GBT14927.1-2008实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测法.pdf 25页

'ICS65．020．30B44缮园中华人民共和国国家标准GB／T14927．1—2008代替GB／T14927．1—2001实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测法LaboratoryAnimals--Methodsforbiochemicalmarkersofinbredmiceandrats2008—12-10发布2009-03-01实施宰瞀鹛零瓣訾雠瞥霎发布中国国家标准化管理委员会仅19 前言GB／T14927．1—2008GB／T14927共分2个部分：～第1部分为《实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测法》；一一第2部分为《实验动物近交系小鼠、大鼠免疫标记检测法》。本部分为GB／T14927的第1部分。本部分自实施之I：1起代替GB／T14927．12001《实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法》。本部分与GB／T14927．12001相比主要技术差异如下：a)在近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法中的电泳结果模式图基础上，增加电泳图谱；b)调整了近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法中的部分生化位点，小鼠增加了肽酶3(pep3)位点，大鼠增补血清碱性磷酸酶(Alp)和血红蛋白(Hbb)两个生化位点；c)对部分溶液配方进行调整。本部分的附录A、附录B、附录C和附录D为资料性附录。本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口。本部分起草单位：全国实验动物标准化技术委员会。本部分主要起草人：邢瑞昌、刘双环、岳秉飞、鲍世民、张连峰。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：～—GB／T14927．11994，GB／T14927．12001。 实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测法GB／T14927．1—20081范围GB／T14927的本部分规定了对近交系小鼠、大鼠生化标记进行检测的醋酸纤维膜(板、硬膜)的电泳方法及判断标准。本部分适用于近交系小鼠和大鼠任何品系。2术语和定义下列术语和定义适用于6B／Tl4927的本部分。2．1生化标记biochemicalmarker表明遗传特征并采用生化方法识别的记号。在小、大鼠中多为一些同工酶和异构蛋白。2．2生化遗传概貌biochemicalgeneticprofile各种近交系多个生化遗传标记表型资料的汇总，从一定程度上反应了各种品系的遗传特征。2．3纯合性homozygosity同源染色体的相对位置上具有相同基因的状态。近交系动物通过连续的近亲交配绝大部分的位点都具有纯合性。一个品系内任何个体问进行交配产生的后代也具有纯合性。2．4同基因性isogenicity一个近交品系中所有个体在遗传上是同源的。因此在同一品系内任何个体问进行皮肤和肿瘤移植不被当作异己而受到排斥。如列近交系动物的基因进行检测，一个品系内不同个体的基因型完全一致。2．5个体性individuality就整个近交系动物而言，每个品系在遗传卜都是独特的，表现在相“{广泛的特性上，如生化遗传概貌等。大多数近交品系可通过各自的生化遗传概貌相互区别。3方法原理在小鼠和大鼠体内存在着一峰同工酶和同种异构蛋白。町依据它们在特定电场内携带的电荷不同采用电泳的方法将它们区分，并根据电泳带型即蛋白质的表现型推断其基幽型，建立各种近交系的遗传概貌，定期对它们进行质量监测。4设备和材料4．1常压电泳仪(0～600V)。4．2醋酸纤维素膜(板、硬膜)电泳槽。4．3电泳点样装置。4．4醋酸纤维素膜(7C111×9CIll)。1 GB／1’14927．1—20084．