GB5009.121-2016食品安全国家标准食品中脱氢乙酸的测定.pdf 10页

'中华人民共和国国家标准GB5009.121—2016食品安全国家标准食品中脱氢乙酸的测定2016-08-31发布2016-09-20实施中华人民共和国发布国家卫生和计划生育委员会 GB5009.121—2016前言本标准代替GB/T5009.121—2003《食品中脱氢乙酸的测定》。本标准与GB/T5009.121—2003相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中脱氢乙酸的测定”;———增加液相色谱法;———液相色谱法采用GB/T23377—2009的方法;———增加试样分类;———改进气相色谱法中样品的制备和提取方法;———修改气相色谱法的色谱条件。Ⅰ GB5009.121—2016食品安全国家标准食品中脱氢乙酸的测定1范围本标准规定了果蔬汁、果蔬浆、酱菜、发酵豆制品、黄油、面包、糕点、烘烤食品馅料、复合调味料、预制肉制品及熟肉制品中脱氢乙酸含量的测定方法。本标准适用于果蔬汁、果蔬浆、酱菜、发酵豆制品、黄油、面包、糕点、烘烤食品馅料、复合调味料、预制肉制品及熟肉制品中脱氢乙酸含量的测定,其他食品可参考执行。第一法气相色谱法2原理固体(半固体)样品,沉降蛋白、经脱脂酸化后,用乙酸乙酯提取;果蔬汁、果蔬浆样品经酸化后,用乙酸乙酯提取;用配氢火焰离子化检测器的气相色谱仪分离测定,以色谱峰的保留时间定性,外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1乙酸乙酯(C4H8O2):色谱纯。3.1.2正己烷(C6H14):色谱纯。3.1.3盐酸(HCl)。3.1.4硫酸锌(ZnSO4·7H2O)。3.1.5氢氧化钠(NaOH)。3.2试剂配制3.2.1盐酸溶液(1+1,体积比):量取50mL盐酸加入到50mL水中。3.2.2硫酸锌溶液(120g/L):称取12g硫酸锌,溶于水并稀释至100mL。3.2.3氢氧化钠溶液(20g/L):称取2g氢氧化钠,溶于水并稀释至100mL。3.3标准品脱氢乙酸(DehydroaceticAcid,C8H8O4,CAS:520-45-6)标准品:纯度≥99.5%。3.4标准溶液的制备3.4.1脱氢乙酸标准贮备液(1.0mg/mL):准确称取脱氢乙酸标准品0.1000g(精确至0.0001g)于100mL容量瓶中,用乙酸乙酯溶解并定容。4℃保存,有效期为3个月。1 GB5009.121—20163.4.2脱氢乙酸标准工作液:分别精确吸取脱氢乙酸标准贮备液0.01mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL于10mL容量瓶中,用乙酸乙酯稀释并定容,配制成浓度为1.00μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL标准工作液。4℃保存,有效期为1个月。4仪器和设备4.1气相色谱仪,配氢火焰离子化检测器。4.2天平:感量为0.1mg和1mg。4.3离心机:转速≥4000r/min。4.4超声波清洗器:功率35kW。4.5粉碎机。4.6不锈钢高速均质器。4.7pH计。5分析步骤5.1试样制备5.1.1果蔬汁、果蔬浆:称取样品2g~5g(精确至0.001g),置于50mL离心管中,加10mL水振摇1min,加1mL盐酸溶液(3.2.1)酸化后,准确加入5.0mL乙酸乙酯,振摇提取2min,静置分层,取上清液供气相色谱测定。5.1.2酱菜、发酵豆制品:样品用不锈钢高速均质器均质。称取样品2g~5g(精确至0.001g),置于50mL离心管中,加入约15mL水、2.5mL硫酸锌溶液(3.2.2),用氢氧化钠溶液(3.2.3)调pH至7.5,超声提取15min,转移至25mL容量瓶中,加水定容。样液移入离心管中,4000r/min离心10min。取10mL上清液,加1mL盐酸溶液(3.2.1)酸化后,准确加入5.0mL乙酸乙酯,振摇2min,静置分层,取上清液供气相色谱测定。5.1.3面包、糕点、烘烤食品馅料、复合调味料、预制肉制品及熟肉制品:样品用粉碎机粉碎或不锈钢高速均质器均质。称取样品2g~5g(精确至0.001g),置于50mL离心管中,加入约15mL水、2.5mL硫酸锌溶液(3.2.2),用氢氧化钠溶液(3.2.3)调pH至7.5,超声提取15min,转移至25mL容量瓶中,加水定容。样液移入分液漏斗中,加入5mL正己烷,振摇1min,静置分层,取下层水相置于离心管中,4000r/min离心10min。取10mL上清液,加1mL盐酸溶液(3.2.1)酸化后,准确加入5.0mL乙酸乙酯,振摇2min,静置分层,取上清液供气相色谱测定。5.1.4黄油:称取样品2g~5g(精确至0.001g),置于50mL离心管中,加入约15mL水、2.5mL硫酸锌溶液(3.2.2),用氢氧化钠溶液(3.2.3)调pH至7.5,超声提取15min,转移至25mL容量瓶中,加水定容。样液移入分液漏斗中,加入5mL正己烷,振摇1min,静置分层,取下层水相置于离心管中,4000r/min离心10min。取10mL上清液,加1mL盐酸溶液(3.2.1)酸化后,准确加入5.0mL乙酸乙酯,振摇2min,静置分层,取上清液供气相色谱测定。