GB4789.28-2013食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求.pdf 52页

'中华人民共和国国家标准GB4789.28—2013食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求2013-11-29发布2014-06-01实施 GB4789.28—2013前言本标准代替GB/T4789.28－2003《食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂》。本标准与GB/T4789.28－2003相比，主要修改如下：——删除了培养基和试剂的配方和配制方法。——增加了培养基和试剂的质量控制方法和指标。1 GB4789.28—XXXX食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求1范围本标准规定了食品微生物学检验用培养基和试剂的质量要求。本标准适用于食品微生物学检验用培养基和试剂的质量控制。2术语和定义2.1质量控制为满足质量要求所采取的技术操作和活动。2.2培养基或试剂的批量培养基或试剂完整的可追溯单位，是指满足产品要求（内部控制）和性能测试，产品型号和质量稳定的一定量的半成品或成品。这些产品在特定的生产周期生产，而且编号相同。2.3培养基及试剂的性能在特定条件下培养基对测试菌株的反应。2.4培养基液体、半固体或固体形式的、含天然或合成成分，用于保证微生物繁殖(含或不含某类微生物的抑菌剂)、鉴定或保持其活力的物质。2.5纯化学培养基由已知分子结构和纯度的化学成分配制而成的培养基。2.6未定义和部分定义的化学培养基全部或部分由天然物质、加工过的物质或其他不纯的化学物质构成的培养基。2.7固体培养基在液体培养基中加入一定量固化物（如：琼脂、明胶等），加热至100℃溶解，冷却后凝固成固体状态的培养基。倾注到平皿内的固体培养基一般称之为“平板”；倒入试管并摆放成斜面的固体培养基，当培养基凝固后通常称作“斜面”。2.8半固体培养基在液体培养基中加入极少量固化物（如：琼脂、明胶等），加热至100℃溶解，冷却后凝固成半固体状态的培养基。2 GB4789.28—XXXX2.9运输培养基在取样后和实验室处理前保护和维持微生物活性且不允许明显增殖的培养基。运输培养基中通常不允许包含使微生物增殖的物质，但是培养基应能保护菌株(如：缓冲甘油-氯化钠溶液运输培养基)。2.10保藏培养基用于在一定期限内保护和维持微生物活力，防止长期保存对其的不利影响，或使其在长期保存后容易复苏的培养基(如：营养琼脂斜面)。2.11悬浮培养基将测试样本的微生物分散到液相中，在整个接触过程中不产生增殖或抑制作用(如：磷酸盐缓冲液)。2.12复苏培养基能够使受损或应激的微生物修复，使微生物恢复正常生长能力，但不一定促进微生物繁殖的培养基。2.13增菌培养基通常为液体培养基，能够给微生物的繁殖提供特定的生长环境。2.14选择性增菌培养基能够允许特定的微生物在其中繁殖，而部分或全部抑制其他微生物生长的培养基（如：TTB培养基）。2.15非选择性增菌培养基能够保证多种微生物生长的培养基（如：营养肉汤）。2.16分离培养基支持微生物生长的固体或半固体培养基。2.17选择性分离培养基支持特定微生物生长而抑制其他微生物生长的分离培养基（如：XLD琼脂）。2.18非选择性分离培养基对微生物没有选择性抑制的分离培养基（如：营养琼脂）。2.19鉴别培养基(特异性培养基)能够进行一项或多项微生物生理和（或）生化特性鉴定的培养基（如：麦康凯琼脂）。注：能够用于分离培养的鉴别培养基被称作分离（鉴别）培养基(如：XLD琼脂)。2.20鉴定培养基能够产生一个特定的鉴定反应而通常不需要进一步确证实验的培养基(如：乳糖发酵管)。注：用于分离的鉴定培养基被称为分离（鉴定）培养基。3 GB4789.28—XXXX2.21计数培养基能够对微生物定量的选择性（如：MYP琼脂）或非选择性培养基（如：平板计数琼脂）。注：计数培养基可包含复苏和(或)增菌培养基的特性。2.22确证培养基在初步复苏、分离和(或)增菌阶段后对微生物进行部分或完全鉴定或鉴别的培养基(如：BGLB肉汤)。2.23商品化即用型培养基以即用形式或融化后即用形式置于容器（例如平皿、试管或其他容器）内供应的液体、固体或半固体培养基：——完全可即用的培养基；——需重新融化的培养基(如用于平板倾注技术)；——使用前需重新融化并分装（如倾注到平皿）的培养基；——使用前需重新融化，添加物质并分装的培养基(如：TSC培养基和BairdParker琼脂)。2.24商品化脱水合成培养基使用前需加水和进行处理的干燥培养基，如：粉末、小颗粒、冻干等形式：——完全培养基；——不完全培养基，使用的时候需加入添加剂。2.25自制培养基依据完整配方的具体成份配制的培养基。2.26试剂用于食品微生物检验的染色剂和培养基配套试剂。2.27测试菌株通常用于培养基性能测试的微生物。注：测试菌株根据其来源不同(见2.29-2.32)可进行进一步定义。2.28标准菌株直接从官方菌种保藏机构获得并至少定义到属或种的水平的菌株。按菌株特性进行分类和描述，最好来源于食品或水的菌株。2.29标准储备菌株将标准菌株在实验室转接一代后得到的一套完全相同的独立菌株。2.30储备菌株从标准储备菌株转接一代获得的培养物。2.31工作菌株由标准储备菌株、储备菌株或标准物质（经证明或未经证明）转接一代获得的菌株。4 GB4789.28—XXXX注：标准物质是指在均一固定的浓度中含有具活性的定量化菌种，经证明的标准物是指其浓度已经证明。3培养基及试剂质量保证3.1证明文件3.1.1生产企业提供的文件生产企业应提供以下资料(可提供电子文本)：——培养基或试剂的各种成分、添加成分名称及产品编号；——批号；——最终pH(适用于培养基)；——储存信息和有效期；——标准要求及质控报告；——必要的安全和（或）危害数据。3.1.2产品的交货验收对每批产品，应记录接收日期，并检查：——产品合格证明；——包装的完整性；——产品的有效期；——文件的提供。3.2贮存3.2.1一般要求应严格按照供应商提供的贮存条件、有效期和使用方法进行培养基和试剂的保存和使用。3.2.2脱水合成培养基及其添加成分的质量管理和质量控制脱水合成培养基一般为粉状或颗粒状形式包装于密闭的容器中。用于微生物选择或鉴定的添加成分通常为冻干物或液体。培养基的购买应有计划，以利于存货的周转（即掌握先购先用的原则）。实验室应保存有效的培养基目录清单，清单应包括以下内容：——容器密闭性检查；——记录首次开封日期；——内容物的感官检查。开封后的脱水合成培养基，其质量取决于贮存条件。通过观察粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断脱水培养基的质量的变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。3.2.3商品化即用型培养基和试剂应严格按照供应商提供的贮存条件、有效期和使用方法进行保存和使用。3.2.4实验室自制的培养基5 GB4789.28—XXXX在保证其成分不会改变条件下保存，即避光、干燥保存，必要时在5℃±3℃冰箱中保存，通常建议平板不超过2周～4周，瓶装及试管装培养基不超过3个月～6个月，除非某些标准或实验结果表明保质期比上述的更长。建议需在培养基中添加的不稳定的添加剂应即配即用，除非某些标准或实验结果表明保质期更长；含有活性化学物质或不稳定性成分的固体培养基也应即配即用，不可二次融化。培养基的贮存应建立经验证的有效期。观察培养基是否有颜色变化、蒸发（脱水）或微生物生长的情况，当培养基发生这类变化时，应禁止使用。培养基使用或再次加热前，应先取出平衡至室温。3.3培养基的实验室制备3.3.1一般要求正确制备培养基是微生物检验的最基础步骤之一，使用脱水培养基和其他成分，尤其是含有有毒物质（如胆盐或其他选择剂）的成分时，应遵守良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明。培养基的不正确制备会导致培养基出现质量问题（见附录A）。使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制。如重量（体积）、pH、制备日期、灭菌条件和操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息，如：培养基名称和类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、pH、培养基体积（分装体积）、无菌措施（包括实施的方式、温度及时间）、配置日期、人员等，以便溯源。3.3.2水实验用水的电导率在25℃时不应超过25μS/cm(相当于电阻率≥0.4ΜΩcm)，除非另有规定要求。3水的微生物污染不应超过10CFU/mL。应按GB4789.2，采用平板计数琼脂培养基，在36℃±1℃培养48h±2h进行定期检查微生物污染。3.3.3称重和溶解小心称量所需量的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末），先加入适量的水，充分混合（注意避免培养基结块），然后加水至所需的量后适当加热，并重复或连续搅拌使其快速分散，必要时应完全溶解。含琼脂的培养基在加热前应浸泡几分钟。3.3.4pH的测定和调整用pH计测pH，必要时在灭菌前进行调整，除特殊说明外，培养基灭菌后冷却至25℃时，pH应在标准pH±0.2范围内。一般使用浓度约为40g/L（约1mol/L）的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/L（约1mol/L）的盐酸溶液调整培养基的pH。如需灭菌后进行调整，则使用灭菌或除菌的溶液。3.3.5分装将配好的培养基分装到适当的容器中，容器的体积应比培养基体积最少大20%。3.3.6灭菌3.3.6.1一般要求培养基应采用湿热灭菌法（3.3.6.2）或过滤除菌法（见3.3.6.3）。6 GB4789.28—XXXX某些培养基不能或不需要高压灭菌，可采用煮沸灭菌，如SC肉汤等特定的培养基中含有对光和热敏感的物质，煮沸后应迅速冷却，避光保存；有些试剂则不需灭菌，可直接使用（参见相关标准或供应商使用说明）。3.3.6.2湿热灭菌湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行，高压灭菌一般采用121℃±3℃灭菌15min，具体培养基按食品微生物学检验标准中的规定进行灭菌。培养基体积不应超过1000mL，否则灭菌时可能会造成过度加热。所有的操作应按照标准或使用说明的规定进行。灭菌效果的控制是关键问题。加热后采用适当的方式冷却，以防加热过度。这对于大容量和敏感培养基十分重要，例如含有煌绿的培养基。3.3.6.3过滤除菌过滤除菌可在真空或加压的条件下进行。使用孔径为0.2μm的无菌设备和滤膜。消毒过滤设备的各个部分或使用预先消毒的设备。一些滤膜上附着有蛋白质或其他物质（如抗生素），为了达到有效过滤，应事先将滤膜用无菌水润湿。3.3.6.4检查应对经湿热灭菌或过滤除菌的培养基进行检查，尤其要对pH、色泽、灭菌效果和均匀度等指标进行检查。3.3.7添加成分的制备制备含有有毒物质的添加成分（尤其是抗生素）时应小心操作（必要时在通风柜中操作），避免因粉尘的扩散造成实验人员过敏或发生其他不良反应；制备溶液时应按产品使用说明操作。不要使用过期的添加剂；抗生素工作溶液应现用现配；批量配制的抗生素溶液可分装后冷冻贮存，但解冻后的贮存溶液不能再次冷冻；厂商应提供冷冻对抗生素活性影响的有关资料，也可由使用者自行测定。3.4培养基的使用3.4.1琼脂培养基的融化将培养基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法（如高压锅中的层流蒸汽）使之融化。经过高压的培养基应尽量减少重新加热时间，融化后避免过度加热。融化后应短暂置于室温中（如2min）以避免玻璃瓶破碎。融化后的培养基放入47℃～50℃的恒温水浴锅中冷却保温(可根据实际培养基凝固温度适当提高水浴锅温度)，直至使用，培养基达到47℃～50℃的时间与培养基的品种、体积、数量有关。融化后的培养基应尽快使用，放置时间一般不应超过4h。未用完的培养基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培养基尤应注意，融化后保温时间应尽量缩短，如有特定要求可参考指定的标准。倾注到样品中的培养基温度应控制在约45℃左右。3.4.2培养基的脱氧必要时，将培养基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加热15min；加热时松开容器的盖子；加热后盖紧，并迅速冷却至使用温度（如FT培养基）。3.4.3添加成分的加入7 GB4789.28—XXXX对热不稳定的添加成分应在培养基冷却至47℃～50℃时再加入。无菌的添加成分在加入前应先放置到室温，避免冷的液体造成琼脂凝结或形成片状物。将加入添加成分的培养基缓慢充分混匀，尽快分装到待用的容器中。3.4.4平板的制备和储存倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少为3mm（直径90mm的平皿，通常要加入18mL～20mL琼脂培养基）。将平皿盖好皿盖后放到水平平面使琼脂冷却凝固。