5醋酸纤维素板(6CFII×8cm)。4．6醋酸纤维素硬膜(7CII]×9cm)。4．74℃冰箱。4．820℃或40℃冰箱。4．94℃低温高速离心机。4．10振荡仅。4．11组织匀浆机(2mI。或5mI，)。4．12抗凝毛细管。4．13抗凝毛细管塞子。4．14毛细管离心机。4．15吸耳球。4．16小砂轮。4．17解剖板。4．18手术剪，手术镊。4．19竹镊子。4．20微波炉。4．2137℃温箱。4．22玻璃器皿。4．236Cnl×8Cm或7cn"l×9Cnl玻璃板。4．24普通滤纸。4．25分析天平。4．26pH计。4．27紫外监测仪。4．28实验室常规用品。4．29化学试剂：见表1。表1化学试剂中文名称英文名称(或简写)分子式规格三羟甲基氮基甲烷TrIsC。HllNO_f分析纯或化学纯乙=胺四乙酸ED，IAC】nHl5N2()8分析纯或化学纯硼酸boricacidH3803分析纯或化学纯廿氨酸glycineC：H，Noz分析纯或化学纯盐酸hydrochtoricacidfICl分析纯或化学纯双氧水hydrogenperoxide30％solutionH¨)2分析纯或化学纯柠檬酸cl”ateacidm()nohudrate(：6H8()7·H2()分析纯或化学纯磷酸氧二：钠sodiumphosphatedibasicNa2HP04·12H2()分析纯或化学纯磷酸二氢钾potassiumdihydrogenphosphateKH2P()4分析纯或化学纯氢氧化钠sodiumhydroxideNaOH分析纯或化学纯无水醋酸钠odiumaceta{eanhydrousNaC?H30?分析纯或化学纯琼脂粉分析纯或化学纯醋酸镁Mg(C?H2(J2)2分析纯或化学纯 表1(续)GB／T14927．1—2008中文名称英文名称(或简写)分子式规格氯化锰manganesechlorideMnClz分析纯丽春红一SC22H1。N4Na40⋯S分析纯三氯乙酸trichloroacelicacidCC】，COOH分析纯或化学纯磺基水杨酸saIfosalicvlicacldC，H60^S·2H20分析纯或化学纯巴比妥barbitalCRH】2N2()H分析纯或化学纯巴比妥钠sodiumbarbitalCRIt】2N2Na03分析纯或化学纯氯化镁magnesiumchlorideMgCI，·6H20分析纯或化学纯乙二胺四乙酸二钠Na，EDTAC1。H1dN2Na20分析纯或化学纯三氯化铁ferricchlorideanhydrousFeCl3分析纯或化学纯铁氰化钾ferricyanntumkaliumK．、[Fe(CN)。：分析纯或化学纯氢氧化铵ammoniumhydroxideNH。()H分析纯或化学纯醋酸CH、COOH分析纯或化学纯丙酮CHICOCH2分析纯或化学纯葡萄糖一1一磷酸glucose1phosphateC^H1109PNa，胱胺盐酸盐cystaminedlhvdrochlorldeC4H】4C12N2S2二硫苏糖醇1，4dlthlohreltol(DTT)C；H⋯OS4甲基散形乙酸盐4—methyl—umbelliferyacetateC】【】ItsO_日乙酸萘酯pnaphthylacetteC12H1。()2口一磷酸萘酯钠盐pnaphthy[acidphosphateC㈤HR()4PNa口一磷酸萘酚二钠盐I?-naphthylphosphatedisodiumsaltC10H，()4PNa2n果糖6磷酸1)fructose-6phosphatedisodiumsaltC6H【l()gNa2P溴化甲基噻唑蓝thiazolylbluetetrazo]iumbromide(MTT)Cl8Hl6BrN8S辅酶1Ipnieotinamideadeninedinucleotide(TPN)C2lH27N7()】7P3甲硫吩嗪酸酯Nmethylphenaziniummethylsulfate(PMS)ClHHl【N2CH3S04异柠檬酸三钠盐DI。isoeitricacidtrisodiumsaltC6H。()7N砒葡萄糖l，6=磷酸glucose1．6diphosphaleC。H⋯()12P?葡萄糖6磷酸I)_glucose6phosphateC6Hl3()9PNa2葡萄糖6磷酸脱氧酶glucose6phosphatedehydr。