GBT27520-2011暗纹东方鲀.pdf 10页

'ICS65．150B52圆亘中华人民共和国国家标准GB／T27520—20112011-11-21发布暗纹东方纯Obscurepuffer2012·03—01实施宰瞀鹳紫瓣警瓣瞥鐾发布中国国家标准化管理委员会仪19 标准分享网www.bzfxw.com免费下载前言GB／T27520—2011本标准按照GB／Ti．1—2009给出的规则起草。本标准由农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会(SAC／TC156／SC1)归口。本标准起草单位：江苏中洋集团股份有限公司、上海海洋大学。本标准主要起草人：钱晓明、李家乐、赵金良、秦桂祥、卢玉平、郭正龙。 标准分享网www.bzfxw.com免费下载1范围暗纹东方纯GB／T27520--2011本标准给出了暗纹东方纯(Takifugufasciatus)的主要形态结构特征、生长与繁殖、生化遗传特性和检测方法。本标准适用于暗纹东方纯的种质检测与鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB／T18654．1养殖鱼类种质检验第1部分：检验规则GB／T18654．2养殖鱼类种质检验第2部分：抽样方法GB／T18654．3养殖鱼类种质检验第3部分：性状测定GB／T18654．12养殖鱼类种质检验第12部分：染色体组型分析3名称与分类3．1学名暗纹东方纯Takifugufasciatus(McClland，1844)。3．2分类地位纯形目(Tetraodontiformes)，纯科(Tetraodontidae)，东方纯属(Takifugu)。4主耍形态结构特征4．1外形特征4．1．1形态体呈亚圆筒形，前端钝圆，向后渐狭小，尾柄略为侧扁。胸鳍宽短，无腹鳍，背鳍后位，与臀鳍相对，同形，尾鳍后缘稍圆形。口小，端位。体棕褐色，体侧下方具淡黄色带，腹面白色。体色和条纹随体长不同而有变异。背部具不明显暗褐色横纹4条～6条，横纹之间具白色狭纹3条～5条。胸鳍后上方体侧处具1圆形黑色大斑，边缘白色。背鳍基部具1长圆形黑色大斑。胸鳍基底外侧和里侧常各具1黑斑。胸鳍、背鳍、臀鳍黄棕色，尾鳍后端灰褐色。头部及体背、腹面均被小刺，背刺区与腹刺区在眼后部相连。吻侧、鳃孔后部体侧及尾柄光滑无刺。暗纹东方纯的外形见图1。 标准分享网www.bzfxw.com免费下载囤1睹纹东方钝外彩42可敬性状421背鲭鲭式DI5～I8。422臀鳍鳍式：Al3～16。423胸鳍鳍式：P】6～18；43可量性状暗纹东方鲢一·I蜒性状比例值见表1。寰1暗纹东方蛀可量性状比例值*F-．#％l奉K★k女K自K44内部特征41齿颌与齿愈合，I一、F各1对板状齿。42脊椎骨脊椎骨数目为：2l块～2,t块，5生长与繁殖51生长捧K与体重关系参见附泶A。52繁殖521性成熟年龄雌鱼性成熟年龄3龄～4龄．雄鱼性成熟q二龄2龄～3龄 标准分享网www.bzfxw.com免费下载522产卵特点暗纹东方纯为一次产卵型鱼类。绝对怀卵最l0×10：粒～50×10。粒。长江中下游地区产卵期在4月上旬至6月下旬，5月为盛期。23卵子特征粘性卵，淡黄色．半透明，圆球形，卵径09⋯1Imm．卵膜厚，有弹睦，具油球-附着在基质上6遗传学特性61细胞遗传掌特性体细胞染色体数为：2n=44。核型公式：10m--6sm--8st+20t。染色体组型见图2■^■n一^■B可●a^■^●4矗●-A●·^^^^^●^一^^一^●^_●^^Ⅶ+囤2暗纹东方纯染色体组型62生化遗传学特性肌『≈组41乳随脱氧临(II)H)_LIII畸电淋【Ⅻ晰吣煳s图3暗纹东方纯肌肉乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳图谱殛扫描围 标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T27520--20117检测方法7．1抽样方法按GB／T18654．2的规定执行。7．2年龄的鉴定采用脊椎骨年龄鉴定法和鳃盖骨年龄鉴定法。7．2．1脊椎骨年龄鉴定法7．2．1．1取材取靠近头部的脊椎骨5块左右。7．2．1．2处理与观察处理与观察步骤如下：a)将去肉脊椎骨置于水中煮沸5rain；b)剔弃脊椎骨附着的脂肪和杂物；c)3％氢氧化钾(KOH)溶液浸泡48h，d)水洗烘干；e)用解剖镜观察锥体中央斜凹面上的轮纹，以此确定鱼的年龄。