GB5009.257-2016食品安全国家标准食品中反式脂肪酸的测定.pdf 12页

'中华人民共和国国家标准GB5009.257—2016食品安全国家标准食品中反式脂肪酸的测定2016-08-31发布2016-09-20实施中华人民共和国发布国家卫生和计划生育委员会 GB5009.257—2016前言本标准代替GB/T22110—2008《食品中反式脂肪酸的测定气相色谱法》、GB/T22507—2008《动植物油脂植物油中反式脂肪酸异构体含量的测定气相色谱法》、SN/T1945—2007《食品中反式脂肪酸含量的测定方法毛细管气相色谱法》。本标准与所代替标准相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中反式脂肪酸的测定”;———将适用范围扩充至动物油脂及含动物油脂的食品;———将分析物扩充至C16:1t~C22:1t等15种脂肪酸。Ⅰ GB5009.257—2016食品安全国家标准食品中反式脂肪酸的测定1范围本标准规定了食品中反式脂肪酸及异构体的气相色谱测定方法。本标准适用于动植物油脂、氢化植物油、精炼植物油脂及煎炸油和含动植物油脂、氢化植物油、精炼植物油脂及煎炸油食品中反式脂肪酸的测定。本标准不适用于油脂中游离脂肪酸(FFA)含量大于2%食品样品的测定。2原理动植物油脂试样或经酸水解法提取的食品试样中的脂肪,在碱性条件下与甲醇进行酯交换反应生成脂肪酸甲酯,并在强极性固定相毛细管色谱柱上分离,用配有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行测定,面积归一化法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1盐酸(HCl,ρ20=1.19):含量36%~38%。3.1.2乙醚(C4H10O)。3.1.3石油醚:沸程30℃~60℃。3.1.4无水乙醇(C2H6O):色谱纯。3.1.5无水硫酸钠:使用前于650℃灼烧4h,贮于干燥器中备用。3.1.6异辛烷(C8H18):色谱纯。3.1.7甲醇(CH3OH):色谱纯。3.1.8氢氧化钾(KOH):含量85%。3.1.9硫酸氢钠(NaHSO4)。3.2试剂配制氢氧化钾-甲醇溶液(2mol/L):称取13.2g氢氧化钾,溶于80mL甲醇中,冷却至室温,用甲醇定容至100mL。石油醚-乙醚溶液(1+1):量取500mL石油醚与500mL乙醚混合均匀后备用。3.3标准品脂肪酸甲酯标准品:种类参见表A.1,纯度均>99%。1 GB5009.257—20163.4标准溶液配制3.4.1脂肪酸甲酯标准储备液:分别准确称取反式脂肪酸甲酯标准品各100mg(精确至0.1mg)于25mL烧杯中,分别用异辛烷溶解并转移入10mL容量瓶中,准确定容至10mL,此标准储备液的浓度为10mg/mL。在(-18±4)℃下保存。3.4.2脂肪酸甲酯混合标准中间液(0.4mg/mL):准确吸取标准储备液各1mL于25mL容量瓶中,用异辛烷定容,此混合标准中间液的浓度为0.4mg/mL,在(-18±4)℃下保存。3.4.3脂肪酸甲酯混合标准工作液:准确吸取标准中间液5mL于25mL容量瓶中,用异辛烷定容,此标准工作溶液的浓度为80μg/mL。4仪器和设备4.1气相色谱仪:配氢火焰离子化检测器。4.2恒温水浴锅。4.3涡旋振荡器。4.4离心机:转速在0r/min~4000r/min之间。4.5具塞试管:10mL、50mL。4.6分液漏斗:125mL。4.7圆底烧瓶:200mL,使用前于100℃烘箱中恒重。4.8旋转蒸发仪。4.9天平:感量为0.1g、0.1mg。5分析步骤5.1试样制备5.1.1固态样品取有代表性的供试样品500g,于粉碎机中粉碎混匀,均分成两份,分别装入洁净容器中,密封并标识,于0℃~4℃下保存。5.1.2半固态脂类样品取有代表性的样品500g,置于烧杯中,于60℃~70℃水浴中融化,充分混匀,冷却后均分成两份,分别装入洁净容器中,密封并标识,于0℃~4℃下保存。5.1.3液态样品取有代表性的样品500g,充分混匀后均分成两份,分别装入洁净容器中,密封并标识,于0℃~4℃下保存。