genase苹果酸DI。mallcacidH()2CCH2(OH)C02H坚固蓝RR盐fastblueRRsahCl。Hl4N≈03+1／2ZnCl4I。白氨酰替I。丙氨酸I。leuevl1-alanineC9H】8N2()3过氧化物酶邻二甲氧基联苯胺盐酸盐。一dianisidinedlhvdrochl()rlde[c。H。(OCH。)NH。]?p磷酸萘酚口naphthylacidphosphateC1011BO{PNa。硫酸镁magnesiumsulfateMgSO一·7H，O分析纯或化学纯3 GB／T14927．1—20085生化标记检测方法总则5．1电泳样品的制备5．1．1血浆以抗凝毛细管行眼眶采血术，500×g，离心5min，分离血浆和血球，吸出血浆备用。5．1．2溶血素在去除血浆的富含红血球的试管内加入蒸馏水，红血球与蒸馏水的比例一般为1：4(V／V)，振荡1min，成为红色透明液体，即为溶血素。5．1．3组织匀浆上清液采用安死术处死动物，剖腹，小鼠取肾脏1只，肝脏1叶；大鼠取肾脏1只，小肠6cm～8CI／I·，睾丸1只，并开胸取肺脏1叶。分别加入适量预冷蒸馏水，蒸馏水与组织的比例一般为2：1(V／m)。分别用组织匀浆器匀浆。匀浆液置4℃低温高速离心机中，2000×g，30min。以吸管吸取上清液存Xd,iK管中备用。5．1．4样品保存上述制备样品均宜新鲜使用，在4℃普通冰箱中只能保存一天，在一20℃或一40℃低温冰箱中保存不超过一个月。5．2电泳步骤5．2．1浸膜将醋酸纤维素膜(板、硬膜)轻轻浸入相应的电泳缓冲液(参见附录A)中，浸入时应避免膜(板、硬膜)上出现气泡。5．2．2点样将浸透的膜(板、硬膜)，取出以滤纸吸干，纤维素膜(板、硬膜)面朝上，平置在点样板上，以点样器取预置在样品槽内的编号样品，在膜(板、硬膜)上点样。一次点样量为0．3pI。，为增加膜(板、硬膜)上的样品量，可重复点样，最适点样量不宜超过0．9／zI，(三次)。5．2．3电泳以记号笔在膜(板、硬膜)上标明原点，泳动方向，迅速将膜(板、硬膜)搭在事先放人缓冲液的电泳槽纸桥上，盖上电泳槽，接通电源，电泳条件见相关条款。5．3染色5．3．1蛋白染色法电泳结束后取出膜(板、硬膜)置人0．2％丽春红染液中，5rain后以竹镊子取出换以5％～7％醋酸脱色直至电泳区带清晰可见。5．3．2酶显色板法适用于醋酸纤维素膜。5．3．2．1将酶显色液(参见附录B)新鲜混和。加入2％热琼脂3mI。～4mI。，迅速混匀，均匀倒置在7C112×9cm的玻璃板上，制成酶显色板。5．3．2．2电泳结束后取出膜将点样面贴在酶显色板上，注意将膜与酶显色板间的气泡排尽，但不可移动膜的位置。5．3．2．3将带膜显色板移至37℃温箱保温，直至酶区带清晰显现。5．3．2．4取下已显色的膜浸入5％～7％醋酸中终止反应。5．3．3琼脂覆盖法适用于醋酸纤维素板(硬膜)。 531电泳结束后取出醋酸纤维素板(硬模)。32新鲜混和酶显色液．迅建与2mI～3m1．2蹦热琼脂混匀，均匀倒放在水平放置的醋酸纤维素板(硬模)上。33待琼脂冷却固定后．将醋酸纤维索板(硬模)移人37℃温箱-茛至酶区带清晰疑现。34将醋酸纤维素板(硬模)放^5％～7％醋酸中终止反应。6小鼠生化标记检测细则61碱性磷酸酶l(alkalinephosphatascI，Akpl)Chrl6I1样品：肾匀浆，06，tI．。6{2缓冲液rris—CilratepH83参虬附录A的第A9章。6{3电泳支持物：醋酸纤维硬膜(板)。6{4电泳条件：u一200V．f_40rain．移动方向由负极至正扳。6}5染色方法琼脂覆盖法。6{6染色液参见附录B的第B11尊。6j7标准对照：Akp]aC5781．／6J快带AkplbCBA／N慢带618判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C作比较619Akpl电泳结果及模式图，见图1。l唰{-_-_-_·---+ABABABABPhenmypcABABABABnhbbb∞∞㈣bb∞bbG∞oUm”bbb⋯⋯№∞№图1AkpI电津结果殛模式图谱62碳酸酐酶2(carbonicanhydrase2．Car2)Chr3621样品：溶血索．03，t1。。622缓冲液NaC：H⋯OE1)‘FApHd参虬附录A的第A1章。