5.2仪器参考条件5.2.1毛细管柱:极性毛细柱(化学键和聚乙二醇固定相,30m×0.32mm×0.25μm),或相当者。5.2.2柱温升温程序:初温150℃,以10℃/min速率升至210℃,20℃/min速率升至240℃,保持2min。5.2.3进样口温度:240℃。5.2.4检测器温度:300℃。2 GB5009.121—20165.2.5载气(N2)流量:1.0mL/min。5.2.6分流进样,分流比为5∶1,进样体积1.0μL。5.3标准曲线的制作将脱氢乙酸标准工作液(3.4.2)分别注入气相色谱仪中,测定相应峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。(脱氢乙酸标准色谱图见附录A)。5.4测定将测定溶液注入气相色谱仪中,以保留时间定性,同时记录峰面积,根据标准曲线得到测定溶液中的脱氢乙酸浓度。5.5空白试验除不加试样外,空白试验应与样品测定平行进行,并采用相同的分析步骤分析。6分析结果的表述果蔬汁、果蔬浆试样中脱氢乙酸含量按式(1)计算:(c)×V×10001-c0X1=………………………(1)m×1000×1000其他试样中脱氢乙酸含量按式(2)计算:(c)×V1-c01×V×1000X2=………………………(2)m×V2×1000×1000式中:X1———试样中脱氢乙酸的含量,单位为克每千克(g/kg);c1———试样溶液中脱氢乙酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);c0———空白试样溶液中脱氢乙酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);V———乙酸乙酯定容体积,单位为毫升(mL);m———称取试样的质量,单位为克(g);X2———试样中脱氢乙酸的含量,单位为克每千克(g/kg);V1———试样处理后定容体积,单位为毫升(mL);V2———萃取脱氢乙酸所取试样液体积,单位为毫升(mL)。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8其他气相色谱法的线性范围1.00μg/mL~200μg/mL;果蔬汁、果蔬浆取样量5g,确定检出限为0.0003g/kg,定量限为0.001g/kg;其他试样取样量5g,样液定容体积25mL,取10mL样液提取,确定检出限为0.001g/kg,定量限为0.003g/kg。3 GB5009.121—2016第二法液相色谱法9原理用氢氧化钠溶液提取试样中的脱氢乙酸,经脱脂、去蛋白处理,过膜,用配紫外或二极管阵列检测器的高效液相色谱仪测定,以色谱峰的保留时间定性,外标法定量。10试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。10.1试剂10.1.1甲醇(CH4O):色谱纯。10.1.2乙酸铵(C2H6O2N):优级纯。10.1.3氢氧化钠(NaOH)。10.1.4正己烷(C6H14)。10.1.5甲酸(CH2O2)。10.1.6硫酸锌(ZnSO4·7H2O)。10.2试剂配制10.2.1乙酸铵溶液(0.02mol/L):称取1.54g乙酸铵,溶于水并稀释至1L。10.2.2氢氧化钠溶液(20g/L):称取20g氢氧化钠,溶于水并稀释至1L。10.2.3甲酸溶液(10%):量取10mL甲酸,加水90mL,混匀。10.2.4硫酸锌溶液(120g/L):称取120g硫酸锌,溶于水并稀释至1L。10.2.5甲醇溶液(70%):量取70mL甲醇,加水30mL,混匀。10.3标准品脱氢乙酸(DehydroaceticAcid,C8H8O4,CAS:520-45-6)标准品:纯度≥99.5%。10.4标准溶液的制备10.4.1脱氢乙酸标准贮备液(1.0mg/mL):准确称取脱氢乙酸标准品0.1000g(精确至0.0001g)于100mL容量瓶中,用10mL氢氧化钠溶液(10.2.2)溶解,用水定容。4℃保存,有效期为3个月。10.4.2脱氢乙酸标准工作液:分别吸取脱氢乙酸储备液0.1mL、1.0mL、5.0mL、10mL、20mL于100mL容量瓶中,用水定容。配制成浓度为1.00μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL标准工作液。4℃保存,有效期为1个月。11仪器和设备11.1高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。11.2分析天平:感量为0.1mg和1mg。11.3粉碎机。4 GB5009.121—201611.4不锈钢高速均质器。11.5超声波清洗器:功率35kW。11.6涡旋混合器。11.7离心机:转速≥4000r/min。11.8pH计。11.9C18固相萃取柱:500mg,6mL(使用前用5mL甲醇、10mL水活化,使柱子保持湿润状态)。12分析步骤12.1试样制备与提取12.1.1果蔬汁、果蔬浆:称取样品2g~5g(精确至0.001g),置于50mL离心管中,加入约10mL水,用氢氧化钠溶液(10.2.2)调pH至7.5,转移至50mL容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。置于离心管中,4000r/min离心10min。