如果平板需储存，或者培养时间超过48h或培养温度高于40℃，则需要倾注更多的培养基。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和（或）5℃±3℃冰箱的密封袋中，以防止培养基成分的改变。在平板底部或侧边做好标记，标记的内容包括名称、制备日期和（或）有效期。也可使用适宜的培养基编码系统进行标记。将倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延长储存期限。为了避免冷凝水的产生，平板应冷却后再装入袋中。储存前不要对培养基表面进行干燥处理。对于采用表面接种形式培养的固体培养基，应先对琼脂表面进行干燥：揭开平皿盖，将平板倒扣于烘箱或培养箱中（温度设为25℃～50℃）；或放在有对流的无菌净化台中，直到培养基表面的水滴消失为止。注意不要过度干燥。商品化的平板琼脂培养基应按照厂商提供的说明使用。3.5培养基的弃置所有污染和未使用的培养基的弃置应采用安全的方式，并且要符合相关法律法规的规定。4质控菌株的保藏及使用4.1一般要求为成功保藏及使用菌株，不同菌株应采用不同的保藏方法，可选择使用冻干保藏、利用多孔磁珠在﹣70℃保藏、使用液氮保藏或其他有效的保藏方法。4.2商业来源的质控菌株对于从标准菌种保藏中心或其他有效的认证的商业机构获得原包装的质控菌株，复苏和使用应按照制造商提供的使用说明进行。4.3实验室制备的标准储存菌株用于性能测试的标准储存菌株（见附录B的图B.1），在保存和使用时应注意避免交叉污染，减少菌株突变或发生典型的特性变化；标准储备菌株应制备多份，并采用超低温（﹣70℃）或冻干的形式保存。在较高温度下贮存时间应缩短。标准储存菌株用作培养基的测试菌株时应在文件中充分描述其生长特性。标准储存菌株不应用来制备标准菌株。4.4储存菌株储存菌株通常从冻干或超低温保存的标准储存菌株进行制备（见附录B的图B.2）。制备储存菌株应避免导致标准储存菌株的交叉污染和(或)退化。制备储存菌株时，应将标准储存菌株制成悬浮液转接到非选择培养基中培养，以获得特性稳定的菌株。对于商业来源的菌株，应严格按照制造商的说明执行。储存菌株不应用来制备标准储存菌株或标准菌株。8 GB4789.28—XXXX4.5工作菌株工作菌株由储存菌株或标准储存菌株制备。工作菌株不应用来制作标准菌株、标准储存菌株或储存菌株。5培养基和试剂的质量要求5.1基本要求5.1.1培养基和试剂培养基和试剂的质量由基础成分的质量、制备过程的控制、微生物污染的消除及包装和储存条件等因素所决定。供应商或制备者应确保培养基和试剂的理化特性满足相关标准的要求，以下特性的质量评估结果应符合相应的规定：——分装的量和（或）厚度；——外观，色泽和均一性；——琼脂凝胶的硬度；——水分含量；——20℃～25℃的pH；——缓冲能力；——微生物污染。培养基和试剂的各种成分、添加剂或选择剂应进行适当的质量评价。5.1.2基础成分国家标准中提到的培养基通常可以直接使用。但因其中一些培养基成分(见附录C)质量不稳定，可允许对其用量进行适当的调整，如：——根据营养需要改变蛋白胨、牛肉浸出物、酵母浸出物的用量；——根据所需凝胶作用的效果改变琼脂的用量；——根据缓冲要求决定缓冲物质用量；——根据选择性要求决定胆盐、胆汁抽提物和脱氧胆酸盐、抗菌染料的用量；——根据抗生素的效价决定其用量。5.2微生物学要求5.2.1概论培养基和试剂应达到附录D质量控制标准的要求，其性能测试方法按6.1执行。实验室使用商品化培养基和试剂时，应保留生产商按3.1.1提供的资料，并制定验收程序，如需进行验证，可按6.2执行，并应达到附录E质量控制标准要求。5.2.2微生物污染的控制按批量的不同选择适量的培养基在适当条件下培养，测定其微生物污染。生产商应根据每种平板或液体培养基的数量，规定或建立其污染限值，并记录培养基成分、制备要素和包装类型。分别从初始和最终制备的培养基中抽取或制备至少一个（或1%）平板或试管，置于37℃培养18h或按特定标准中规定的温度时间进行培养。本条款只适用于即用型培养基。9 GB4789.28—XXXX5.2.3生长特性5.2.3.1一般要求选择下列方法对每批成品培养基或试剂进行评价：——定量方法；——半定量方法；——定性方法。采用定量方法时，应使用参考培养基（见附录D）进行对照；采用半定量和定性方法时，使用参考培养基或能得到“阳性”结果的培养基进行对照有助于结果的解释。参考培养基应选择近期批次中质量良好的培养基或是来自其他供应商的具有长期稳定性的批次培养基或即用型培养基。5.2.3.2测试菌株测试菌株是具有其代表种的稳定特性并能有效证明实验室特定培养基最佳性能的一套菌株。测试菌株主要购置于标准菌种保藏中心，也可以是实验室自己分离的具有良好特性的菌株。实验室应检测和记录标准储备菌株的特性；或选择具有典型特性的新菌株，使用时应引起注意；最好使用从食品或水中分离的菌株。对不含指示剂或选择剂的培养基，只需采用一株阳性菌株进行测试；对含有指示剂或选择剂的培养基或试剂，应使用能证明其指示或选择作用的菌株进行试验；复合培养基（如需要加入添加成分的培养基）需要以下列菌株进行验证：——具典型反应特性的生长良好的阳性菌株；——弱阳性菌株（对培养基中选择剂等试剂敏感性强的菌株）；——不具有该特性的阴性菌株；——部分或完全受抑制的菌株。5.2.3.3生长率按规定用适当方法将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中。每种培养基上菌株的生长率应达到所规定的最低限值（见附录D、附录E）。5.2.3.4选择性为定量评估培养基的选择性，应按照规定以适当方法将适量测试菌株的工作培养物接种至选择性培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定值（见附录D、附录E）。5.2.3.5生理生化特性（特异性）确定培养基的菌落形态学、鉴别特性和选择性，或试剂的鉴别特性，以获得培养基或试剂的基本特性（见附录D、附录E）。5.2.3.6性能评价和结果解释若按照规定的所有测试菌株的性能测试达到标准，则该批培养基或试剂的性能测试结果符合规定。若基本要求和微生物学要求均符合规定，则该批培养基或试剂可被接受。6培养基和试剂性能测试方法6.1生产商及实验室自制培养基和试剂的质量控制的测试方法10 GB4789.28—XXXX6.1.1非选择性分离和计数固体培养基的目标菌生长率定量测试方法6.1.1.1平板的制备与保存倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成一个至少3mm厚的琼脂层（直径90mm的平皿通常要加入18mL～20mL琼脂培养基），需添加试剂的培养基，应使培养基冷却至47℃～50℃后才添加试剂。倾注后将平板放到水平平面，使琼脂冷却凝固。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和(或)2℃～8℃冰箱的密封袋中，在有效期内使用。使用前应对琼脂表面进行干燥，但应注意不要过度干燥。6.1.1.2工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜或采用其他方法，制备10倍系列稀释的菌悬液。生长率测试常用每平板的接种水平为20CFU～200CFU。6.1.1.3接种选择合适稀释度的工作菌悬液0.1mL，均匀涂布接种于待测平板和参比平板。每一稀释度接种两个平板。可使用螺旋平板法(见附录F)或倾注法进行接种，并按标准规定的培养条件培养平板。6.1.1.4计算选择菌落数适中的平板进行计数，按下列式（1）计算生长率。NsPR=„„„„„„„„„„„„„„„（1）No式中：PR——生长率；NS——待测培养基平板上得到的菌落总数；N0——参比培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应≥100CFU）。参比培养基的选择：一般细菌采用TSA，一般霉菌和酵母采用沙氏葡萄糖琼脂，对营养有特殊要求的微生物采用适合其生长的不含抑菌剂或抗生素的培养基。6.1.1.5结果解释目标菌在培养基上应呈现典型的生长。非选择性分离和计数固体培养基上目标菌的生长率应不小于0.7。6.1.2选择性分离和计数固体培养基的测试方法6.1.2.1目标菌生长率定量测试方法6.1.2.1.1平板的制备与保存按照6.1.1.1中要求进行。6.1.2.1.2工作菌悬液的制备按照6.1.1.2中要求进行。6.1.2.1.3接种按照6.1.1.3中要求进行。11 GB4789.28—XXXX6.1.2.1.4计算按照6.1.1.4中要求进行。6.1.2.1.5结果解释目标菌在培养基上应呈现典型的生长。选择性分离固体培养基上目标菌的生长率一般不小于0.5，最低应为0.1；选择性计数固体培养基上目标菌的生长率一般不小于0.7。参照附录F培养基质量控制标准。6.1.2.2非目标菌(选择性)半定量测试方法6.1.2.2.1平板的制备与保存按照6.1.1.1中要求进行。6.1.2.2.2工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。6.1.2.2.3接种用1μL接种环取选择性测试工作菌悬液1环，在待测培养基表面划六条平行直线（如图1），同时接种两个平板，划线时可在培养基下面放一个模板图，按标准规定的培养条件培养平板。操作时用接种环而不用接种针，接种环应完全浸入培养基中。取一满环接种物，将接种环接触容器边缘3次可去除多余的液体。划线时，接种环与琼脂平面的角度应为20°～30°。接种环压在琼脂表面的压力和划线速度前后一致，整个划线应快速连续，移取液体培养物时应将接种环伸入培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫。图1非目标菌半定量划线法接种模式图6.1.2.2.4计算培养后按以下方法对培养基计算生长指数G。每条有比较稠密菌落生长的划线则G为1，每个培养皿上最多为6分。如果仅一半的线有稠密菌落生长，则G为0.5。如果划线上没有菌落生长、生长量少于划线的一半或菌落生长微弱，则G为0。记录每个平板的得分总和便得到G。同时接种两个平板。6.1.2.2.5结果解释12 GB4789.28—XXXX非目标菌的生长指数G一般小于或等于1，至少应达到小于5。6.1.2.3非目标菌(特异性)定性测试方法6.1.2.3.1平板的制备与保存按照6.1.1.1中要求进行。6.1.2.3.2工作菌悬液的制备按照6.1.1.2中要求进行。6.1.2.3.3接种用1μL接种环取测试菌培养物在测试培养基表面划平行直线。并按标准规定的培养条件培养平板。6.1.2.3.4结果解释非目标菌应有典型的菌落外观、大小和形态。6.1.3非选择性增菌培养基的半定量测试方法6.1.3.1培养基的制备将培养基分装试管，每管10mL。6.1.3.2工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜或采用其他制备方法，制备10倍系列稀释的菌悬液。6.1.3.3接种在装有待测培养基的试管中接种10CFU～100CFU的目标菌，每管接种量为1mL，接种两个平行管。同时将1mL菌悬液（与试管接种同一稀释度）倾注平板，接种两个平板，作接种量计数用。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养（如增菌时间为8h以下，需取10μL培养后的增菌液倾注到适合的培养基中，再按适合的培养时间和温度进行培养）。6.1.3.4结果解释用目测的浊度值（如0～2）评估培养基：——0表示无混浊；——1表示很轻微的混浊；——2表示严重的混浊。目标菌的浊度值应为2。有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团，沉积在试管或瓶子底部，发生这种情况时，小心振荡试管后再进行观察。如增菌8h以下，10μL增菌液培养计数结果参照附录D培养基质量控制标准。6.1.4选择性增菌培养基的半定量测试方法6.1.4.1培养基的制备将培养基分装试管，每管10mL。6.1.4.2工作菌悬液的制备13 GB4789.28—XXXX按照6.1.3.2中要求进行。6.1.4.3接种6.1.4.3.1混合菌的接种在装有待测培养基的试管中接种10CFU～100CFU的目标菌（特殊接菌量参照附录D培养基质量控制标准），并接种1000CFU～5000CFU的非目标菌，接种总量为1mL，同时接种两个平行管，混匀。同时分别将目标菌菌悬液（与试管接种同一稀释度）和非目标菌菌悬液（比试管接种小10～100倍稀释度）1mL倾注平板，接种两个平板，作接种量计数用。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。6.1.4.3.2非目标菌的接种在装有待测培养基的试管中接种1000CFU～5000CFU的非目标菌，接种量为1mL，同时接种两个平行管，混匀。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。6.1.4.4培养液的接种6.1.4.4.1混合菌培养液的接种用10μL接种环取1环经培养后的混合菌培养液，划线接种到特定的选择性平板上，同时每管接种一个平板。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。