623电泳支持物：醋酸纤维索硬膜。624电泳条件：U=200V．f=40min．移动方向由正极堑负橄。625染色方法蛋白染色法。626染色液参见附录B的第B6章。627标准对照：aC57BI。／6JbBALB／cJ慢带快带628判断方法参j!}iJ．述对照动物读出带型后与附录c作比较629(Tar2电泳鲇粜及模式图．”网2。 GB／1149271—2008l——⋯一～m。f-一-一一：一-一-二】二】二】二】二1二】二】[】[rH13I}BAABBAphcnO口”BAAB11Abbbbbbbb∞nhb∞∞Ⅱ㈣wwbbbhbbaaabbb⋯aaa圈2Car2电泳结果及模式图谱63肾过氧化氢酶一2(kidneycatelase，Ce2)Cbr7631样品：肾匀浆以蒸馏水1：3稀释，03pL。632缓冲液：TrisCitralepH76参见附录A的第A3章．699电泳支持物：醋酸纤维索膜。634电沐条件：U一200V．t=25min．移动方向⋯负极生Ⅱ。饭。635染色方法：酶显色板法。696染色液参见附录B的第B8章。637标准对照：Ce2aBAI，B／cd快带Cc2bCBA／N慢带638判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附求C作比较。639Ce2电泳结果及模式图，见圈3。ABAPhenotv∞AHA⋯⋯aabb∞⋯aaG㈨Iyoc⋯aaa∞aabb⋯⋯a图9Ce2电泳结果及模式图谱64酯酶1(esteⅧ牡I，EsJ)Chr8641样鼬血清，03“L。642缓冲液phosphatebufferpH70参见附录A的第A2章。649电泳支持物：酣酸纤维膜。644电泳条件：U=140V，t一30min．移动方向由m极至正极。645染色方往：酶显色板法。646染色液：参见附录B的第B1章。647标准对照：EHJaC57BI／6J№带EsJbCBA／N慢带6 648判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录c作比较49Esl电泳结果及模式图，见图4。]“{·‘二二一=一_IA^A^BABBPhenoqpeABABB∞∞∞∞№ab№№bbOenoqpe∞∞∞∞∞abbbbb№图4EsI电泳结果殛模式图谱5酯酶3(esterase_3，Es3)Chr1151样品：肾匀浆。52缓冲液：TrisGlycinepH89参见附录A的第A7章。53电泳支持物：醋酸纤维硬膜。54电泳条件：U一280V，t=28min，移动方向由负极至正极。55染色方法琼脂覆盖法。56染色液：参见附录B的第Bl章。57标准对照Es3aBAl，B／cJ慢带Es3bTw快带Es3cCBA／N最慢带58判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录c作比较。59Es3电泳结果及模式图，见图5。麟一●●----_脚{_-_=---=’IIBCACACACphenotyp8BcACACACbbbb⋯∞∞∞ac(mlyp2bb№ac¨ⅡwK图5ES3电泳结果殛模式图谱6酯酶10(eNterase10，Es】0)chr1461样品：肾、肝匀浆。2缓冲液：TrisGlycinepH89参见附录A的第A7章。3电泳支持物：醋酸纤维素板(硬膜)。4电泳条件：u=280V，忙28min，移动方向由负极至正极。5染色方法琼脂覆盖法。6染色液：参见附录B的第B2章。7标准对照 Esj0aBALB／d慢带Esl0hCBA／N快带cTW最慢带68判断方法：参照L述对照动物读出带型后与附录C作比较69EslO电津结果及模式躅，见圈6。：=i==i=■==—==●习---●●__---I--●_BABAphenolypeEslOBABA№M∞№∞aaOenotypel：slObh㈣㈨∞CACAphenolypenJCACA⋯∞⋯aa(h04口Es3⋯∞⋯∞图6EslO电泳结果殛模式图谱67葡萄糖6磷酸脱氢酶-1(glucose6phosphatedehydrog⋯se_1，G州I)Chr4671样品新鲜肝或肾匀浆，09pL。672缓冲液：Tris_GlycinepH89参见附录A的第A7章。673电泳支持物：醋酸纤维紊板(硬膜)。