交系和小麦种子。2引用标准GB8170数值修约规则GB3543农作物种子检验规程3术语3.1特征蛋白质，某一品种的作物种子所含有的特定的不同于该作物其它品种的基因，该基因所决定的蛋白质也就不同于其它品种的蛋白质，因此定为特征蛋白质。3.2纯度本品种的种子粒数占供检样品总数的百分率即为供检品种纯度。4原理将玉米或小麦种子贮存蛋白质利用电泳技术进行分离，得到蛋白质指纹图，根据玉米或小麦品种的特征蛋白质进行品种鉴定，然后计算出纯度。5试验方法5.1仪器设备5.1.1稳压稳流电泳仪0-600V0.200mA5.1.2双板夹心电泳槽5.1,3高速离心机:最高转速为1600。转/min5.1.4天平，称量2009，分度值10mg5.1.5微量进样器0-50P15.1.6注射器0~2ml5.1.750ml锥形瓶5.1.8带盖搪瓷盘5.1.9移液管0-10ml河北省技术监.局1994-11-21批准1994-12=01实旅一1一 DB13/T221--945.1,10吸液器0-10m15.1.11医用X光片观察仪5.1.1Q可调徽最取样器0-1"200”15.1.131,5ml离心管、吸液尖5.1.14液体快速混合器5,2试剂和材料5,2.130肠丙烯酸胺(Acry)-N-N一甲叉双丙烯醉胺(Bis·)母液称取150.OOgAcry.和4.OOgBis·，溶于300MI热蒸姗水中，趁热过滤，并定容到500m1,低温保存(0-4OC)(5.2.2,5.2.3,5.2.4,5.2.5保存条件相同)5.2.21090过硫酸钱称取1.009过硫酸钱，溶于lOm】水中5.2.3TEMED:用原液5.2.4蛋白质提取液9.00gSUP溶于150m1水中5.2.51肠甲基绿指示剂1.009甲基绿溶于少许乙醇，然后加入IOOM150呱的甘油溶液，摇匀即可。5.2.6阳极室电泳液:吸取4ml乳酸溶于500m1水中。5.2.7阴极室电泳液:称量3.009Tris，并吸取2ml乳酸溶于500m1水中。5.2.8脱色液乙醇:冰乙酸:水=20e7:73SA.90.5呱的考马氏亮蓝R250染色液1.009考马氏蓝溶于少许乙醇，加入200MI脱色液即可(染色时稀释10倍)5.3试验步骤5.3,1扦样扦样及平均样品的制备，按GB3543执行。5.3,2样品制备5.3,.2.1从做完净度后的种子中，随机取试样2-4份，每份100位，逐位粉碎后(粉碎粒度