5.2分析步骤5.2.1动植物油脂称取60mg油脂,置于10mL具塞试管中,加入4mL异辛烷充分溶解,加入0.2mL氢氧化钾-甲醇溶液,涡旋混匀1min,放至试管内混合液澄清。加入1g硫酸氢钠中和过量的氢氧化钾,涡旋混匀30s,于4000r/min下离心5min,上清液经0.45μm滤膜过滤,滤液作为试样待测液。2 GB5009.257—20165.2.2含油脂食品(除动植物油脂外)5.2.2.1食品中脂肪的测定固体和半固态脂类试样:称取均匀的试样2.0g(精确至0.01g,对于不同的食品称样量可适当调整,保证食品中脂肪量不小于0.125g)置于50mL试管中,加入8mL水充分混合,再加入10mL盐酸混匀;液态试样:称取均匀的试样10.00g置于50mL试管中,加入10mL盐酸混匀。将上述试管放入60℃~70℃水浴中,每隔5min~10min振荡一次,约40min~50min至试样完全水解。取出试管,加入10mL乙醇充分混合,冷却至室温。将混合物移入125mL分液漏斗中,以25mL乙醚分两次润洗试管,洗液一并倒入分液漏斗中。待乙醚全部倒入后,加塞振摇1min,小心开塞,放出气体,并用适量的石油醚-乙醚溶液(1+1)冲洗瓶塞及瓶口附着的脂肪,静置10min~20min至上层醚液清澈。将下层水相放入100mL烧杯中,上层有机相放入另一干净的分液漏斗中,用少量石油醚-乙醚溶液(1+1)洗萃取用分液漏斗,收集有机相,合并于分液漏斗中。将烧杯中的水相倒回分液漏斗,再用25mL乙醚分两次润洗烧杯,洗液一并倒入分液漏斗中,按前述萃取步骤重复提取两次,合并有机相于分液漏斗中,将全部有机相过适量的无水硫酸钠柱,用少量石油醚-乙醚溶液(1+1)淋洗柱子,收集全部流出液于100mL具塞量筒中,用乙醚定容并混匀。精准移取50mL有机相至已恒重的圆底烧瓶内,50℃水浴下旋转蒸去溶剂后,置100℃±5℃下恒重,计算食品中脂肪含量;另50mL有机相于50℃水浴下旋转蒸去溶剂后,用于反式脂肪酸甲酯的测定。5.2.2.2脂肪酸甲酯的制备准确称取60mg经5.2.2.1步骤提取的脂肪(未经100℃±5℃干燥箱加热),置于10mL具塞试管中,按5.2.1规定的步骤操作,得到试样待测液。5.3仪器参考条件5.3.1毛细管气相色谱柱:SP-2560聚二氰丙基硅氧烷;柱长100m×0.25mm,膜厚0.2μm,或性能相当者。5.3.2检测器:氢火焰离子化检测器。5.3.3载气:高纯氦气99.999%。5.3.4载气流速:1.3mL/min。5.3.5进样口温度:250℃。5.3.6检测器温度:250℃。5.3.7程序升温:初始温度140℃,保持5min,以1.8℃/min的速率升至220℃,保持20min。5.3.8进样量:1μL。5.3.9分流比:30∶1。5.4定量测定将标准工作溶液和试样待测液分别注入气相色谱仪中,根据标准溶液色谱峰响应面积,采用归一化法定量测定。5.5定性确证在5.3测定条件下,样液中反式脂肪酸的保留时间应在标准溶液保留时间的±0.5%范围内,标准品的气相色谱图参见图B.1,各反式脂肪酸的参考保留时间如表1所示。3 GB5009.257—2016表1反式脂肪酸的参考保留时间反式脂肪酸甲酯参考保留时间/minC16:19t28.402C18:16t34.165C18:19t34.384C18:111t34.567C18:29t,12t36.535C18:210t,12c42.091C18:39t,12t,15t38.773C18:39t,12t,15c+C18:39t,15t,15c39.459C18:39c,12t,15t+C18:39c,12c,15t39.883C18:39c,12t,15c40.400C18:39t,12c,15c40.518C20:111t40.400C22:113t46.5715.6空白试验空白试验指除不加试验样品外,其他采用与样品分析完全相同的试验步骤、试剂和用量进行操作。6分析结果的表述反式脂肪酸含量是以反式脂肪(%,质量分数)报告,反式脂肪含量是以反式脂肪酸甲酯百分比含量的形式进行计算。6.1食品中脂肪的质量分数的计算食品中脂肪的质量分数按式(1)计算:m1-m0wz=×100%…………………………(1)m2式中:wz———试样中脂肪的质量分数,%;m1———圆底烧瓶和脂肪的质量,单位为克(g);m0———圆底烧瓶的质量,单位为克(g);m2———试样的质量,单位为克(g)。