674电泳条件U一200V，f_45min，移动方向由负极至正极。675染色方法琼脂覆盖法。676染色液：参见附录B的第B7章。677标准对照GpdlaC57BI。／6J慢带GpdlhBAI．B／d快带Gpdlcrw最慢带678判断方法：参照上述对照动物读出带剐后与附录C作比较。679Gpdi电泳结果及模式图．见图7。一．[．．。．．。．二【】二【】[【】=BABABPhenmypeBABABbbbb∞bbGenoqpebb⋯bbt,baabb图7Gpdf电泳结果及模式圈谱68葡萄糖磷酸异构酶1(一ucoseI)h08phatcisomerase1，Opil)Chr7681样品：溶血素，03FL。8 682缓冲液：T⋯·GlyemepH85参见附录A的第A6帝。83电泳支持物：醋酸纤维素硬膜。84电泳条件：U=900V．f-30min，移动方向由正极至负极。85染色方法琼脂覆盖法。86染色液参见附录B的第83章。87标准对照(，ⅢjaBAI。B／eJ幔带(；Ⅲ1bC5281．／6J快带88判断方法：参照上述对照动物凄出带型后与附录C作比较89Gp·J电泳结果及模式图．见图8。l。，。一n—m—m—m二二--一am二二二BAABbAP№口olvⅣB¨BAABT3A^^bbbhbh∞¨baa⋯cn⋯bbbbbb№n¨∞∞图8Gpll电泳结果殛模式图谱9血}Ii蛋白B链(hemoglobinpchain，Hbb)Chr791样晶溶血豪内加入1／4体积的烷化剂．参见附录B的第B9章，03pL。92缓冲液：1-m—GlycinepH85参见附录A的第A6章。93电泳支持物醋酸纤维素膜。94电泳条件：U一200V．，=30min，移动斤向南负极至正乜l。95染色方法：蛋白染色法。96染色{瘦参见附录B的第B6章。97标准对照：HbbsC57BI．／叫快带HbbdBALB／cJ慢带98判断方法：罄照h述对』l{i动物读出带型后与附录(1作比较。9Hbh电淋结果及模式图，见图9。小加烷化剂处理的电泳结果及模式圈．见图10。—眵-▲▲●盗墓。：．jSsDSDpDI)DPhcnoH口SsDSDPDI)⋯川sd∞dddd0e-I‘nyp％⋯“sd”“dd“图9Hbb电渌结果及模式图谱．．．．．．．．．．．．．．．．I‘． sSDSDPDPhenetypeSDSDPI)Df)⋯$ddⅫPPdd㈣⋯∞∞dd“∞addddd图10Hbb电泳结果殛模式图谱(未烷化)610异柠檬酸脱氢酶一I和苹果酸酶一1(啪cltratedehyd。‘genase_1，malicen2yrile—l+IdhJ和ModlChrl．96101样品：肾匀浆03pL。6102缓冲液：TrisCitratepH76参见附录A的第A3章。6103电泳支持物：醋酸纤维素硬膜。6104电泳条件：U--200V，t--35min．移动方向由负极至正极。6105染色方法：琼脂覆盖法。6106染色液参见附录B的第B4章。6107标准对照Idhl8BALB／c慢带IdhlbCBA／N快带Mod]aBALB／e快带ModlbCBA／N慢带6108判断^法参照卜述对照动物读出带型后与附录C作比较。6109I曲I和Modl电泳纬果及模式图，见囝11，胁，{·--··_·_A^BABAPhenoqpeABABA"Mbbbb∞bbaa∞Gcnotype∞aabbbb∞bbn∞围11|dhl和M0df电泳结果殛模式图肽酶3(peptidase_3，Pep3)Chr1样品肾匀浆，06pI．。缓冲液：TrisGlycinepH85参见附录A的第A6章。电泳支持物醋酸纤维硬膜。电泳条件：U一200V，t=30min，移动方向由负极至正极。染邑方法琼脂覆盖法。．．．．．．．．．．．．．．．．．．I‘， 6116染色液参见附录B的第1=iI2章。117标准对照：Pep3aC57BI。／6J悭带Pep3bCBA／N№带Pep3cFAl／TM最快118削断方法：参照上述对照动物读出带型后与附硅C作比较119Pep3电泳结果及模式圈，见图12。■k蔫确嘲GB／T149271—2008皿二]工[口工●■”：-----BCABCBAPh即啊∞BCAeCBAbb⋯bbccbh∞oenolv∞bb⋯¨cbbm图12Pep3电泳结果殛模式图12磷酸葡萄糖转位酶l(phosphoglcomulase1．