GBT14926.47-2008实验动物志贺菌检测方法.pdf 5页

'ICS65．020．30B44a雪中华人民共和国国家标准GB／T14926．47—2008代替6B／T14926．472001实验动物志贺茵检测方法Laboratoryanimal--MethodforexaminationofShigellaspp．2008-12-03发布2009—03—01实施宰瞀鹊鬻瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会仪19 刖昌GB／T14926．47—2008GB／T14926((实验动物》共54个部分，为不同微生物和病毒检测技术方法。本部分自实施之Et起代替GB／T14926．47—2001《实验动物志贺菌检测方法》。本部分与GB／T14926．472001相比主要技术差异如下：a)对GB／T14926．47—2001《实验动物志贺菌检测方法》部分内容进行了修订和增加；b)在原标准“5培养基及试剂”中增加了“5．2GN增菌液”，将原标准中“5．3S．S琼脂”修改为c)d)e)“5．4XLD琼脂”；在原标准“6检测程序”中增加了“GN增菌液(36士1)℃培养6h～8h”这一程序；在原标准“6检测程序”中将“S．S琼脂”修改为“XLD琼脂”；原标准“7．2分离培养将已接种的麦康凯琼脂和s．s琼脂平皿置(36±1)℃培养18～24h。”修改为“7．2增菌分离培养将已接种的GN增菌液置(36±1)℃培养6h～8h，转种麦康凯琼脂和XLD琼脂平皿，置(36士1)℃培养18h～24h”；原标准“7．3．1菌落特征志贺菌在麦康凯和S．S琼脂平皿上形成无色透明、圆形、扁平或微凸起，光滑湿润，边缘整齐，直径约2mm的菌落。宋内氏志贺菌菌落一般较大，半透明，有时可出现扁平，边缘不整齐的粗糙型菌落。”修改为“7．3．1菌落特征志贺菌在麦康凯琼脂平皿上形成无色、凸起、直径2mm～3mm的菌落。在XLD琼脂平皿形成红色、光滑、直径1mm～2mm的菌落。痢疾志贺氏菌1型在一k述两种培养基上形成的菌落较其他志贺菌属菌落要小”；g)原标准“7．3．5表1志贺菌生化反应”中“七叶苷脱羧酶”修改成“七叶苷”。本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口。本部分由全国实验动物标准化技术委员会负责起草。本部分主要起草人：黄韧。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：——GB／T14926．47200l。 1范围实验动物志贺菌检测方法GB／T14926．47—2008GB／T14926的本部分规定了实验动物志贺菌的检测方法。本部分适用于猴志贺菌的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过GB／T14926的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB／T14926．42实验动物细菌学检测标本采集GB／T14926．43实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂3原理志贺菌是革兰氏阴性短杆菌，在三糖铁或双糖铁等培养基上具有特定的生长和生化特征。因此，可通过选择性培养基培养、生化和血清试验鉴定志贺菌。4主要设备和材料普通恒温培养箱。5培养基及试剂5．1Cary-Blair运送培养基：成分及配制方法见GB／T14926．43。5．2GN增菌液：成分及配制方法见GB／T14926．43。5．3麦康凯琼脂：成分及配制方法见GB／T14926．43。5．4XLD琼脂：成分及配制方法见GB／T14926．43。5．5克氏双糖铁琼脂：成分及配制方法见GB／T14926．43。5．6三糖铁琼脂：成分及配制方法见GB／T14926．43。5．7西蒙氏柠檬酸盐培养基：成分及配制方法见GB／T14926．43。5．8氨基酸脱羧酶试验培养基：成分及配制方法见GB／T14926．43。5．9尿素琼脂：成分及配制方法见GB／T14926．43。5．10半固体琼脂：成分及配制方法见GB／T14926．43。5．11糖发酵培养基：成分及配制方法见GB／T14926．43。5．12氰化钾生长培养基：成分及配制方法见GB／T14926．43。5．13葡萄糖铵培养基：成分及配制方法见GB／T14926．43。5．14志贺菌多价诊断血清。 GB／T14926．47—20086检测程序图1检测程序7操作步骤7．1采样采取粪便或肛拭子标本，采样方法见GB／T14926．42。7．2增菌分离培养将已接种的GN增菌液置(36土1)℃培养6h--8h，转种麦康凯琼脂和XLD琼脂平皿，置(36±1)℃培养18h～24h。7．3鉴定7．3．1菌落特征志贺菌在麦康凯琼脂平皿上形成无色、凸起、直径2mm～3mm的菌落。在XLD琼脂平皿形成红色、光滑、直径1ram--2mm的菌落。痢疾志贺氏菌1型在上述两种培养基上形成的菌落较其他志贺菌属菌落要小。7．3．2菌体特征革兰氏阴性小杆菌，无鞭毛，无芽孢。7．3．3培养特性本菌接种克氏双糖铁或三糖铁琼脂，(36士1)℃培养18h～24h后，斜面不产酸，底层产酸不产气，硫化氢阴性。2 7．3．4动力半固体试验阴性。7．3．5本菌生化特征见表1。表1志贺菌生化反应GB／T14926．47—2008生化检测项目判定结果生化检测项目判定结果葡萄糖铵赖氨酸脱羧酶七叶苷尿素鸟氨酸脱羧酶‘西蒙氏柠檬酸盐KCN生长水杨苷注：“+”表示阳性，“一”表示阴性。8C群13型和D群为阳性。7．3．6血清玻片凝集试验阳性。8结果报告凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告，不符合者作出阴性报告。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺菌属的培养物。'