6.2相对质量分数的计算各组分的相对质量分数按式(2)计算:Ax×fxwX=×100%…………………………(2)At4 GB5009.257—2016式中:wX———归一化法计算的反式脂肪酸组分X脂肪酸甲酯相对质量分数,%;Ax———组分X脂肪酸甲酯峰面积;fx———组分X脂肪酸甲酯的校准因子,化合物的校正因子见表D.1;At———所有峰校准面积的总和,除去溶剂峰。6.3计算脂肪中反式脂肪酸的含量脂肪中反式脂肪酸的质量分数按式(3)计算:wt=∑wX…………………………(3)式中:wt———脂肪中反式脂肪酸的质量分数,%;wX———归一化法计算的组分X脂肪酸甲酯相对质量分数,%。6.4计算食品中反式脂肪酸的含量食品中反式脂肪酸的质量分数按式(4)计算:w=wt×wz…………………………(4)式中:w———食品中反式脂肪酸的质量分数,%;wt———脂肪中反式脂肪酸的质量分数,%;wz———食品中脂肪的质量分数,%。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,大于1.0%的结果保留三位有效数字,小于等于1.0%的结果保留两位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。8其他本方法的检出限为0.012%(以脂肪计),定量限为0.024%(以脂肪计)。5 GB5009.257—2016附录A标准品信息表A.1给出了脂肪酸甲酯化学信息表。表A.1脂肪酸甲酯化学信息表归类化合物分子简式CAS归类化合物分子简式CAS丁酸甲酯C4:0623-42-7顺-11,14,17-二十碳三顺C20:355682-88-7己酸甲酯C6:0106-70-7烯酸甲酯式辛酸甲酯C8:0111-12-6脂顺-8,11,14-二十碳三C20:31783-84-2癸酸甲酯C10:0110-42-9肪烯酸甲酯十一烷酸甲酯C11:06742-54-7酸花生四烯酸甲酯C20:42566-89-4甲月桂酸甲酯C12:0111-82-0二十碳五烯酸甲酯C20:52734-47-6饱酯十三烷酸甲酯C13:01731-88-0二十二碳六烯酸甲酯C22:6301-01-9和脂豆蔻酸甲酯C14:0124-10-7反-9-十六碳烯酸甲酯C16:19t10030-74-7肪十五烷酸甲酯C15:07132-64-1反-6-十八碳烯酸甲酯C18:16t2777-58-4酸棕榈酸甲酯C16:0112-39-0反-9-十八碳烯酸甲酯C18:19t2462-84-2甲十七烷酸甲酯C17:01731-92-6反-11-十八碳烯酸甲酯C18:111t6198-58-9酯硬脂酸甲酯C18:0112-61-8反-11-二十碳烯酸甲酯C20:111t69119-90-0花生酸甲酯C20:01120-28-1反-13-二十二碳烯酸C22:113t7439-44-3二十一烷酸甲酯C21:06064-90-0甲酯山嵛酸甲酯C22:0929-77-1反亚油酸甲酯C18:29t,12t2566-97-4二十三烷酸甲酯C23:02433-97-8反-10-顺-12-十八碳C18:210t,12c21870-97-3二十四烷酸甲酯C24:02442-49-1二烯酸甲酯反顺-9-十四碳烯酸甲酯C14:19c56219-06-8反-9,12,15-十八碳式C18:39t,12t,15t14202-25-6十五烯酸甲酯C15:110c90176-52-6脂三烯酸甲酯棕榈油酸甲酯C16:19c1120-25-8肪反-9,12-顺-15-十八C18:39t,12t,15c52717-35-8十七碳烯酸甲酯C17:110c31424-16-5酸碳三烯酸甲酯甲十八碳烯酸甲酯C18:16c2777-58-4反-9-顺-12-反15-十八顺酯C18:39t,12c,15c14201-98-0油酸甲酯C18:19c112-62-9碳三烯酸甲酯式脂异油酸甲酯C18:111c1937-63-9顺-9-反-12,15-十八碳C18:39c,12t,15t52717-33-6肪花生烯酸甲酯C20:12390-09-2三烯酸甲酯酸二十二烯酸甲酯C22:11120-34-9顺-9,12-反-15-十八碳甲C18:39c,12c,15t37929-05-8二十四碳烯酸甲酯C24:12733-88-2三烯酸甲酯酯亚油酸甲酯C18:2112-63-0顺-9-反-12-顺-15-十八C18:39c,12t,15c14202-26-7二十碳二烯酸甲酯C20:22463-2-7碳三烯酸甲酯二十二碳二烯酸甲酯C22:261012-47-3反-9-顺-12,15-十八亚麻酸甲酯C18:3301-00-8C18:39t,12c,15c52717-34-7碳三烯酸甲酯γ-亚麻酸甲酯C18:316326-32-26 