瞻m7)Chr512j样品：肾匀浆，0pL。122缓冲赦：TrisGlycincPH85参见附录A的第A6章。123电泳支持物醋酸纤维索硬膜。124电泳条件U=900V．卢40mln，移动方向由负极争正槭。125染色南法琼脂覆盖法。126染色液参见附录B的第B5章。127标准对照：PgmlaC57BL／6J快带Pgm]bCBA／N慢带128判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附采(1作比较。129PgnlJ电泳结柴及模式罔，见网13。___------_*，{一。-。一。。-。。ABABARBABPbcnotyp。ABABABbAB∞¨hhnbbbb∞bbbbGenotype∞bb¨b∞bbbb∞№bb图13Pgmf电泳结果殛模式图．．．．．．．．．．．．．．．．．‘‘．．．．．．．．．．．．．．．．．．I‘． 613转铁蛋白(transferrin．Trf)Chr9131样品：血清t03¨L。132缓冲渡：Tris—GlyeinepH85参见附录A的第A6章。133电泳支持物：醋酸纤维素膜。134电泳条件：U=200V．t一25min．移动方向由负极至正极。135染色方法：蛋白染色法。136染色液参见附录B的第B6章。137标准对照：7~rfaCBA／N恢带nfbC57BL／6J慢带138判断方法参照上述对照动物读出带型后与附录C作比较139n，电泳结果及模式图，见图14。Ⅳ_·-_。----][【I】]口[[BABPhcn嘶∞BRM㈧b6bⅡ∞∞b6GenoWpe∞bb7夫鼠生化标记桓测细则国14Trt电泳结果殛模式图71碱性磷酸酶1(alkalinephosphatase1．Akpl)Chr9711样品：肾匀浆t03pL。712缓冲液：TrlsEDTA_Bora：eMgCI，PH76参见附录A的第A8章7l3屯泳支持物：醋酸纤维素硬膜。714电泳条件：U=200V，t一40rain，移动方向由负极至正极。715染色方法琼脂覆盖法。716染色液：参见附录B的第B10章。717标准对照：AkplaF334／N一条带Akp7bWKY缺失一条带718判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较。719Akpl电泳结果及模式图，见图15。 2”f-GB／T149271—2008—【II．ABAPhenotypcA^BA∞Ⅱ∞№bbbb¨日C,tnotype∞nⅡbbMbbM图15Akpl电泳结果殛模式圈72血清碱性磷酸酶“plasmaalkalinephophata3e一1-Alpl)Chr9721样品：血清，03”L。722缓冲液；TrisEDTA—BoratepH84参见附录A的第A5章。723电泳支持物醋酸纤维硬膜。724电泳条件U=200V，t=30mint移动方向由负极至正极。725染色方法：琼脂覆盖法。726染色禳：参见附录B的第B13章。727标准对照：Alp]aSHR快带AJ“bBN慢带728判断方法：参j{ll上述对照动物读出带型后与附录D作比较。729Alp]电泳结果及模式图，见图16。o^|¨_BABP№n岍BA8B日8bbbb№bbu∞bbbbbb№Oc7】oly*bbbb∞¨№№bbbb图16A岫l电泳结幂殛檀式田73过氧化氢酶一1(Catalase一1．CH)Chr2731样品溶血索，o6p1J。732缓冲液：Tris—EDTA—BoratepH84参见附录A的第A5章，733电泳支持物：醋酸纤维素膜。734电泳条件：U=200V，t=30min．移动方向由负极至正极。735染色方法：酶显色板祛。73．6染色液：参见附录B的第B8章。737标准对照： CsJaF334／N快带csjbWKY慢带738判断方法参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较739Csl电泳结果及模式图，见图17。●-●BABABPhe∞typebBABABhbbhⅢ⋯¨Ge⋯bbbbaEbbbbaa∞bb图17凸7电泳结果及模式围酯酶l和酯酶3(es[erasel，est⋯sc-3，砾j和E娟)Chr19，111样品小肠组织匀浆，03pI，。2缓冲液：Tris_EDTABoratepH84参见附录A的第A5章。