6.1.4.4.2非目标菌培养液的接种吸取10μL经培养后的非目标菌培养液，均匀涂布接种到非选择性平板（如TSA）上。同时每管接种一个平板。可使用倾注法进行接种，并按标准规定的培养条件培养平板。6.1.4.5计算和结果解释目标菌在选择性平板上的菌落应>10CFU，则表示待测液体培养基的生长率良好；非目标菌在非选择性平板上的菌落数应<100CFU，则表示待测液体培养基的选择性为良好。6.1.5选择性液体计数培养基的半定量测试方法6.1.5.1培养基的制备将培养基分装试管，每管10mL。6.1.5.2工作菌悬液的制备按照6.1.3.2中要求进行。6.1.5.3接种6.1.5.3.1目标菌的接种在装有待测培养基的试管中接种10CFU～100CFU的目标菌，接种总量为1mL，同时接种两个平行管，混匀。同时将1mL菌悬液(与试管接种同一稀释度)倾注平板，接种两个平板，作接种量计数用。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。6.1.5.3.2非目标菌的接种在装有待测培养基的试管中接种1000CFU～5000CFU的非目标菌，接种总量为1mL，同时接种14 GB4789.28—XXXX两个平行管，混匀。同时将1mL菌悬液(比试管接种小10～100倍稀释度)倾注平板，接种两个平板，作接种量计数用。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。6.1.5.4结果解释用目测的浊度值(如0～2)评估培养基：——0表示无混浊；——1表示很轻微的混浊；——2表示严重的混浊。并记录小导管收集气体的体积比。目标菌的浊度值应为2，产气应为1/3或以上；非目标菌的浊度值应为0或1，无产气现象。注：有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团，沉积在试管或瓶子底部，发生这种情况时，小心振荡试管后再进行观察。6.1.6悬浮培养基和运输培养基的定量测试方法6.1.6.1培养基的制备将培养基分装试管，每管10mL(有特殊要求的可选用5mL)。6.1.6.2目标菌工作菌悬液的制备按照6.1.3.2中要求进行。6.1.6.3接种在装有待测培养基的试管中接种100CFU～1000CFU的目标菌，同时接种两个平行管，混匀后，立即吸取1mL待测培养基混合液，参照附录F培养基质量控制标准选用相应的培养基倾注平板，每管待测培养基接种一个平板。按标准方法中规定的培养时间和温度培养后，进行菌落计数。剩余已接种菌液的待测培养基置20℃～25℃放置45min后；再吸取1mL倾注平板，每管培养基接种一个平板，按标准方法中规定的培养时间和温度培养后，进行菌落计数。如保存条件有特殊要求的待测培养基，参照附录F培养基质量控制标准要求放置或培养后再进行菌落计数。6.1.6.4结果观察与解释待测培养基中的菌落数变化应在±50%内。6.1.7Mueller-Hinton血琼脂的纸片扩散测试方法（定性测试方法）6.1.7.1平板的制备与保存倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成一个厚度为4mm～5mm的琼脂层。倾注后将平板放到水平平面，使琼脂冷却凝固。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和（或）5℃±3℃冰箱的密封袋中，在有效期内使用。使用前应可将平板置35℃温箱中或置室温层流橱中对琼脂表面进行干燥，培养基表面应湿润，但不能有水滴，培养皿也不应有水滴。6.1.7.2质控菌株的复苏将质控菌株接种到血平板上，按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。检查纯度合格后，用于质控工作菌悬液的制备。6.1.7.3质控菌工作菌悬液的制备15 GB4789.28—XXXX8将纯度满意的质控菌株培养物悬浮于TSB肉汤中，并调整浊度为0.5麦氏标准（约1×10CFU/mL～82×10CFU/mL）。6.1.7.4接种用涂布法将质控工作菌悬液接种于MH平板上，并贴上相应的抗生素纸片(每平板最多贴6片)，将平板翻转后按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。调整菌悬液浊度与接种所有平板间的时间间隔不要超过15min。6.1.7.5结果观察与解释在无反射黑色背景下，观察有无抑菌环。结果解释参照参照附录D表D.7。6.1.8鉴定培养基的测试方法6.1.8.1液体培养基6.1.8.1.1培养基的制备将培养基分装试管，再进行灭菌和添加试剂。6.1.8.1.2工作菌悬液的制备9将标准储备菌株接种到非选择性肉汤中或采用其他制备方法，制备成5McFarland浊度（约10CFU/mL）的菌悬液。6.1.8.1.3接种吸取0.05mL～0.08mL（约1～2滴）至待测培养基内，按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。6.1.8.1.4结果观察与解释需加指示剂的试验在微生物生长良好的情况下，按顺序加入指示剂，再观察结果。结果解释参照附录D表D.8。6.1.8.2半固体培养基6.1.8.2.1培养基的制备将培养基分装试管。灭菌后竖立放置，冷却后备用。6.1.8.2.2接种取新鲜质控菌株斜面，用接种针挑取菌苔穿刺接种至待测培养基内。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。6.1.8.2.3结果观察与解释需加指示剂的试验在微生物生长良好的情况下，按顺序加入指示剂，再观察结果。结果解释参照附录D表D.8。6.1.8.3高层斜面培养基和斜面培养基6.1.8.3.1培养基的制备16 GB4789.28—XXXX将培养基分装试管。灭菌后摆放成高层斜面（斜面与底层高度约为2:3）和普通斜面（斜面与底层高度约为3:2），冷却后备用。6.1.8.3.2接种高层斜面培养基：取新鲜质控菌株斜面，用接种针挑取菌苔穿刺接种至琼脂高层，穿刺接种完毕后，再在斜面上划“之”字形接种；斜面培养基：取新鲜质控菌株斜面，用接种环挑取菌苔在斜面上划“之”字形接种。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。6.1.8.3.3结果观察与解释需加指示剂的试验在微生物生长良好的情况下，按顺序加入指示剂，再观察结果。结果解释参照附录D表D.8。6.1.8.4平板培养基6.1.8.4.1培养基的制备倾注灭菌融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成一个至少3mm厚的琼脂层（直径90mm的平皿通常要加入18mL～20mL琼脂培养基）。6.1.8.4.2接种取新鲜质控菌株斜面，用接种环挑取菌苔在平板上划“之”字形接种，或用接种针挑取菌苔在平板上点种接种。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。6.1.8.4.3结果观察与解释参照附录D表D.8。6.1.9实验试剂的测试方法6.1.9.1实验方法按试剂说明书进行。6.1.9.2结果观察与解释参照附录D表D.8。6.2实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制的测试方法6.2.1非选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法6.2.1.1平板的制备与保存按照6.1.1.1中要求进行。6.2.1.2工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。6.2.1.3接种17 GB4789.28—XXXX用1μL接种环进行平板划线（如图2）。A区用接种环按0.5cm的间隔划4条平行线，按同样的方法在B区和C区划线，最后在D区内划一条连续的曲线。同时接种两个平板，划线时可在培养基下面放一个模板图，并按标准规定的培养条件培养平板。图2目标菌半定量划线法接种模式图操作时用接种环而不用接种针，接种环应完全浸入培养基中。取一满环接种物，将接种环接触容器边缘3次可去除多余的液体。划线时，接种环与琼脂平面的角度应为20°～30°。接种环压在琼脂表面的压力和划线速度前后一致，整个划线应快速连续，移取液体培养物时应将接种环伸入培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫。通常用同一个接种环对A～D区进行划线，操作过程不需要对接种环灭菌。但为了得到低生长指数G，在接种不同部分时应更换接种环或对其灭菌。6.2.1.4计算培养后，评价菌落的形状、大小和生长密度，并计算生长指数G。每条有比较稠密菌落生长的划线则G为1，每个培养皿上G最大为16。如果仅一半的线有稠密菌落生长，则G为0.5。如果划线上没有菌落生长、生长量少于划线的一半或菌落生长微弱，则G为0。记录每个平板的得分总和便得到G。如，菌落在A区和B区全部生长，而在C区有一半线生长，则G为10。6.2.1.5结果解释目标菌在培养基上应呈现典型的生长。目标菌的生长指数G大于或等于6时，培养基可以接受。非选择培养基的G值通常较高。6.2.2选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法6.2.2.1目标菌半定量测试方法按照6.2.1中要求进行。6.2.2.2非目标菌(选择性)半定量测试方法按照6.1.2.2中要求进行。18 GB4789.28—XXXX6.2.3非选择性增菌培养基、选择性增菌培养基和选择性液体计数培养基的定性测试方法6.2.3.1培养基的制备将培养基分装试管，每管10mL。6.2.3.2工作菌悬液的制备-3将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜，进行10倍系列稀释至10，或采用其他方法,制备57成10CFU/mL～10CFU/mL的菌悬液作为工作菌悬液。6.2.3.3接种用1μL接种环取一环工作菌悬液直接接种到用于性能测试的液体培养基中，按适合的培养时间和温度进行培养。6.2.3.4结果解释用目测的浊度值(如0～2)评估培养基：——0表示无混浊；——1表示很轻微的混浊；——2表示严重的混浊。目标菌的浊度值应为2，非目标菌的浊度值应为0或1。有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团，沉积在试管或瓶子底部，发生这种情况时，小心振荡试管后再进行观察。选择性液体计数培养基目标菌应有产气现象，非目标菌无产气现象。6.2.4悬浮培养基和运输培养基的定性测试方法6.2.4.1培养基的制备按照6.1.6.1中要求进行。6.2.4.2工作菌悬液的制备将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。6.2.4.3接种用1μL接种环取一环工作菌悬液直接接种到装有待测培养基的试管中,混匀后，立即用10μL接种环取一环工作菌培养物划平行线接种平板，按标准方法中规定的培养时间和温度培养；剩余已接种菌液的待测培养基置20℃～25℃放置45min后，再用10μL接种环取一环工作菌培养物划平行线接种平板，按标准方法中规定的培养时间和温度培养。如保存条件有特殊要求的待测培养基，参照附录G培养基质量控制标准要求放置或培养后再进行划线接种。6.2.4.4结果观察与解释接种前后平板上目标菌的生长情况应均为良好。6.2.5Mueller-Hinton血琼脂的测试方法按照6.1.7中要求进行。6.2.6鉴定培养基的测试方法19 GB4789.28—XXXX按照6.1.8中要求进行。6.2.7实验试剂的测试方法按照6.1.9中要求进行。7测试结果的记录7.1制造商信息培养基制造商或供应商应按客户的要求提供培养基常规信息和相关测试菌株生长特性信息。7.2溯源性按照质量体系的要求，对所有培养基性能测试的数据归档，并在有效期内进行适当的保存。建议使用测试结果记录单（见附录G）进行文件记录并评价测试结果。20 GB4789.28—XXXX附录A培养基的不正确配制出现的质量问题及原因分析培养基的不正确配制出现的质量问题及原因分析见表A.1。表A.1常见质量问题与解答异常现象可能原因制备过程中过度加热低pH造成培养基酸解培养基不能凝固称量不正确琼脂未完全溶解培养基成分未充分混匀制备过程中过度加热水质不佳外部化学物质污染pH不正确测定pH时温度不正确pH计未正确校准脱水培养基质量差制备过程中过度加热水质不佳颜色异常pH不正确外来污染脱水培养基质量差制备过程中过度加热水质不佳产生沉淀脱水培养基质量差pH未正确控制原料中的杂质制备过程中过度加热脱水培养基质量差培养基出现抑制/低的生长率水质不佳使用成分不正确，如，成分称量不准，添加剂浓度不正确制备容器或水中的有毒残留物制备过程中过度加热脱水培养基质量差选择性差配方使用不对添加成分的加入不正确，例如加入添加成分时培养基过热或添加浓度错误添加剂污染不适当的灭菌污染无菌操作技术存在问题添加剂污染21 GB4789.28—XXXX附录B标准储存菌株和工作菌株的制备B.1图B.1给出了从标准菌株制备标准储存菌株的流程。获得标准菌株验证和文件归档a依据生产商指引进行复苏在5%的血琼脂、TSA或其他适合的固体培养基上进行分离b验证菌株的纯度和特性否符合是c用合适的培养基制备菌悬液de分装进行冻存或冻干f标准储存菌株a通常悬浮于营养肉汤中适宜时间进行复苏。