GB5009.250-2016食品安全国家标准食品中乙基麦芽酚的测定.pdf 8页

'中华人民共和国国家标准GB5009.250—2016食品安全国家标准食品中乙基麦芽酚的测定2016-08-31发布2016-09-20实施中华人民共和国发布国家卫生和计划生育委员会 GB5009.250—2016前言本标准代替GB/T21917—2008《饮料中乙基麦芽酚的测定方法》。本标准与GB/T21917—2008相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中乙基麦芽酚的测定”;———增加了标准的适用范围;———增加了不同类型食品试样的前处理方法;———修改了液相色谱条件;———增加了附录B质谱确证。Ⅰ GB5009.250—2016食品安全国家标准食品中乙基麦芽酚的测定1范围本标准规定了食品中乙基麦芽酚含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于饮料、糖果、果冻、肉制品、饼干、面包、糕点、乳粉食品中乙基麦芽酚含量的测定。2原理试样经提取、净化后,采用配有二极管阵列检测器或紫外检测器的高效液相色谱仪检测,外标法定量;阳性样品需要采用质谱法进行定性确认。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1甲醇(CH3OH):色谱纯。3.1.2乙腈(CH3CN):色谱纯。3.1.3磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)。3.2磷酸二氢钠溶液配制称取3.90g磷酸二氢钠,加水溶解并稀释至近1000mL,经磷酸调节pH至4.0±0.1,定容至1000mL,经微孔滤膜过滤备用。3.3乙基麦芽酚(C7H8O3)标准品纯度不小于99%。3.4标准溶液配制3.4.1标准储备液:称取乙基麦芽酚0.1g(精确至0.0001g),用甲醇溶解,并定容至100mL容量瓶中,此溶液浓度为1mg/mL。3.4.2标准系列工作液:分别准确吸取不同体积的标准储备液,用甲醇将其稀释成乙基麦芽酚含量分别为0.0μg/mL、0.5μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、25.0μg/mL、100.0μg/mL的标准系列工作液。4仪器和设备4.1高效液相色谱仪(HPLC):配有二极管阵列检测器(DAD)或紫外检测器(UVD)。4.2超声波清洗器。1 GB5009.250—20164.3涡旋混合仪。4.4水浴锅。4.5离心机:转速不低于6000r/min。4.6分析天平:感量分别为0.01g、0.001g和0.0001g。5分析步骤5.1试样制备5.1.1碳酸饮料、果汁饮料、乳饮料、植物蛋白饮料试样准确称取10g试样(精确至0.01g)(碳酸饮料需先超声2min~3min以除去二氧化碳后取样)于25mL具塞刻度试管中,用乙腈定容至刻度,混匀,超声10min(若样品溶液浑浊时,6000r/min离心10min),取上清液,经微孔滤膜过滤,滤液进液相色谱仪分析。5.1.2糖果、果冻试样准确称取2g试样(精确至0.001g)于25mL具塞刻度试管中,加入20mL水,置于60℃~70℃水浴锅中加热2min~3min,加塞,剧烈振摇使其分散均匀,再置于60℃~70℃水浴锅中加热30min,取出后趁热超声5min,冷却后用甲醇定容至刻度(奶糖用乙腈定容),6000r/min离心10min,取上清液,经微孔滤膜过滤,滤液进液相色谱仪分析。5.1.3肉制品、饼干、面包、糕点试样准确称取2g粉碎均匀试样(精确至0.001g)至25mL具塞刻度试管中,加入5mL水,加塞,涡旋1min,使其分散均匀后,再加15mL甲醇,加塞,摇匀,超声20min,用甲醇定容至刻度,6000r/min离心10min,取上清液,微孔滤膜过滤,滤液进液相色谱仪分析。5.1.4乳粉试样准确称取2g试样(精确至0.001g)至25mL具塞刻度试管中,加入8mL水,加塞,涡旋1min,使其充分溶解后,加15mL乙腈,加塞,摇匀,超声20min,用乙腈定容至刻度,6000r/min离心10min,取上清液,经微孔滤膜过滤,滤液进液相色谱仪分析。5.2仪器参考条件5.2.1色谱柱:C18柱,250mm×4.6mm,5μm,或性能相当者。5.2.2流动相:A为甲醇;B为磷酸二氢钠溶液,梯度洗脱条件见表1。表1方法的梯度洗脱条件时间ABmin%%0257516257516.110002010002 GB5009.250—20165.2.3流速:1.0mL/min。5.2.4柱温:30℃。5.2.5检测波长:276nm。5.2.6进样量:10μL。5.3标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中,测定相应的乙基麦芽酚的色谱峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以色谱峰的峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。5.4试样溶液的测定将试样溶液注入高效液相色谱仪中,得到相应的乙基麦芽酚的色谱峰面积,根据标准曲线得到待测液中乙基麦芽酚的浓度,平行测定次数不少于两次。乙基麦芽酚的标准液相色谱图参见图A.1。5.5定性确认进行试样测定时,如果检出乙基麦芽酚的色谱峰的保留时间与标准品相一致,同时该物质的紫外吸收图谱与标准品的紫外吸收图谱相一致,则可初步确认试样中存在被测的乙基麦芽酚。阳性试样需用质谱仪进行确认试验(见附录B)。6分析结果的表述试样中乙基麦芽酚含量按式(1)计算:c×V×1000X=…………………………(1)m×1000式中:X———试样中乙基麦芽酚的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);c———由标准曲线得出的样液中乙基麦芽酚的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);V———试样定容体积,单位为毫升(mL);m———试样质量,单位为克(g);1000———换算系数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8其他当取样量为2g时,糖果、果冻、肉制品、饼干、面包、糕点、乳粉等类食品的方法检出限为1.5mg/kg,定量限为5mg/kg;当取样量为10g时,饮料的方法检出限为0.6mg/kg,定量限为2mg/kg。3 GB5009.250—2016附录A乙基麦芽酚的高效液相色谱图乙基麦芽酚的高效液相色谱图见图A.1。图A.1乙基麦芽酚的高效液相色谱图4 GB5009.250—2016附录B确证试验B.1色谱条件色谱条件如下:a)色谱柱:ODSC18色谱柱,50mm×2.1mm,1.8μm,或性能相当者。b)流动相:A为甲醇;B为10mol/L乙酸铵水溶液(含0.2%甲酸),梯度洗脱条件见表B.1。表B.1方法的梯度洗脱条件时间ABmin%%0257521000101000c)流速:0.3mL/min。d)进样量:5μL。e)柱温:25℃。B.2质谱条件质谱条件如下:a)电离方式:大气压化学电离,正离子模式。b)监测方式:多反应监测(MRM)。c)雾化气压力:275.8kPa。d)干燥气温度:325℃。e)干燥气流速:8L/min。f)汽化温度:350℃。g)定性离子对、定量离子、碎裂电压和碰撞能量见表B.2。表B.2乙基麦芽酚的定性离子对、定量离子、碎裂电压和碰撞能量母离子子离子碎裂电压碰撞能量中文名称m/zm/zVeV乙基麦芽酚141.1126.1a;71.112015/30a定量离子。5 GB5009.250—2016B.3定性判定按照B.1和B.2的条件测定试样和标准工作溶液,如果试样中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致(变化范围在±2.5%之内);试样中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度与标准溶液的相对丰度和浓度一致,相对丰度偏差不超过表B.3规定的范围,则可判定为试样中存在乙基麦芽酚。表B.3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度(X)X>5020