取20mL上清液用10%的甲酸溶液(10.2.3)调pH至5,定容到25mL。取5mL过已活化固相萃取柱,用5mL水淋洗,2mL70%的甲醇溶液(10.2.5)洗脱,收集洗脱液2mL,涡旋混合,过0.45μm有机滤膜,供高效液相色谱测定。12.1.2酱菜、发酵豆制品:样品用不锈钢高速均质器均质。称取样品2g~5g(精确至0.001g),置于25mL离心管中,加入约10mL水、5mL硫酸锌溶液(10.2.4),用氢氧化钠溶液(10.2.2)调pH至7.5,转移至25mL容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。置于25mL离心管中,超声提取10min,4000r/min离心10min,取上清液过0.45μm有机滤膜,供高效液相色谱测定。12.1.3面包、糕点、焙烤食品馅料、复合调味料:样品用粉碎机粉碎或不锈钢高速均质器均质。称取样品2g~5g(精确至0.001g),置于25mL离心管(如需过固相萃取柱则用50mL离心管)中,加入约10mL水、5mL硫酸锌(10.2.4)溶液,用氢氧化钠溶液(10.2.2)调pH至7.5,转移至25mL容量瓶(如需过固相萃取柱则用50mL容量瓶)中,加水稀释至刻度,摇匀。置于离心管中,超声提取10min,转移到分液漏斗中,加入10mL正己烷,振摇1min,静置分层,弃去正己烷层,加入10mL正己烷重复进行一次,取下层水相置于离心管中,4000r/min离心10min。取上清液过0.45μm有机滤膜,供高效液相色谱测定。若高效液相色谱分离效果不理想,取20mL上清液,用10%的甲酸(10.2.3)调pH至5,定容到25mL,取5mL过已活化的固相萃取柱,用5mL水淋洗,2mL70%的甲醇溶液(10.2.5)洗脱,收集洗脱液2mL,涡旋混合,过0.45μm有机滤膜,供高效液相色谱测定。12.1.4黄油:称取样品2g~5g(精确至0.001g),置于25mL离心管(如需过固相萃取柱则用50mL离心管)中,加入约10mL水、5mL硫酸锌(10.2.4)溶液,用氢氧化钠溶液(10.2.2)调pH至7.5,转移至25mL容量瓶(如需过固相萃取柱则用50mL容量瓶)中,加水稀释至刻度,摇匀。置于离心管中,超声提取10min,转移到分液漏斗中,加入10mL正己烷,振摇1min,静置分层,弃去正己烷层,加入10mL正己烷重复进行一次,取下层水相置于离心管中,4000r/min离心10min。取上清液过0.45μm有机滤膜,供高效液相色谱测定。若高效液相色谱分离效果不理想,取20mL上清液,用10%的甲酸(10.2.3)调pH至5,定容到25mL,取5mL过已活化的固相萃取柱,用5mL水淋洗,2mL70%的甲醇溶液(10.2.5)洗脱,收集洗脱液2mL,涡旋混合,过0.45μm有机滤膜,供高效液相色谱测定。12.2仪器参考条件12.2.1色谱柱:C18柱,5μm,250mm×4.6mm(内径)或相当者。12.2.2流动相:甲醇+0.02mol/L乙酸铵(10+90,体积比)。12.2.3流速:1.0mL/min。12.2.4柱温:30℃。5 GB5009.121—201612.2.5进样量:10μL。12.2.6检测波长:293nm。12.3定性分析依据保留时间一致性进行定性识别的方法,根据脱氢乙酸标准样品的保留时间,确定样品中脱氢乙酸的色谱峰(参见附录B)。必要时应采用其他方法进一步定性确证。12.4标准曲线的制作将脱氢乙酸标准工作液(10.4.2)分别注入液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。12.5测定将测定溶液注入液相色谱仪中,测得相应峰面积,根据标准曲线得到测定溶液中的脱氢乙酸浓度。12.6空白试验除不加试样外,空白试验应与样品测定平行进行,并采用相同的分析步骤分析。13分析结果的表述试样中脱氢乙酸含量按式(3)计算:(c)×V×1000×f1-c0X=……………………………(3)m×1000×1000式中:X———试样中脱氢乙酸的含量,单位为克每千克(g/kg);c1———试样溶液中脱氢乙酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);c0———空白试样溶液中脱氢乙酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);V———试样溶液总体积,单位为毫升(mL);f———过固相萃取柱换算系数(f=0.5);m———称取试样的质量,单位为克(g)。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。14精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。15其他高效液相色谱法线性范围为1.00μg/mL~200μg/mL;以样品取样量5g,确定方法的检出限为0.002g/kg,定量限为0.005g/kg。6 GB5009.121—2016附录A脱氢乙酸气相色谱图脱氢乙酸标准样品的气相色谱图见图A.1。图A.1脱氢乙酸标准样品的气相色谱图7 GB5009.121—2016附录B脱氢乙酸液相色谱图脱氢乙酸标准样品的液相色谱图见图B.1。图B.1脱氢乙酸标准样品的液相色谱图8'