3电泳支持物：醋酸纤维紊硬膜。744电泳条件：u=200V．f=35min．移动方向由负极至正极745染色方法：琼脂覆盖法。746染色液：参见附录B的第B1章。747标准对照：Es』aF334／N一条带E“bAC]缺失带F334／NSHR快带最慢带慢带判断方法参照上述对照动物读出带型后与附泶D作比较Esl和Es3电泳结果及模式罔，见图18。A^^^BA⋯⋯¨aahAA三A童ADBDD：B十一●■●■●■●■n，■⋯⋯_●Ph∞otyp8^A^ABAG枷typeaa∞∞∞∞∞bb∞∞图18b1和ES3电泳结果及模式图l■■■●●■I■o一●●●●●●●●●●I+E8947 75酯酶一4(esler8sP4tEs4)Chr1951样品：肾匀浆．03txL。7．5．2缓冲涟：Tris—EDTA—BoralepH84参见附录A的第A．5章53电泳支持物：醋酸纤维索硬膜。54电泳条件：u一200V．卢35min。移动方向由负极至正极。55染色方法：琼脂覆盖法，56染色液：参见附录B的第R1章。57标准对照：Ea4aSHR三条快带Es4bWKY三条慢带58判断方法：参照上述对照动物读出带型后与跗录D作比较。59Es4电诛结果及模式图，见图19。GB／T149271—2008●“：g-_-it===-i===-BB^ABABphenotypeBABAB№№∞nbbbb∞∞”bbGcllombbbb∞∞bb№M∞bbbb图19ES4电泳结果及模式圉6酯酶-6，8，9(estera冲6，8，9，Es6．8．9)Chr8，19-1961样品皋丸匀浆，06ttL。62缓冲液zTris-EDTA—BoralepH8．4参见附录A的第A5章63电泳支持物：醋酸纤维索板<硬膜)。64电泳条件：U=200V，卢35rain．移动方向由负极至正投。65染色方法：琼脂覆盖法。66染色灌：参见附录B的第B1章。67标准对照Es6Es8Es9F344／NBNF344／N快带慢带快带慢带快带aF344／N慢带68判断疗法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较69Es6，8．9电泳结果及模式圈．见图20。．．．．．．．．．．●t‘． r—■■]I暑LE$6⋯-_-_---：：¨¨---·_＆9哮--_=[I][【1][IIA^AABABB＆6PhcnotypeABAB∞∞"∞∞M∞bb№脚Gcmq口∞∞∞∞ⅡbbnbbBABAA＆8PhemtypcBABA№№bb％bb∞№∞∞自8Ccno""c№№bbbbbb∞bbn∞ACACB9pbcmtypcACAC∞∞∞∞∞ccncccc脚。即0lyp∞M∞∞∞cc∞％“鲴20Es6，8．9电泳结果爰模式图77酯酶10(esterase10，EslO)Chr1977．1样品：肺匀浆，0．6“L。77．2缓冲液：Tris—EDTA-BoratepH84参见附录A的第A5章。电泳支持物：醋酸纤维素硬膜。电泳条件U--200V，卢35min．移动方向由负极至正极染色方法：琼脂覆盖法。染色液：参见附录B的第B1章。标准对照zE5lOaF344／N三条慢带Esl0bBN三条快带7．78判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较79Esl0电泳结果及模式图，见图21。---●-ABAB～e110目mABABⅡaa∞㈨№bbbbCcnotypem∞口bb∞bbbb№bb圈21ESf0电泳结果殛模式圉7．8血红蛋白一口链(hemoglobin}chain，Hbb)Chr．1781样品：溶血紊，06pL(溶血素：6moI／L尿素=I，3)。782缓冲液：Tris-EDTA-BoratepH84参见附录A的第A5章。783电泳支持物：醋酸纤维硬膜。784电泳条件：U--200V，户35min，移动方向由负极至正板。7．8．5染色方法：蛋白染色法。786染色液：参见附录B的第B6章。16．．．．．．．．．．．．I‘．--_]-_口-_]--Jh，●●●，、【叫一．．．．．．．．．．．．●+ 787标准对照：HbbaF334／N两条带HbbbI，EW／M缺失一条带88判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较89Hbb电泳结果及模式图t见图22。