GB5009.257—2016附录B标准品色谱图B.1反式脂肪酸甲酯混合标准溶液气相色谱图反式脂肪酸甲酯混合标准溶液气相色谱图见图B.1。图B.1反式脂肪酸甲酯混合标准溶液气相色谱图(C16:19t~C22:113t)(SP-2560色谱柱,100m×0.25mm×0.2μm)B.237种脂肪酸甲酯混合标准溶液气相色谱图37种脂肪酸甲酯混合标准溶液气相色谱图见图B.2。图B.237种脂肪酸甲酯混合标准溶液气相色谱图(C4:0~C22:6)(SP-2560色谱柱,100m×0.25mm×0.2μm)7 GB5009.257—2016附录CFID响应因子和FID校准因子的计算C.1FID响应因子的计算各组分的FID响应因子按式(C.1)计算(FID响应因子见表D.1):MXFX=…………………………(C.1)(n)AX-1C式中:FX———组分X脂肪酸甲酯的FID响应因子;MX———组分X脂肪酸甲酯的相对摩尔质量;nX———组分X脂肪酸甲酯所含碳原子数;AC———碳原子的相对原子质量(AC=12.01)。C.2FID校准因子的计算各组分的FID校准因子按式(C.2)计算(FID校准因子见表D.1):FXfX=…………………………(C.2)FC16:0式中:fX———组分X脂肪酸甲酯的校准因子;FX———组分X脂肪酸甲酯的FID响应因子;FC16:0———C16:0的FID响应因子(FC16:0=1.407)。注:C16:0的FID响应因子(FC16:0=1.407)是参比值。8 GB5009.257—2016附录DFID响应因子和FID校准因子表D.1给出了FID响应因子和FID校准因子。表D.1FID响应因子和FID校准因子脂肪酸碳原子数MXnX-1FXfXC4:0102.1342.1261.51C6:0130.1961.8071.28C8:0158.2481.6471.17C9:0172.2791.5941.13C10:0186.30101.5511.10C11:0200.32111.5161.08C12:0214.35121.4871.06C13:0228.37131.4631.04C14:0242.40141.4421.02C15:0256.42151.4231.01C16:0270.46161.4071.00(参比)C17:0284.49171.3930.99C18:0298.52181.3810.98C20:0326.57201.3600.97C21:0340.57211.3500.96C22:0354.62221.3420.95C23:0368.62231.3340.95C24:0382.68241.3280.94C14:1240.40141.4301.02C16:1268.43161.3970.99C18:1296.48181.3710.97C20:1324.53201.3510.96C22:1352.58221.3340.95C24:1380.68241.3210.94C18:2294.46181.3020.97C20:2322.57201.3430.959 GB5009.257—2016表D.1(续)脂肪酸碳原子数MXnX-1FXfXC22:2350.62221.3270.94C18:3292.15181.3330.96C20:3320.57201.3350.95C20:4318.57201.3260.94C20:5316.57201.3180.94C22:6346.62221.3120.93注:MX为组分X脂肪酸甲酯的相对摩尔质量;nX为组分X脂肪酸甲酯所含碳原子数;FX为组分X脂肪酸甲酯的FID响应因子;fX为组分X脂肪酸甲酯的校准因子。10'