b验证菌落形态和革兰氏染色或用生化试验进行鉴定。c例如，TSB添加10%~15%甘油作为冷冻保护培养基。d冻存管可含有多孔的小珠子。e在不高于-70℃低温冷冻保存可延长保存的时间。禁止采用较高的温度保存。f可作为工作菌株来使用。图B.1制作标准储存菌株的流程图22 GB4789.28—XXXXB.2图B.2给出了从标准储存菌株制备工作菌株的流程。a标准储存菌株迅速解冻b在适合的固体培养基上培养，即为工作c选择1在适合的固体培养基上培养选择2菌株验证菌株的纯度和形态验证菌株的纯度和形态否否符合符合是是de接种到合适的培养基或冻存菌悬液制备用于测试的工作菌株在合适的培养基上分离=工作菌株验证纯度否符合是制备用于测试的工作菌株a如果标准储存菌株来源于别处，应加以验证及归档。b此流程更合适。c此流程对某些菌株是必须的，如定量试验。对所有阶段进行归档。d例如，可接种到TSA斜面、TSA血琼脂斜面或其他合适的培养基，培养24h，然后在合适的温度(依据不同微生物在18℃~25℃或2℃~8℃)可存放4周。e例如，TSB添加10%~15%甘油作为冷冻保护培养基。在不高于-70℃低温冷冻保存可延长保存的时间。禁止采用较高的温度保存。图B.2制作工作菌株的流程图23 GB4789.28—XXXX附录C食品安全微生物检验标准中指定的培养基成分C.1蛋白胨酶解酪蛋白：包括胃蛋白酶消化的酪蛋白和胰蛋白酶消化的酪蛋白与胰蛋白胨。酶解大豆粉。酶解动物组织：包括肉胨、胃蛋白酶消化的肉组织和胰酶消化的肉组织。心酶解物。酶解明胶。酶解动物组织、植物组织：包括包括蛋白示、胨。C.2浸膏肉浸膏。脑心浸膏。酵母浸膏。细菌学牛胆汁。胆盐。3号胆盐。C.3琼脂细菌学琼脂。C.4其他卵黄乳液。脱脂奶粉。酸水解酪蛋白。24 GB4789.28—XXXX附录D生产商及实验室自制培养基和试剂的质量控制标准生产商及实验室自制培养基和试剂的质量控制标准见表D.1～表D.9。表D.1非选择性分离和计数固体培养基质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株参比培养基方法质控评定标准特征性反应36℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922—胰蛋白胨大豆琼脂固体非选择性分离生长率TSA定量PR≥0.724h±2h粪肠球菌ATCC29212—36℃±1℃中等偏小，边缘光滑的红色菌落，MC培养基固体非选择性计数生长率嗜热链球菌IFFI6038MC培养基定量PR≥0.748h±2h可有淡淡的晕圆形凸起,中等大小，边缘整齐,无德氏乳杆菌保加利亚亚种CICC6032色不透明36℃±1℃圆形凸起,菌落偏小，边缘整齐,无MRS培养基固体非选择性计数生长率嗜热链球菌IFFI6038MRS培养基定量PR≥0.748h±2h色不透明圆形，中等大小，边缘整齐，瓷白婴儿双歧杆菌CICC6069(厌氧培养)色3％氯化钠胰蛋白胨大豆36℃±1℃副溶血性弧菌ATCC178023%氯化钠固体非选择性分离生长率定量PR≥0.7无色半透明菌落琼脂（TSA）18h～24h创伤弧菌落ATCC27562TSA大肠埃希氏菌ATCC2592236℃±1℃营养琼脂固体非选择性分离生长率金黄色葡萄球菌ATCC6538TSA定量PR≥0.7—24h枯草芽胞杆菌ATCC6633含0.6%酵母浸膏的胰酪30℃±1℃固体非选择性分离生长率单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19115TSA定量PR≥0.7—胨大豆琼脂（TSA-YE）24h～48h大肠埃希氏菌ATCC2592236℃±1℃平板计数琼脂（PCA）固体非选择性计数生长率金黄色葡萄球菌ATCC6538TSA定量PR≥0.7—48h±2h枯草芽胞杆菌ATCC663325 GB4789.28—XXXX表D.2选择性分离和计数固体培养基质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株参比培养基方法质控评定标准特征性反应伤寒沙门氏菌黑色菌落，有金属光泽生长率CMCC(B)50071TSA定量PR≥0.5选择性分36℃±1℃亚硫酸铋琼脂(BS)固体鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028黑色或灰绿色菌落，有金属光泽离40h～48h大肠埃希氏菌ATCC25922选择性—半定量G≤1—粪肠球菌ATCC29212鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028绿-蓝色菌落，有黑心生长率福氏志贺氏菌TSA定量PR≥0.5选择性分36℃±1℃绿-蓝色菌落HE琼脂固体CMCC(B)51572离18h～24h大肠埃希氏菌ATCC25922G＜5橙红色菌落，可有胆酸沉淀选择性—半定量粪肠球菌ATCC29212G≤1—鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028黑色菌落生长率福氏志贺氏菌TSA定量PR≥0.5木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂选择性分36℃±1℃无色菌落，无黑心固体CMCC(B)51572(XLD)离18h～24h大肠埃希氏菌ATCC25922—G＜5黄色菌落选择性半定量金黄色葡萄球菌ATCC6538G≤1—生长率鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028TSA定量PR≥0.5按说明书判定大肠埃希氏菌ATCC25922—按说明书判定选择性分36℃±1℃沙门氏菌显色培养基固体特异性奇异变形杆菌定性离18h～24h——按说明书判定CMCC(B)49005选择性粪肠球菌ATCC29212半定量G≤1—单核细胞增生李斯特氏菌灰绿色菌落，中心凹陷黑色，周围有生长率TSA定量PR≥0.5选择性分36℃±1℃ATCC19115黑色PALCAM琼脂固体离24h～48h大肠埃希氏菌ATCC25922选择性—半定量G≤1—粪肠球菌ATCC29212大肠埃希氏菌ATCC25922TSA鲜桃红色或粉红色，可有胆酸沉淀选择性分生长率36℃±1℃福氏志贺氏菌定量PR≥0.5无色至浅粉红色，半透明棕色或绿色麦康凯琼脂（MAC）固体离20h～24hCMCC(B)51572菌落选择性金黄色葡萄球菌ATCC6538—半定量G≤1—生长率阪崎肠杆菌ATCC29544TSA定量PR≥0.5按说明书判定普通变形杆菌选择性分36℃±1℃－按说明书判定阪崎肠杆菌显色培养基固体特异性CMCC(B)49027定性离24h±2h—大肠埃希氏菌ATCC25922－按说明书判定选择性粪肠球菌ATCC29212半定量G≤1—26 GB4789.28—XXXX表D.2（续）培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株参比培养基方法质控评定标准特征性反应小肠结肠炎耶尔森氏菌生长率TSA定量PR≥0.5红色牛眼状菌落选择性分26℃±1℃CMCC(B)52204CIN-1培养基固体离特异性48h±2h大肠埃希氏菌ATCC25922定性－圆形、粉红色菌，边缘有胆汁沉淀环—选择性金黄色葡萄球菌ATCC6538半定量G≤1—小肠结肠炎耶尔森氏菌生长率TSA定量PR≥0.5无色透明不黏稠菌落选择性分26℃±1℃CMCC(B)52204改良Y培养基固体离特异性48h±2h大肠埃希氏菌ATCC25922定性－粉红色菌落—选择性金黄色葡萄球菌ATCC6538半定量G≤1—生长率大肠埃希氏菌ATCC25922TSA定量PR≥0.5黑色菌落，具金属光泽选择性分36℃±1℃鼠伤寒沙门氏菌伊红美蓝琼脂(EMB)固体特异性—定性－菌落呈无色、半透明离18h～24hATCC14028选择性金黄色葡萄球菌ATCC6538—半定量G＜5—大肠埃希氏菌O157:H7生长率TSA定量PR≥0.5无色菌落改良山梨醇麦康凯琼脂选择性分36℃±1℃NCTC12900固体(CT-SMAC)离特异性18h～24h大肠埃希氏菌ATCC25922定性—粉红色菌落，周围有胆盐沉淀—选择性金黄色葡萄球菌ATCC6538半定量G≤1—大肠埃希氏菌O157：生长率TSA定量PR≥0.5按说明书判定H7NCTC12900选择性分特异性36℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922定性—按说明书判定O157显色培养基固体—离18h～24h粪肠球菌ATCC29212半定量G≤1—选择性奇异变型杆菌—半定量G≤1—CMCC(B)49005单核细胞增生李斯特氏菌生长率TSA定量PR≥0.5蓝绿色菌落，带白色晕环ATCC19115选择性分36℃±1℃英诺克李斯特氏菌李斯特氏菌显色培养基固体特异性定性—蓝绿色菌落，无白色晕环离24h～48hATCC33090—大肠埃希氏菌ATCC25922选择性半定量G≤1—粪肠球菌ATCC29212福氏志贺氏菌白色，突起，无色素沉淀圈CMCC(B)51572生长率TSA定量PR≥0.5痢疾志贺氏菌白色，突起，有清晰环，无色素沉淀选择性分36℃±1℃志贺氏菌显色培养基固体CMCC(B)51105圈离20h～24h大肠埃希氏菌ATCC25922黄色，有清晰环，无色素沉淀圈特异性定性—产气肠杆菌ATCC13048—绿色菌落，无环和沉淀圈选择性金黄色葡萄球菌ATCC6538半定量G≤1—27 GB4789.28—XXXX表D.2（续）培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株参比培养基方法质控评定标准特征性反应42℃±1℃无抗生素的菌落有光泽、潮湿、扁平，呈扩散生生长率24h～48h空肠弯曲菌ATCC33291定量PR≥0.5选择性分CCD长倾向改良CCD（mCCD）琼脂固体微需氧离42℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922选择性—半定量G≤1—24h～48h金黄色葡萄球菌ATCC653842℃±1℃无抗生素的菌落灰色、扁平、湿润有光泽，呈沿生长率24h～48h，微空肠弯曲菌ATCC33291定量PR≥0.5选择性分CCD接种线向外扩散倾向Skirrow琼脂固体需氧离42℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922选择性—半定量G≤1—24h～48h金黄色葡萄球菌ATCC65383%氯化钠圆型扁平,中心不透明，边缘透明的黄生长率39.5℃±0.5℃创伤弧菌ATCC27562定量PR≥0.1改良纤维二糖-多黏菌素B-多选择性分TSA色菌落固体或36℃±1℃黏菌素E（mCPC）琼脂离特异性霍乱弧菌VBO定性—紫色菌落18h～24h—选择性副溶血性弧菌ATCC17802半定量G≤1—3%氯化钠圆型扁平,中心不透明，边缘透明的黄生长率39℃～40℃创伤弧菌ATCC27562定量PR≥0.5纤维二糖-多黏菌素E（CC）琼选择性分TSA色菌落固体或36℃±1℃脂离特异性霍乱弧菌VbO定性—紫色菌落18h～24h—选择性副溶血性弧菌ATCC17802半定量G≤1—3%氯化钠硫代硫酸钠-柠檬酸盐-胆盐-蔗选择性分生长率36℃±1℃副溶血性弧菌ATCC17802定量PR≥0.2绿色菌落固体TSA糖琼脂(TCBS)离18h～24h选择性大肠埃希氏菌ATCC25922—半定量G≤1—3%氯化钠生长率副溶血性弧菌ATCC17802定量PR≥0.5按说明书判定TSA选择性分36℃±1℃弧菌显色培养基固体霍乱弧菌VbO按说明书判定离特异性18h～24h—定性—溶藻弧菌ATCC33787按说明书判定选择性大肠埃希氏菌ATCC25922—半定量G≤1—金黄色葡萄球菌ATCC菌落黑色凸起，周围有一混浊带，在生长率TSA定量PR≥0.736℃±1℃25923其外层有一透明圈选择性计Baird-Parker琼脂固体18h～24h或表皮葡萄球菌数特异性—定性—黑色菌落，无混浊带和透明圈45h～48hCMCC(B)26069选择性大肠埃希氏菌ATCC25922—半定量G≤1—28 