7．2．2鳃盖膏年龄鉴定法7．2．2．1取材取出新鲜鱼体。7．2．2．2处理与观察处理与观察步骤如下：a)用开水烫1次～2次；b)洗净、去除附着物；c)浸于甘油中10min～15min，然后加热到甘油沸点，骨片即变成乳白色；d)用解剖镜观察白色宽层与暗黑色窄层组成的年轮，以此确定鱼的年龄。7．3主要形态结构特征测定按GB／T18654．3的规定执行。7．4细胞遗传学特性的检测按GB／T18654．12的规定执行。7．5生化遗传学特性的检测7．5．1样品的采集与制备取活体暗纹东方纯背部肌肉1g，用0．7％生理盐水清洗，加入3％的辅酶I(NAD)溶液3mL，置4 GB／T27520--2011匀浆器中匀浆，将匀浆液于4℃、12000r／min离心30min，取上清液，重复以上离心过程至上清液澄清。7．5．2聚丙烯酰胺凝胶制备将混匀的4％聚丙烯酰胺凝胶配方溶液，立即灌注到凝胶模具中，聚合反应结束后，取出凝胶，放在保湿盒内备用。4％聚丙烯酰胺凝胶配方溶液及其制备见附录B中的B．t7．5．3电泳分离电极缓冲液为TC电极缓冲液，配制方法见附录B中的B．2。预电泳；将预先制备的聚丙烯酰胺凝胶放在冷却板上，在50mA电流下，电泳30rain。前电泳：预电泳结束后，用微量加样器在凝胶的点样槽中加入8“L的样品，在25mA电流下，电泳10rain。正式电泳：在电压275V下连续电泳2h。7．5．4染色电泳结束后，取出聚丙烯酰胺凝胶，放人预先配好并在37℃恒温箱中保温的染色液中染色。乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的染色液配制见附录B中的B．3。’8检验规则与结果判定按GB／T18654．1的规定执行。 GB／X27520--20116附录A(资料性附录)养殖暗纹东方纯体长与体重关系体长与体重关系见式(A．1)：W一0．0436L29516(R2—0．9456)式中：w——鱼体体重，单位为克(g)；L——鱼体体长，单位为厘米(cm)o B．1聚丙烯酰胺凝胶附录B(规范性附录)乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳分析溶液制备B．1．1各种凝胶溶液配方各种凝胶溶液配方见表B．1。表B．1各种凝胶溶液配方GB／T27520--2011溶液名称配制方法三羟甲基氨基甲烷(Tris)3．0285g，用柠檬酸(citricacid)调至TC制胶缓冲液pH8．0，蒸馏水定容至1L丙烯酰胺(Arc)98g，N’，N"-亚甲基双丙烯酰胺(Bis)2g，用蒸馏水溶Arc．Bis液解并定容到500mL25％TEM功四甲基乙二胺(TEMED)25mL，加人75mL蒸馏水10％APS过硫酸胺(APS)0．1g，溶解于1mL蒸馏水中B．1．24％聚丙烯酰胺凝胶配方4％聚丙烯酰胺凝胶配方见表B．2。表B．24％聚丙烯酰胺凝胶配方溶液量溶液名称mLTC制胶缓冲液14．7ArcBis液13．225％TEMED0．310％APS0．6蒸馏水37．5B．2电极缓冲液电极缓冲液配方见表B．3。表B．3电极缓冲液配方溶液名称配制方法TC电极缓冲液三羟甲基氨基甲烷(Tris)48．65g，用柠檬酸(citricacid)调pH至8．0，蒸馏水稀释至loL GB／T27520--20”B．3乳酸脱氢酶(LDIt)同工酶染色液B．3．1各种溶液配方各种溶液配方见表B．4。表B．4各种溶液配方溶液名称配制方法三羟甲基氨基甲烷(Tris)181．71g，用盐酸(HCl)调至pH9．5，蒸馏1．5mol／I．Tris-HCl染色缓冲液(pH一9．5)水定容至1L10％氯化硝基四氮唑蓝(NBT)氯化硝基四氮唑蓝(NBT)250mg，加入250mL蒸馏水乳酸(Lacticacid)56．3mL，用氢氧化钠(NaOH)调至pH7．0，蒸馏1mol／L乳酸钠水定容到500mLB．3．2乳酸脱氢酶(LDII)同工酶染色液配方乳酸脱氢酶(LDH)同工酶染色液制备见表B．5。表B．5乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的染色液配方溶液名称溶液量1．5moL／LTrisHCI染色缓冲液(pH一9．5)15mL10％氯化硝基四氨唑蓝(NBT)30mL1mol／L乳酸钠10mL蒸馏水(H。O)95mL辅酶I(NAD)30mg吩嗪甲酯硫酸盐(PMS)10．5mg'