GB5009.247-2016食品安全国家标准食品中纽甜的测定.pdf 6页

'中华人民共和国国家标准GB5009.247—2016食品安全国家标准食品中纽甜的测定2016-08-31发布2016-09-20实施中华人民共和国发布国家卫生和计划生育委员会 GB5009.247—2016前言本标准代替GB/T23378—2009《食品中纽甜的测定方法高效液相色谱法》。本标准与GB/T23378—2009相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中纽甜的测定”。———适用范围更改为饮料、蜜饯、糕点、炒货、酱腌菜、糖果、果酱、果冻、复合调味料中纽甜的测定。Ⅰ GB5009.247—2016食品安全国家标准食品中纽甜的测定1范围本标准规定了食品中纽甜含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于饮料、蜜饯、糕点、炒货、酱腌菜、糖果、果酱、果冻、复合调味料食品中纽甜的测定。2原理试样经混合提取液提取,固相萃取柱净化后,采用高效液相色谱仪测定,保留时间定性,峰面积外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1乙腈(CH3CN):色谱纯。3.1.2辛烷磺酸钠(C8H17NaO3S):色谱纯。3.1.3磷酸(H3PO4)。3.1.4甲酸(CH3COOH):色谱纯。3.1.5甲醇(CH3OH):色谱纯。3.1.6三乙胺(C6H15N):色谱纯。3.2试剂配制3.2.1混合提取液:分别吸取0.8mL甲酸和2.5mL三乙胺,加水定容至1000mL,pH约4.5。3.2.2离子对试剂缓冲液:称取2.00g辛烷磺酸钠,用500mL水溶解,加入1.0mL磷酸,加水定容至1000mL。3.3标准品纽甜(C20H30N2O5,CAS号:165450-17-9),纯度≥99.0%。3.4标准溶液配制3.4.1标准储备液:准确称取0.1000g纽甜标准品,加混合提取液溶解定容至100mL,此溶液纽甜含量为1.00mg/mL。3.4.2标准工作液:分别吸取适量纽甜标准储备液,用混合提取液配制成浓度分别为0.2μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的系列标准工作液。3.5C18固相萃取柱:6mL、500mg,或相当者,使用前依次用5mL甲醇、10mL水活化。3.60.45μm滤膜,有机系。1 GB5009.247—20164仪器和设备4.1液相色谱仪,配有紫外检测器或二极管阵列检测器。4.2超声波清洗仪。4.3分析天平:感量0.0001g和0.01g。4.4组织捣碎机。4.5旋涡振荡器。4.6氮吹仪。4.7固相萃取装置。4.8离心机:转速≥4000r/min。5分析步骤5.1试样制备5.1.1固态样品称取10g(精确到0.01g)粉碎均匀试样于50mL具塞塑料离心管中,加入30mL混合提取液,旋涡振荡10min,超声30min后,用混合提取液定容至刻度,若溶液混浊,以不低于4000r/min离心10min后,过滤待用。5.1.2液态样品准确量取10.0mL试样于50mL具塞塑料离心管中,加入30mL混合提取液,振荡混匀。超声15min后,用混合提取液定容至刻度,若溶液混浊,以不低于4000r/min离心10min后,过滤待用。注:含气样品如碳酸饮料、汽水等先微温,搅拌去除试样中的二氧化碳或超声脱气后,再准确量取试样。5.2试样净化吸取10.0mL的过滤液以1mL/min~2mL/min的流速通过固相萃取柱,待滤液完全流出后,用5mL的混合提取液以1mL/min~2mL/min的流速淋洗萃取柱,弃去全部流出液,用5mL甲醇以1mL/min的流速洗脱,洗脱液在40℃水浴中用氮吹仪浓缩,用混合提取液定容至2.0mL,经0.45μm滤膜过滤后作为待测液供液相色谱仪分析。5.3仪器参考条件5.3.1色谱柱:C18色谱柱,5μm,250mm×4.6mm(内径)或相当者。5.3.2柱温:30℃。5.3.3流动相:A相:乙腈;B相:离子对试剂缓冲液。梯度洗脱程序见表1。5.3.4流速:1.0mL/min。5.3.5检测波长:218nm。5.3.6进样量:50μL。2 GB5009.247—2016表1流动相梯度洗脱程序时间/min流动相A/%流动相B/%0.0025.075.010.0065.035.020.00100.00.024.00100.00.024.1025.075.030.0025.075.05.4标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线(纽甜标准色谱图见图A.1)。5.5试样溶液的测定将试样溶液注入液相色谱仪中,以保留时间定性,同时记录峰面积,根据标准曲线得到待测液中纽甜的浓度,试样溶液中纽甜含量的响应值均应在仪器的检测线性范围内。6分析结果的表述试样中纽甜的含量按式(1)计算:c×V×V1×1000X=…………………………(1)m×V2×1000式中:X———试样中纽甜含量,单位为毫克每千克(mg/kg)或毫克每升(mg/L);c———试样溶液中纽甜的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);V———样品洗脱液浓缩定容体积,单位为毫升(mL);V1———试样提取液定容体积,单位为毫升(mL);m———样品质量,单位为克(g);V2———吸取过滤液体积,单位为毫升(mL)。计算结果保留两位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8其他本标准方法的定量限为0.2mg/kg。3 GB5009.247—2016附录A色谱图纽甜标样色谱图见图A.1。图A.1纽甜标样液相色谱图4'