GB4789.28—XXXX表D.2（续）培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株参比培养基方法质控评定标准特征性反应大肠埃希氏菌ATCC25922结晶紫中性红胆盐琼脂选择性计生长率36℃±1℃TSA定量PR≥0.7有或无沉淀环的紫红色或红色菌落固体弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864(VRBA)数18h～24h选择性粪肠球菌ATCC29212—半定量G＜5—带有沉淀环的紫红色或红色菌落，有生长率大肠埃希氏菌ATCC25922TSA定量PR≥0.7选择性计36℃±1℃荧光VRB-MUG琼脂固体数特异性18h～24h弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864定性—可带有沉淀环的红色菌落，无荧光—选择性粪肠球菌ATCC29212半定量G＜5—酿酒酵母ATCC9763沙氏葡萄糖奶油色菌落生长率定量PR≥0.7选择性计28℃±1℃黑曲霉ATCC16404琼脂白色菌丝，黑色孢子马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)固体数5d大肠埃希氏菌ATCC25922选择性—半定量G≤1—金黄色葡萄球菌ATCC6538酿酒酵母ATCC9763沙氏葡萄糖奶油色菌落生长率定量PR≥0.7选择性计28℃±1℃黑曲霉ATCC16404琼脂白色菌丝，黑色孢子孟加红培养基固体数5d大肠埃希氏菌ATCC25922选择性—半定量G≤1—金黄色葡萄球菌ATCC6538MRS培养生长率婴儿双岐杆菌CICC6069定量PR≥0.7圆形凸起，边缘整齐，无色不透明36℃±1℃基莫匹罗星锂盐(Li-Mupirocin)改选择性计固体48h±2h德氏乳杆菌保加利亚亚种良MRS培养基数选择性厌氧培养CICC6032—半定量G≤1—嗜热链球菌IFFI6038蜡样芽胞杆菌菌落为微粉红色，周围有淡粉红色沉生长率TSA定量PR≥0.7甘露醇卵黄多粘菌素琼脂选择性计30℃±2℃CMCC(B)63303淀环固体(MYP)数特异性24h～48h枯草芽胞杆菌ATCC6633定性－黄色菌落，无沉淀环—选择性大肠埃希氏菌ATCC25922半定量G≤1—生长率36℃±1℃产气荚膜梭菌ATCC13124TSC定量PR≥0.7黑色菌落胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂选择性计固体20h～24h（TSC）数选择性艰难梭菌ATCC43593—半定量G≤1—厌氧培养29 GB4789.28—XXXX表D.3非选择性增菌培养基质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株接种计数培养基方法质控评定标准含0.6%酵母浸膏的胰酪胨30℃±1℃单核细胞增生李斯特氏菌液体非选择性增菌生长率TSA半定量混浊度2大豆肉汤(TSB-YE)24h～48hATCC19115液体硫乙醇酸盐培养基36℃±1℃液体非选择性增菌生长率产气荚膜梭菌ATCC13124哥伦比亚琼脂半定量混浊度2（FTG）18h～24h36℃±1℃取10μL增菌液倾注TSA平板36℃±1℃缓冲蛋白胨水(BP)液体非选择性增菌生长率鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028TSA半定量8h培养18h～24h，在TSA上＞100CFU36℃±1℃脑心浸出液肉汤(BHI)液体非选择性增菌生长率金黄色葡萄球菌ATCC6538TSA半定量混浊度218h～24h42℃±1℃布氏肉汤液体非选择性增菌生长率空肠弯曲菌ATCC33291无抗生素的CCD半定量混浊度1～248h±2h，微需氧表D.4选择性增菌培养基质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株接种计数培养基方法质控评定标准特征性反应单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19115在PALCAM上＞灰色至黑色菌落，生长率+大肠埃希氏菌ATCC25922半定量（LB2目标李氏增菌肉汤30℃±1℃10CFU，培养基变黑带有黑色晕环液体选择性增菌+粪肠球菌ATCC29212TSA菌接种量为300(LB1，LB2)24h大肠埃希氏菌ATCC25922CFU～500CFU）选择性在TSA上＜100CFU—粪肠球菌ATCC29212空肠弯曲菌ATCC33291空肠弯曲菌在改良生长率42℃±1℃+金黄色葡萄球菌ATCC6538无抗生素的CCDCCD平板上＞菌落呈灰白色Bolton肉汤液体选择性增菌24h～48h+大肠埃希氏菌ATCC25922半定量10CFU微需氧培养金黄色葡萄球菌ATCC6538选择性TSA在TSA上＜100CFU—大肠埃希氏菌ATCC2592230 GB4789.28—XXXX表D.4（续）接种计数培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株方法质控评定标准特征性反应培养基鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028生长率+大肠埃希氏菌ATCC25922在XLD上＞10CFU菌落无色半透明，有黑心四硫磺酸钠煌绿增42℃±1℃液体选择性增菌+铜绿假单胞菌ATCC27853TSA半定量菌液(TTB)18h～24h大肠埃希氏菌ATCC25922选择性在TSA上＜100CFU—粪肠球菌ATCC29212鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028生长率+大肠埃希氏菌ATCC25922在XLD上＞10CFU菌落无色半透明，有黑心亚硒酸盐胱氨酸增36℃±1℃液体选择性增菌+铜绿假单胞菌ATCC27853TSA半定量菌液(SC)18h～24h大肠埃希氏菌ATCC25922选择性在TSA上＜100CFU—粪肠球菌ATCC29212金黄色葡萄球菌ATCC6538在Baird-Parker上＞菌落黑色凸起，周围有一混浊10%氯化钠胰酪胨生长率36℃±1℃液体选择性增菌+大肠埃希氏菌ATCC25922TSA半定量10CFU带，在其外层有一透明圈大豆肉汤18h～24选择性大肠埃希氏菌ATCC25922在TSA上＜100CFU—金黄色葡萄球菌ATCC6538在Baird-Parker上＞菌落黑色凸起，周围有一混浊7.5%氯化钠胰酪生长率36℃±1℃液体选择性增菌+大肠埃希氏菌ATCC25922TSA半定量10CFU带，在其外层有一透明圈胨大豆肉汤18h～24h选择性大肠埃希氏菌ATCC25922在TSA上＜100CFU—小肠结肠炎耶尔森氏菌CMCC(B)52204在改良Y平板上＞生长率+粪肠球菌ATCC29212菌落圆形、无色透明，不黏稠26℃±1℃10CFU改良磷酸盐缓冲液液体选择性增菌+铜绿假单胞菌ATCC27853TSA半定量48h～72h金黄色葡萄球菌ATCC6538选择性在TSA上＜100CFU—粪肠球菌ATCC2921231 GB4789.28—XXXX表D.4（续）接种计数培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株方法质控评定标准特征性反应培养基改良月桂基硫酸盐胰蛋液体选择性增菌生长率44℃±0.5℃阪崎肠杆菌ATCC29544TSA半定量在阪崎肠杆菌显色培养基绿-蓝色菌落或按说明书判白胨肉汤-万古霉素24h±2h+大肠埃希氏菌ATCC25922上＞10CFU定+粪肠球菌ATCC29212大肠埃希氏菌ATCC25922选择性在TSA上＜100CFU—粪肠球菌ATCC29212蜡样芽胞杆菌CMCC(B)63303菌落为微粉红色，周围有胰酪胨大豆多粘菌素肉生长率30℃±1℃在MYP上＞10CFU液体选择性增菌+大肠埃希氏菌ATCC25922TSA半定量淡粉红色沉淀环汤24h～48h选择性大肠埃希氏菌ATCC25922在TSA上＜100CFU—41.5℃±0.5℃福氏志贺氏菌CMCC（B）51572无色至粉红色，半透明菌志贺氏菌增菌肉汤生长率在XLD上＞10CFU液体选择性增菌18h±2h+金黄色葡萄球菌ATCC6538TSA半定量落（shigellabroth）选择性厌氧培养金黄色葡萄球菌ATCC6538在TSA上＜100CFU—福氏志贺氏菌CMCC(B)51572生长率36℃±1℃在HE琼脂上＞10CFU菌落呈绿-蓝色GN增菌液液体选择性增菌+粪肠球菌ATCC29212TSA半定量8h选择性粪肠球菌ATCC29212在TSA上＜100CFU—副溶血性弧菌ATCC17802在弧菌显色培养基平板上品红色菌落或按说明书判3%氯化钠碱性蛋白胨生长率36℃±1℃3%TSA液体选择性增菌+大肠埃希氏菌ATCC25922半定量＞10CFU定水8h选择性大肠埃希氏菌ATCC25922TSA在TSA上＜100CFU—大肠杆菌O157：H7NCTC12900生长率36℃±1℃在CT-SMAC上＞10CFU菌落无色，中心灰褐色改良EC肉汤(mEC+n)液体选择性增菌+粪肠球菌ATCC29212TSA半定量18h～24h选择性粪肠球菌ATCC29212在TSA上＜100CFU—大肠杆菌O157：H7NCTC12900生长率+大肠埃希氏菌ATCC25922在CT-SMAC上＞10CFU菌落无色，中心灰褐色改良麦康凯(CT-MAC)36℃±1℃液体选择性增菌+金黄色葡萄球菌ATCC6538TSA半定量肉汤17h～19h大肠埃希氏菌ATCC25922选择性在TSA上＜100CFU—金黄色葡萄球菌ATCC653832 GB4789.28—XXXX表D.5选择性液体计数培养基质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株接种计数培养基方法质控评定标准大肠埃希氏菌ATCC25922月桂基磺酸盐胰蛋白胨肉选择性液体生长率36℃±1℃混浊度2，且气体充满管内1/3液体弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864TSA半定量汤(LST)计数24h～48h选择性粪肠球菌ATCC29212混浊度0（不生长）大肠埃希氏菌ATCC25922生长率混浊度2，且气体充满管内1/3选择性液体36℃±1℃弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)液体TSA半定量计数24h～48h浑浊度0（不生长）或浑浊度1（微选择性粪肠球菌ATCC29212弱生长），不产气选择性液体生长率44.5℃±0.2℃大肠埃希氏菌ATCC25922混浊度2，且气体充满管内1/3EC肉汤液体TSA半定量计数选择性24h～48h粪肠球菌ATCC29212浑浊度0（不生长）表D.6悬浮培养基和运输培养基培养基质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株接种计数培养基方法质控评定标准20℃～25℃大肠埃希氏菌ATCC25922磷酸盐缓冲液(PBS)液体悬浮培养基生长率TSA定量接种前后菌落数变化在±50%45min金黄色葡萄球菌ATCC653820℃～25℃3%氯化钠溶液液体悬浮培养基生长率副溶血性弧菌ATCC178023%TSA定量接种前后菌落数变化在±50%45min20℃～25℃0.1%蛋白胨水液体悬浮培养基生长率产气荚膜梭菌ATCC13124哥伦比亚琼脂定量接种前后菌落数变化在±50%45min－60℃缓冲甘油-氯化钠溶液液体运输培养基生长率产气荚膜梭菌ATCC13124哥伦比亚琼脂定量接种前后菌落数变化在±50%24h表D.7MuellerHinton血琼脂质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株方法质控评定标准药敏试验36℃±1℃MuellerHinton血琼脂固体生化特性空肠弯曲菌ATCC33291定性头孢唑林钠纸片无抑菌圈，萘啶酮酸纸片有抑菌圈培养基22h±2h，微需氧培养33 GB4789.28—XXXX表D.8鉴定培养基和实验试剂质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株方法质控评定标准a大肠埃希氏菌ATCC25922生长良好，A/A；产气；不产硫化氢a,b高层36℃±1℃肠炎沙门氏菌CMCC(B)50335生长良好，K/A；产气；产硫化氢三糖铁琼脂(TSI)鉴定生化特性定性斜面24h福氏志贺氏菌CMCC(B)51572生长良好，K/A；不产气；不产硫化氢铜绿假单胞菌ATCC27853生长良好，K/K；不产气；不产硫化氢西蒙氏柠檬酸盐培36℃±1℃肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117生长良好，培养基变蓝斜面鉴定生化特性定性养基24h±2h宋内志贺氏菌CMCC(B)51592生长不良或不长，培养基不变色36℃±1℃普通变形杆菌CMCC(B)49027生长良好，培养基变桃红色尿素琼脂(pH7.2)斜面鉴定生化特性定性24h大肠埃希氏菌ATCC25922生长良好，培养基变黄色36℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922阳性，培养基变蓝色醋酸盐利用试验斜面鉴定生化特性定性24h～48h宋内志贺氏菌CMCC(B)51592阴性，培养基不变色(绿色)3%氯化钠三糖铁琼高层36℃±1℃副溶血性弧菌ATCC17802生长良好，斜面变红，底部变黄鉴定生化特性定性脂(TSI)斜面18h～24h溶藻弧菌ATCC33787生长良好，斜面和底部均变黄a小肠结肠炎耶尔森氏菌CMCC（B）52204生长良好，A/A；不产气；不产硫化氢高层26℃±1℃鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028生长良好，A/A；产气，产硫化氢改良克氏双糖鉴定生化特性定性a,b斜面24h福氏志贺氏菌CMCC(B)51572生长良好，K/A；不产气，不产硫化氢粪产碱杆菌CMCC(B)40001生长良好，K/K；不产气，不产硫化氢邻硝基酚β-D半乳糖36℃±1℃肺炎克雷伯氏菌CMCC46117阳性，培养基变深黄色液体鉴定生化特性定性苷培养基(ONPG)24h伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071阴性，培养基无色或浅黄色蛋白胨水（靛基质试鉴定36℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922阳性，滴加靛基质试剂，显红色液体生化特性定性验）实验试剂18h～24h产气肠杆菌ATCC13048阴性，滴加靛基质试剂，黄色36℃±1℃普通变形杆菌CMCC(B)49027生长良好，培养基混浊氰化钾培养基(KCN)液体鉴定生化特性定性24h伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071不生长，澄清氰化钾对照培养基36℃±1℃普通变形杆菌CMCC(B)49027生长良好，培养基混浊液体鉴定生化特性定性(KCN)24h伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071生长良好，培养基混浊34 GB4789.28—XXXX表D.8（续）培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株方法质控评定标准36℃±1℃鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028生长良好，培养基变黄葡萄糖铵培养基斜面鉴定生化特性定性20h～24h福氏志贺氏菌CMCC(B)51572不生长，培养基不变色生长良好,滴加MR试剂1滴，培养基变红。滴加VP缓冲葡萄糖蛋白胨大肠埃希氏菌ATCC25922鉴定36℃±1℃甲液0.5mL和乙液0.2mL，20min内液面不显红色水［甲基红(MR)和液体生化特性定性实验试剂48h生长良好,滴加MR试剂1滴，培养基不变色。滴加PV-P试验］产气肠杆菌ATCC13048甲液0.5mL和乙液0.2mL，20min内液面显红色36℃±1℃单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19115阳性，培养基变黄鼠李糖发酵管液体鉴定生化特性定性24h±2h伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071阴性，培养基颜色不变0.5%蔗糖发酵管植物乳杆菌GIM1.140阳性，培养基变黄0.5%纤维二糖发酵管0.5%麦芽糖发酵管36℃±1℃0.5%甘露醇发酵管液体鉴定生化特性定性24h德氏乳杆菌保加利亚亚种CICC6032阴性，培养基紫色不变0.5%水杨苷发酵管0.5%山梨醇发酵管0.5%棉子糖发酵管七叶苷发酵管36℃±1℃，24h±2h鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028阳性，培养基呈紫色L-赖氨酸脱羧酶培养液体鉴定生化特性以灭菌液体石蜡覆盖定性基普通变形杆菌CMCC(B)49027阴性，培养基呈黄色培养基表面36℃±1℃，24h±2h鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028阳性，培养基呈紫色L-鸟氨酸脱羧酶试验液体鉴定生化特性以灭菌液体石蜡覆盖定性培养基普通变形杆菌CMCC(B)49027阴性，培养基呈黄色培养基表面36℃±1℃，24h±2h与各种氨基酸脱羧酶的阳性和氨基酸脱羧酶对照液体鉴定生化特性以灭菌液体石蜡覆盖定性生长良好，培养基呈黄色阴性质控菌株对应培养基表面35 GB4789.28—XXXX表D.8（续）培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株方法质控评定标准36℃±1℃，24h±2h鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028定性阳性，培养基呈紫色L-精氨酸双水解酶培养基液体鉴定生化特性以灭菌液体石蜡覆盖培养基表面普通变形杆菌CMCC(B)49027阴性，培养基呈黄色36℃±1℃，24h±2h精氨酸双水解酶对照液体鉴定生化特性鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028定性生长良好，培养基呈黄色以灭菌液体石蜡覆盖培养基表面阳性，滴加硝酸盐还原试剂甲、乙蜡样芽胞杆菌CMCC(B)6330330℃±1℃液各2～3滴，培养基变红棕色硝酸盐肉汤液体鉴定生化特性定性24h～48h阴性，滴加硝酸盐还原试剂甲、乙硝酸盐阴性不动杆菌CMCC(B)25001液各2～3滴，培养基不变色36℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922阳性，培养基变黄葡萄糖发酵管液体鉴定生化特性定性24h粪产碱杆菌CMCC(B)40001阴性，培养基不变色36℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922阳性，培养基变黄色甘露醇发酵管液体鉴定生化特性定性24h普通变形杆菌CMCC(B)49027阴性，培养基颜色不变36℃±1℃肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117阳性，培养基变黄色木糖发酵管液体鉴定生化特性定性24h单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19115阴性，养基颜色不变36℃±1℃普通变形杆菌CMCC(B)49027阳性，培养基呈黄色蔗糖发酵管液体鉴定生化特性定性24h鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028阴性，培养基颜色不变36℃±1℃肺炎克雷伯氏菌CMCC（B）46117阳性，培养基呈黄色纤维二糖发酵管液体鉴定生化特性定性24h大肠埃希氏菌ATCC25922阴性，培养基颜色不变36℃±1℃伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071阳性，培养基呈黄色麦芽糖发酵管液体鉴定生化特性定性24h铜绿假单胞菌ATCC9027阴性，培养基颜色不变36℃±1℃肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117阳性，培养基变黄水杨苷发酵管液体鉴定生化特性定性24h伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071阴性，培养基不变色36℃±1℃肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117阳性，培养基变黄色山梨醇发酵管液体鉴定生化特性定性24h宋内志贺氏菌CMCC(B)51592阴性，培养基颜色不变36 GB4789.28—XXXX表D.8（续）培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株方法质控评定标准36℃±1℃肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117阳性，培养基呈黄色棉籽糖液体鉴定生化特性定性24h普通变形杆菌CMCC(B)49027阴性，培养基颜色不变36℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922阳性，培养基呈黄色黏液酸利用试验液体鉴定生化特性定性24h～48h福氏志贺氏菌CMCC(B)51572阴性，养基颜色不变46℃±0.5℃产气荚膜梭菌ATCC13124定性（接种生长旺盛暴烈发酵含铁牛乳培养基液体鉴定生化特性2h与5h均观察大肠埃希氏菌ATCC25922的FT培养液1mL）不发酵36℃±1℃霍乱弧菌VbO生长良好，混浊无盐胨水液体鉴定生化特性定性24h副溶血性弧菌ATCC17802不生长，澄清36℃±1℃副溶血性弧菌ATCC17802生长良好，混浊3%氯化钠胨水液体鉴定生化特性定性24h创伤弧菌ATCC27562生长良好，混浊36℃±1℃副溶血性弧菌ATCC17802生长良好，混浊6%氯化钠胨水液体鉴定生化特性定性24h嗜水气单胞菌As1.172不生长，澄清36℃±1℃副溶血性弧菌ATCC17802生长良好，混浊8%氯化钠胨水液体鉴定生化特性定性24h创伤弧菌ATCC27562不生长，澄清36℃±1℃溶藻弧菌ATCC33787生长良好，混浊10%氯化钠胨水液体鉴定生化特性定性24h副溶血性弧菌ATCC17802不生长，澄清36℃±1℃副溶血性弧菌ATCC17802阳性，培养基变黄色3.0%氯化钠甘露醇液体鉴定生化特性定性24h～48h普通变形杆菌CMCC(B)49027阴性，培养基颜色不变36℃±1℃，24h～48h副溶血性弧菌ATCC17802阳性，培养基变紫色3.0%氯化钠赖氨酸脱羧酶液体鉴定生化特性定性以灭菌液体石蜡覆盖培养基表面普通变形杆菌CMCC(B)49027阴性，培养基变黄色3.0%氯化钠氨基酸脱羧酶36℃±1℃副溶血性弧菌ATCC17802生长良好，培养基变黄色液体鉴定生化特性定性对照24h～48h普通变形杆菌CMCC(B)49027生长良好，培养基变黄色37 GB4789.28—XXXX表D.8（续）培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株方法质控评定标准36℃±1℃肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117阳性，培养基变棕黑色七叶苷发酵管液体鉴定生化特性定性24h奇异变形杆菌CMCC(B)49005阴性，培养基颜色不变产气肠杆菌ATCC13048MR试验阴性，滴加MR试剂1滴培养基呈黄色MR试验阳性，滴加MR试剂1滴培养基呈红色；36℃±1℃副溶血性弧菌ATCC17802V-P试验阴性，滴加0.6mL甲液及0.2mL3.0%氯化钠MR-VP培养基液体鉴定生化特性定性48h乙液，培养基不变色V-P试验阳性,滴加0.6mL甲液及0.2mL乙溶藻弧菌ATCC33787液，培养基呈红色36℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922阳性，培养基变黄色乳糖发酵管液体鉴定生化特性定性24h伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071阴性，培养基颜色不变36℃±1℃弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864生长良好，培养基混浊Koser氏柠檬酸盐肉汤液体鉴定生化特性定性18h～96h大肠埃希氏菌ATCC25922不生长，培养基澄清半固36℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922硫化氢－动力＋/－靛基质＋SIM动力培养基鉴定生化特性定性体24h～48h伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071硫化氢＋/－动力＋靛基质－半固30℃±1℃蜡样芽胞杆菌CMCC(B)63303阳性，扩散生长动力培养基鉴定生化特性定性体24h～48h蕈状芽胞杆菌ATCC10206阴性，沿穿刺线生长36℃±1℃铜绿假单胞菌ATCC90272℃～8℃呈液态明胶培养基固体鉴定生化特性定性72h大肠埃希氏菌ATCC259222℃～8℃呈固态36℃±1℃金黄色葡萄球菌ATCC6538定性（接种培养18h～24h的血浆凝固兔血浆固体鉴定生化特性4h～6h表皮葡萄球菌CMCC(B)26069新鲜质控菌株肉汤1mL）血浆不凝固30℃±1℃蜡样芽胞杆菌CMCC(B)63303菌落周围有透明圈，培养基颜色由绿变蓝酪蛋白琼脂固体鉴定生化特性定性24h大肠埃希氏菌ATCC25922菌落周围没有透明圈，培养基由绿变蓝38 GB4789.28—XXXX表D.8（续）培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株方法质控评定标准沿穿刺线生长，加硝酸盐还原试剂甲乙液各产气荚膜梭菌ATCC131242滴变红色36℃±1℃沿穿刺线生长，加硝酸盐还原试剂甲乙液各缓冲动力-硝酸盐培养基固体鉴定生化特性硝酸盐阴性不动杆菌CMCC(B)25001定性24h2滴不变色扩散生长，加硝酸盐还原试剂甲乙液各2大肠埃希氏菌ATCC25922滴变红色36℃±1℃副溶血性弧菌ATCC33847定性菌落周围有半透明β溶血环我妻氏血琼脂固体鉴定生化特性24h副溶血性弧菌ATCC17802（点种接种）无溶血血琼脂平板36℃±1℃金黄色葡萄球菌ATCC6538定性菌落周围有β溶血环固体鉴定特异性哥伦比亚血琼脂24h±2h蜡样芽胞杆菌CMCC(B)63303（划线接种）菌落周围有α溶血环36℃±1℃阪崎肠杆菌ATCC29544阳性，培养基变黄蜜二糖液体鉴定生化特性定性24h小肠结肠炎耶尔森氏菌CMCC(B)52204阴性，培养基不变色36℃±1℃大肠埃希氏菌O157：H7NCTC12900阴性，无荧光MUG-LST液体鉴定生化特性定性18h～24h大肠埃希氏菌ATCC25922阳性，有荧光金黄色葡萄球菌ATCC6538革兰氏阳性，紫色球状菌体革兰氏染色液液体实验试剂生化特性—定性大肠埃希氏菌ATCC25922革兰氏阴性，红色杆状菌体单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19115阳性，产生气泡过氧化氢试剂液体实验试剂生化特性—定性粪肠球菌ATCC29212阴性，无气泡产生铜绿假单胞菌ATCC9027阳性，出现紫红色至紫黑色氧化酶试剂纸片实验试剂生化特性—定性大肠埃希氏菌ATCC25922阴性，不变色36℃±1℃鼠伤寒沙门氏菌CMCC(B)50115阳性，培养基变黄卫矛醇发酵管液体鉴定生化特性定性24h伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071阴性，培养基不变色36℃±1℃产气肠杆菌ATCC13048阳性，培养基变蓝丙二酸钠培养基液体鉴定生化特性定性48h普通变形杆菌CMCC(B)49027阴性，培养基不变色39 GB4789.28—XXXX表D.8（续）培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株方法质控评定标准36℃±1℃，44h±4h，微需氧培养生长良好定性伦比亚琼脂平板鉴定生化特性25℃±1℃，44h±4h，微需氧培养空肠弯曲菌ATCC33291不生长（划线接种）42℃±1℃，44h±4h，需氧培养不生长阳性，滴加印三酮试剂0.2mL在36±1℃/水浴锅或空肠弯曲菌ATCC33291马尿酸钠溶液（茚鉴定培养箱10min，出现深紫色液体生化特性36℃±1℃，水浴2h或36℃±1℃培养箱4h定性三酮试剂）实验试剂阴性，滴加印三酮试剂0.2mL在36±1℃/水浴锅或结肠弯曲菌ATCC43478培养箱10min，黄色吲哚乙酸酯纸片纸片实验试剂生化特性—空肠弯曲菌ATCC33291定性阳性，5min～10min内出现深蓝色aA表示产酸，培养基变黄。bK表示产碱，培养基变红。40 GB4789.28—XXXX表D.9质控菌株中文名和学名一览表质控菌株中文名质控菌株学名质控菌株中文名质控菌株学名大肠埃希氏菌Escherichiacoli单核细胞增生李斯特氏菌Listeriamonocytogenes福氏志贺氏菌Shigellaflexneri英诺克李斯特氏菌Listeriainnocua痢疾志贺氏菌Shigelladysenteriae小肠结肠炎耶尔森氏菌Yersiniaenterocolitica宋内志贺氏菌Shigellasonnei弗氏柠檬酸杆菌Citrobacterfreundii阪崎肠杆菌Enterobactersakazakii婴儿双岐杆菌Bifidobacteriuminfantis产气肠杆菌Enterobacteraerogenes德氏乳杆菌保加利亚亚种Lactobacillusdelbrueckiisubsp.bulgaricus肺炎克雷伯氏菌Klebsiellapneumoniae粪产碱杆菌Alcaligenesfaecalis伤寒沙门氏菌Salmonellatyphi植物乳杆菌Lactobacillusplantarum鼠伤寒沙门氏菌Salmonellatyphimurium硝酸盐阴性不动杆菌Acinetobacteranitratum肠炎沙门氏菌Salmonellaenteritidis创伤弧菌vibriovulnificus奇异变形杆菌Proteusmirabilis霍乱弧菌Vibriocholerae普通变形杆菌Proteusvulgaris副溶血性弧菌Vibrioparahaemolyticus空肠弯曲菌Campylobacterjejuni溶藻弧菌Vibrioalginolyticus结肠弯曲菌Campylobactercoli铜绿假单胞菌Pseudomonasaeruginosa嗜水气单胞菌Aeromonashydrophila枯草芽胞杆菌Bacillussubtilis粪肠球菌Enterococcusfaecalis蕈状芽胞杆菌Bacillusmycoides金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus产气荚膜梭菌Clostridiumperfringens表皮葡萄球菌Staphylococcusepidermidis艰难梭菌Clostridiumdifficile嗜热链球菌Streptococcusthermophilus酿酒酵母Saccharomycescerevisiae蜡样芽胞杆菌Bacilluscereus黑曲霉Aspergillusniger41 GB4789.28—XXXX附录E实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制标准实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制标准见表E.1～表E.6。表E.1非选择性分离和计数固体培养基质量控制标准半定量质控培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株特征性反应评定标准36℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922—胰蛋白胨大豆琼脂固体非选择性分离生长率G≥624h±2h粪肠球菌ATCC29212—36℃±1℃MC培养基固体非选择性计数生长率嗜热链球菌IFFI6038G≥6中等偏小，边缘光滑的红色菌落，可有淡淡的晕48h±2h德氏乳杆菌保加利亚亚种CICC6032圆形凸起，中等大小，边缘整齐，无色不透明36℃±1℃MRS培养基固体非选择性计数生长率嗜热链球菌IFFI6038G≥6圆形凸起，菌落偏小，边缘整齐，无色不透明48h±2h婴儿双歧杆菌CICC6069(厌氧培养)圆形，中等大小，边缘整齐，瓷白色3％氯化钠胰蛋白胨大豆36℃±1℃副溶血性弧菌ATCC17802固体非选择性分离生长率G≥6无色半透明菌落琼脂（TSA）18h～24h创伤弧菌落ATCC27562大肠埃希氏菌ATCC2592236℃±1℃营养琼脂固体非选择性分离生长率金黄色葡萄球菌ATCC6538G≥6—24h枯草芽胞杆菌ATCC6633含0.6%酵母浸膏的胰酪30℃±1℃固体非选择性分离生长率单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19115G≥6—胨大豆琼脂(TSA-YE)24h～48h大肠埃希氏菌ATCC2592236℃±1℃平板计数琼脂(PCA)固体非选择性计数生长率金黄色葡萄球菌ATCC6538G≥6—48h±2h枯草芽胞杆菌ATCC663342 GB4789.28—XXXX表E.2选择性分离和计数固体培养基质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株半定量质控评定标准特征性反应伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071G≥6黑色菌落，有金属光泽生长率36℃±1℃鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028G≥6黑色或灰绿色菌落，有金属光泽亚硫酸铋琼脂(BS)固体选择性分离40h～48h大肠埃希氏菌ATCC25922选择性G≤1—粪肠球菌ATCC29212鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028绿-蓝色菌落，有黑心生长率G≥636℃±1℃福氏志贺氏菌CMCC(B)51572绿-蓝色菌落HE琼脂固体选择性分离18h～24h大肠埃希氏菌ATCC25922G＜5橙红色菌落，可有胆酸沉淀选择性粪肠球菌ATCC29212G≤1—鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028黑色菌落生长率G≥636℃±1℃福氏志贺氏菌CMCC(B)51572无色菌落，无黑心木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂(XLD)固体选择性分离18h～24h大肠埃希氏菌ATCC25922G＜5黄色菌落选择性金黄色葡萄球菌ATCC6538G≤1—生长率鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028G≥6按说明书判定36℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922—按说明书判定沙门氏菌显色培养基固体选择性分离特异性18h～24h奇异变形杆菌CMCC(B)49005—按说明书判定选择性粪肠球菌ATCC29212G≤1—生长率单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19115G≥6灰绿色菌落，中心凹陷黑色，周围有黑色36℃±1℃PALCAM琼脂固体选择性分离大肠埃希氏菌ATCC25922选择性24h～48hG≤1—粪肠球菌ATCC29212大肠埃希氏菌ATCC25922鲜桃红色或粉红色，可有胆酸沉淀生长率36℃±1℃G≥6麦康凯琼脂（MAC）固体选择性分离福氏志贺氏菌CMCC(B)51572无色至浅粉红色，半透明棕色或绿色菌落20h～24h选择性金黄色葡萄球菌ATCC6538G≤1—43 GB4789.28—XXXX表E.2（续）培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株半定量质控评定标准特征性反应生长率阪崎肠杆菌ATCC29544G≥6按说明书判定36℃±1℃普通变形杆菌CMCC(B)49027—按说明书判定阪崎肠杆菌显色培养基固体选择性分离特异性24h±2h大肠埃希氏菌ATCC25922—按说明书判定选择性粪肠球菌ATCC29212G≤1—生长率小肠结肠炎耶尔森氏菌CMCC(B)52204G≥6红色牛眼状菌落选择性26℃±1℃CIN-1培养基固体特异性大肠埃希氏菌ATCC25922—圆形、粉红色菌，边缘有胆汁沉淀环分离48h±2h选择性金黄色葡萄球菌ATCC6538G≤1—生长率小肠结肠炎耶尔森氏菌CMCC(B)52204G≥6无色透明不黏稠菌落选择性26℃±1℃改良Y培养基固体特异性大肠埃希氏菌ATCC25922—粉红色菌落分离48h±2h选择性金黄色葡萄球菌ATCC6538G≤1—生长率大肠埃希氏菌ATCC25922G≥6黑色菌落，具金属光泽选择性36℃±1℃伊红美蓝琼脂(EMB)固体特异性鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028—菌落呈无色、半透明分离18h～24h选择性金黄色葡萄球菌ATCC6538G＜5—生长率大肠埃希氏菌O157:H7NCTC12900G≥6无色菌落改良山梨醇麦康凯琼脂选择性36℃±1℃固体特异性大肠埃希氏菌ATCC25922—粉红色菌落，周围有胆盐沉淀(CT-SMAC)分离18h～24h选择性金黄色葡萄球菌ATCC6538G≤1—生长率大肠埃希氏菌O157：H7NCTC12900G≥6按说明书判定选择性特异性36℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922—按说明书判定O157显色培养基固体分离18h～24h粪肠球菌ATCC29212—选择性G≤1奇异变型杆菌CMCC(B)49005—生长率单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19115G≥6蓝绿色菌落，带白色晕环选择性特异性36℃±1℃英诺克李斯特氏菌ATCC33090—蓝绿色菌落，无白色晕环李斯特氏菌显色培养基固体分离24h～48h大肠埃希氏菌ATCC25922选择性G≤1—粪肠球菌ATCC2921244 GB4789.28—XXXX表E.2（续）培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株半定量质控评定标准特征性反应福氏志贺氏菌CMCC(B)51572G≥6白色，突起，无色素沉淀圈生长率痢疾志贺氏菌CMCC(B)51105—白色，突起，有清晰环，无色素沉淀圈36℃±1℃志贺氏菌显色培养基固体选择性分离大肠埃希氏菌ATCC25922—黄色，有清晰环，无色素沉淀圈特异性20h～24h产气肠杆菌ATCC13048—绿色菌落，无环和沉淀圈选择性金黄色葡萄球菌ATCC6538G≤1—42℃±1℃G≥6菌落有光泽、潮湿、扁平，呈扩散生长倾向生长率空肠弯曲菌ATCC33291改良CCD（mCCD）琼24h～48h，微需氧固体选择性分离脂42℃±1℃/大肠埃希氏菌ATCC25922G≤1—选择性24h～48h金黄色葡萄球菌ATCC6538—按说明书判定42℃±1℃/24h～G≥6菌落灰色、扁平、湿润有光泽，呈沿接种线向外扩散倾生长率空肠弯曲菌ATCC3329148h，微需氧向Skirrow琼脂固体选择性分离42℃±1℃大肠埃希氏菌ATCC25922G≤1—选择性24h～48h金黄色葡萄球菌ATCC6538—按说明书判定改良纤维二糖-多黏菌生长率39.5℃±0.5℃创伤弧菌ATCC27562G≥1圆型扁平，中心不透明，边缘透明的黄色菌落素B-多黏菌素E固体选择性分离特异性或36℃±1℃霍乱弧菌VBO—紫色菌落（mCPC）琼脂选择性18h～24h副溶血性弧菌ATCC17802G≤1—生长率39℃～40℃创伤弧菌ATCC27562G≥6圆型扁平，中心不透明，边缘透明的黄色菌落纤维二糖-多黏菌素E固体选择性分离特异性或36℃±1℃霍乱弧菌VbO—紫色菌落（CC）琼脂选择性18h～24h副溶血性弧菌ATCC17802G≤1—硫代硫酸钠-柠檬酸盐-生长率36℃±1℃副溶血性弧菌ATCC17802G≥1绿色菌落固体选择性分离胆盐-蔗糖琼脂(TCBS)选择性18h～24h大肠埃希氏菌ATCC25922G≤1—生长率副溶血性弧菌ATCC17802G≥6按说明书判定36℃±1℃霍乱弧菌VbO—按说明书判定弧菌显色培养基固体选择性分离特异性18h～24h溶藻弧菌ATCC33787—按说明书判定选择性大肠埃希氏菌ATCC25922G≤1—45 GB4789.28—XXXX表E.2（续）培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株半定量质控评定标准特征性反应生长率36℃±1℃金黄色葡萄球菌ATCC25923G≥6菌落黑色凸起，周围有一混浊带，在其外层有一透明圈Baird-Parker琼脂固体选择性计数特异性18h～24h或表皮葡萄球菌CMCC(B)26069—黑色菌落，无混浊带和透明圈选择性45h～48h大肠埃希氏菌ATCC25922G≤1—生长率大肠埃希氏菌ATCC25922有或无沉淀环的紫红色或红色菌落结晶紫中性红胆盐琼脂36℃±1℃G≥6固体选择性计数弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864—(VRBA)选择性18h～24h粪肠球菌ATCC29212G＜5—生长率大肠埃希氏菌ATCC25922G≥6带有沉淀环的紫红色或红色菌落，有荧光36℃±1℃VRB-MUG琼脂固体选择性计数特异性弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864—可带有沉淀环的红色菌落，无荧光18h～24h选择性粪肠球菌ATCC29212G＜5—酿酒酵母ATCC9763奶油色菌落生长率G≥6马铃薯葡萄糖琼脂28℃±1℃黑曲霉ATCC16404白色菌丝，黑色孢子固体选择性计数(PDA)5d大肠埃希氏菌ATCC25922选择性G≤1—金黄色葡萄球菌ATCC6538酿酒酵母ATCC9763奶油色菌落生长率G≥628℃±1℃黑曲霉ATCC16404白色菌丝，黑色孢子孟加红培养基固体选择性计数5d大肠埃希氏菌ATCC25922选择性G≤1—金黄色葡萄球菌ATCC6538莫匹罗星锂盐生长率36℃±1℃婴儿双岐杆菌CICC6069G≥6圆形凸起，边缘整齐，无色不透明(Li-Mupirocin)改良固体选择性计数48h±2h德氏乳杆菌保加利亚亚种CICC6032—选择性G≤1MRS培养基厌氧培养嗜热链球菌IFFI6038—生长率蜡样芽胞杆菌CMCC(B)63303G≥6菌落为微粉红色，周围有淡粉红色沉淀环甘露醇卵黄多黏菌素琼30℃±2℃固体选择性计数特异性枯草芽胞杆菌ATCC6633－黄色菌落，无沉淀环脂(MYP)24h～48h选择性大肠埃希氏菌ATCC25922G≤1—生长率36℃±1℃产气荚膜梭菌ATCC13124G≥6黑色菌落胰胨-亚硫酸盐-环丝氨固体选择性计数20h～24h酸琼脂（TSC）选择性艰难梭菌ATCC43593G≤1—厌氧培养46 GB4789.28—XXXX表E.3非选择性增菌培养基质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株定性质控评定标准含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤(TSB-YE)液体非选择性增菌生长率30℃±1℃，24h～48h单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19115混浊度2液体硫乙醇酸盐培养基（FTG）液体非选择性增菌生长率36℃±1℃，18h～24h产气荚膜梭菌ATCC13124混浊度2缓冲蛋白胨水(BP)液体非选择性增菌生长率36℃±1℃，18h～24h鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028混浊度2脑心浸出液肉汤(BHI)液体非选择性增菌生长率36℃±1℃，18h～24h金黄色葡萄球菌ATCC6538混浊度2布氏肉汤液体非选择性增菌生长率42℃±1℃，48h±2h，微需氧空肠弯曲菌ATCC33291混浊度1～2表E.4选择性增菌培养基质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株定性质控评定标准生长率鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028浊度242℃±1℃四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)液体选择性增菌大肠埃希氏菌ATCC25922选择性18h～24h浊度0（不生长）粪肠球菌ATCC29212生长率鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028浊度236℃±1℃亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)液体选择性增菌大肠埃希氏菌ATCC25922浊度0（不生长）或浊度1（微选择性18h～24h粪肠球菌ATCC29212弱生长）生长率36℃±1℃金黄色葡萄球菌ATCC6538浊度210%氯化钠胰酪胨大豆肉汤液体选择性增菌选择性18h～24大肠埃希氏菌ATCC25922浊度0（不生长）生长率36℃±1℃金黄色葡萄球菌ATCC6538浊度27.5%氯化钠胰酪胨大豆肉汤液体选择性增菌选择性18h～24h大肠埃希氏菌ATCC25922浊度0（不生长）生长率小肠结肠炎耶尔森氏菌CMCC(B)52204浊度226℃±1℃改良磷酸盐缓冲液液体选择性增菌金黄色葡萄球菌ATCC6538选择性48h～72h浊度0（不生长）粪肠球菌ATCC29212生长率阪崎肠杆菌ATCC29544浊度2改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨44℃±0.5℃液体选择性增菌大肠埃希氏菌ATCC25922肉汤-万古霉素选择性24h±2h浊度0（不生长）粪肠球菌ATCC29212生长率30℃±1℃蜡样芽胞杆菌CMCC(B)63303浊度2胰酪胨大豆多黏菌素肉汤液体选择性增菌选择性24h～48h大肠埃希氏菌ATCC25922浊度0（不生长）47 GB4789.28—XXXX表E.4（续）培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株定性质控评定标准志贺氏菌增菌肉汤（shigella生长率41.5℃±0.5℃，18h±2h，福氏志贺氏菌CMCC（B）51572浊度2液体选择性增菌broth）选择性厌氧培养金黄色葡萄球菌ATCC6538浊度0（不生长）生长率福氏志贺氏菌CMCC(B)51572浊度236℃±1℃GN增菌液液体选择性增菌浊度0（不生长）或浊度1（微选择性18h～24h粪肠球菌ATCC29212弱生长）生长率副溶血性弧菌ATCC17802浊度236℃±1℃3%氯化钠碱性蛋白胨水液体选择性增菌浊度0（不生长）或浊度1（微选择性18h～24h大肠埃希氏菌ATCC25922弱生长）生长率36℃±1℃大肠杆菌O157：H7NCTC12900浊度2改良EC肉汤(mEC+n)液体选择性增菌选择性18h～24h粪肠球菌ATCC29212浊度0（不生长）生长率大肠杆菌O157：H7NCTC12900浊度236℃±1℃改良麦康凯(CT-MAC)肉汤液体选择性增菌大肠埃希氏菌ATCC25922浊度0（不生长）或浊度1（微选择性17h～19h金黄色葡萄球菌ATCC6538弱生长）生长率单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19115浊度230℃±1℃李氏增菌肉汤(LB1，LB2)液体选择性增菌大肠埃希氏菌ATCC25922选择性24h浊度0（不生长）粪肠球菌ATCC29212生长率42℃±1℃空肠弯曲菌ATCC33291浊度2Bolton肉汤液体选择性增菌24h～48h金黄色葡萄球菌ATCC6538选择性浊度0（不生长）微需氧培养大肠埃希氏菌ATCC2592248 GB4789.28—XXXX表E.5选择性液体计数培养基质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株定性质控评定标准大肠埃希氏菌ATCC25922生长率36℃±1℃混浊度2，且管内有气体月桂基磺酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)液体选择性液体计数弗氏柠檬酸杆菌ATCC4386424h～48h选择性粪肠球菌ATCC29212浊度0(不生长)大肠埃希氏菌ATCC25922生长率混浊度2，且管内有气体36℃±1℃弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)液体选择性液体计数24h～48h浊度0（不生长）或浊度1(微弱生选择性粪肠球菌ATCC29212长)，不产气生长率44.5℃±0.2℃大肠埃希氏菌ATCC25922混浊度2，且管内有气体EC肉汤液体选择性液体计数选择性24h～48h粪肠球菌ATCC29212浊度0(不生长)表E.6悬浮培养基和运输培养基质量控制标准培养基状态功能分类质控指标培养条件质控菌株定性质控评定标准大肠埃希氏菌ATCC25922磷酸盐缓冲液(PBS)液体悬浮培养基生长率20℃～25℃，45min混浊度2，接种后平板上目标菌生长良好金黄色葡萄球菌ATCC65383%氯化钠溶液液体悬浮培养基生长率20℃～25℃，45min副溶血性弧菌ATCC17802混浊度2，接种后平板上目标菌生长良好0.1%蛋白胨水液体悬浮培养基生长率20℃～25℃，45min产气荚膜梭菌ATCC13124混浊度2，接种后平板上目标菌生长良好缓冲甘油-氯化钠溶液液体运输培养基生长率-60℃，24h产气荚膜梭菌ATCC13124混浊度2，接种后平板上目标菌生长良好49 GB4789.28—xxxx附录F螺旋平板法F.1一般要求使用螺旋接种仪将样品接种在平板上。样品接种后，菌落即分布在螺旋轨迹上，随半径的增加分布得越来越稀。采用特殊的计数栅格，自平板外周向中央对平皿上的菌落进行计数，即可得到样品中微生物的数量。F.2实验步骤取制备好的适宜稀释度的样品稀释液，以选定的模式接种于实验所用平板，每个稀释度接种两块平板，接种每一个样品前后均按仪器设定程序对螺旋接种仪进行清洗消毒。按相同接种模式接种悬浮液作为空白对照。将平板按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养后，计数每个平板菌落数，并记录下来。F.3菌落总数的计算和记录平板上菌落数符合菌落计数仪规定计数范围的为合适范围。如果两个稀释度的四个平板菌落数均在合适范围内，则将四个平板菌落数的平均值作为每克（毫升）样品中的菌落数；如果只有一个稀释度的两个平板菌落数在合适范围内，则将这两个平板菌落数的平均值作为每克（毫升）样品中的菌落数。当低稀释度的两个平板菌落数都少于合适范围的下限时，计算这一稀释度两个平板菌落数的平均值作为每克（毫升）样品中的菌落数。给这个数注上星号（*），表明该数是从菌落数在计数范围之外的平板估计所得。当所有平板上的菌落数都超过合适范围的上限时，计算高稀释度两个平板菌落数的平均值作为每克（毫升）样品中的菌落数，给这个数注上星号（*）。如果所有稀释度的平板都没有菌落，则以小于1乘以稀释倍数和接种体积作为每克（毫升）样品中的菌落数，给这个数注上星号（*）。记录时，只有在换算到每克（毫升）样品中的菌落数时，才能定下两位有效数字，第三位数字采用四舍五入的方法记录。也可将样品的菌落数记录为10的指数形式。F.4结果的表述根据F.3归档计算出每克（毫升）样品的菌落数，固体样品以CFU/g为单位，液体样品以CFU/mL为单位。50 GB4789.28—xxxx附录G用于实验室自制或使用商品化培养基的测试结果记录表G.1给出用于实验室自制或使用商品化培养基的测试结果记录单样本。表G.1培养基测试结果记录单样本培养基内部质量测试控制卡培养基：制备体积：倾倒日期：内部批号：脱水培养基（批号）：供应商：批：总量：日期/签名：添加剂：供应商：批：总量：日期/签名：制备详情：物理质量控制：预期pH：测定pH：质量确认：缺陷：日期/签名：是□否□预期质量：观察：质量确认：缺陷：日期/签名：是□否□预期颜色：观察：质量确认：缺陷：日期/签名：是□否□预期透明度/可见杂质：观察：质量确认：缺陷：日期/签名：是□否□预期凝胶稳定性/粘稠度/观察：质量确认：缺陷：日期/签名：湿度：是□否□微生物污染测试平板或试管编号：结果：质量确认：污染平板或试管编号：日期/签名：培养：是□否□微生物生长——生长率控制方法：定量□定性□菌株：判定标准：结果：质量确认：日期/签名：培养：是□否□参考培养基：微生物生长——选择性控制方法：定量□定性□菌株：判定标准：结果：质量确认：日期/签名：培养：是□否□参考培养基：微生物生长——特异性控制方法：定量□定性□菌株：判定标准：结果：质量确认：日期/签名：培养：是□否□参考培养基：本批发放：储存详情：本批发放：是□否□日期/签名：51'