l11m之ABAphen0目∞ABAnn∞∞bb№∞口n∞Genotype"aa∞∞№b,baann∞团22Hbb电泳结果殛模式囱8近交系太、小鼠常规遗传监测判断标准近交系动物具有纯合性，同基因性和个体性，因此送楦动物每个生化标记的袁型都应为纯合型f每个品系内个体间生化标记表型都应一致；经检测获得的生化遗传概貌应与原品系的生化遗传概貌相符。依据近交系小鼠太鼠生化检测标记细则，完成检测并符合上速标准的近交系可揽为经常规遗传监测未发现遗传变异的合格品系。如果某些品系检测结果与上述标准不相符，应依据以下原则做出分析和处理(见表2裹2遗传检耐雏果的分析与处理原则m^类≈{目符∞类女日能发生女#的原目☆音女；f十疵点m期&±遗传8肇淘‰、重新引种一十位^m期＆±遗传gⅡ再次送检发±遗传女壹B经目定再次送检时．动物应根据监测机构的要求选送。再次检测时如未发现带杂台型位点的动物，该品系可被视为合格的近交系品系，但应注明突变基用的名称，必要时参照宴验动物遗传标准对品系的名称加以修订。如再次检测时仍发现带有杂台型位点的动物．该品系应予以淘汰，重新引种。 GB／T14927．1_一2008A．1Acetate—EDTANaC2H302EDTAdistilledwateruptoA．2phosphatebufferNa2HP()4·12H20KH2P04distilledwateruptoA．3、TrisCitrateTrisdistilledwater10％CitrateaciddistilledwateruptoA．4TrisHClTrisdistilledwaterHCl0．1mol／LdistilledwateruptoA．5TrisEDTABorateTrisEDTAboricaciddistilledwateruptoA．6TrisGlycineTrisglycinedistilledwateruptoA．7Tris—GlycineTrisglyeinedistilledwateruptoA．8TrisEDTABorateMgCl2TrisNa2EDTAboricAcidMgCl26H2018附录A(资料性附录)缓冲液配方pH5．4(用时t：4稀释)pH7．0pH7．6(用时1：5稀释)适量调至pH7．6pH8．0适量调至pH8．0pH8．4pH8．5pH8．9PH7．610．60g2．48g8．63g3．77g12．10g600nlL24．20g800mI．10．90g0．60g3．10g1000mI，3．00g14．40g5．16g3．48g1．81g1．86g0．33g2．03g distilledwateruptoA．9TrisCitratecItrateacldwateruptopH8．3GB／T14927．1—200816．64g4．20g GB／T14927．1—2008B．1Bnaphthylacetateaceton{astblueRRsalt附录B(资料性附录)染色液配方0．05tool／I，phosphatebuffer(pH7．0)过滤使用2％agarB．20．05mol／I．phosphatebuffer(pH7．0)umbelliferylacetateaceton2％agar(热)紫外监测仪下观察B．30．2mol／I，Tris—HCl(pH8．0)0．25mol／LMg(C2H3。2)210％D-fructose6phosphatedisodiumsalt1％MTT1％TPNglucose一6phosphatedehydrogenase0．25％PMS2％agar(热)B．40．2mol／I。TrisHCl(pH8．0)1％MTT1％TPN0．1mol／I。MnClz0．5mol／I，DLmalieacid(pH8．0)10％DI．一isocitricacidtrisodiUFI]salt0．25％PMS2％agar(热)B．50．2mol／I．Tris—HCl(PH8．0)0．25mol／I，Mg(C：H30。)2l％glucosel，6-diphosphate、10％glucose1diphosphate1％MTT1％TPNglucose一6phosphatedehydrogenase0．25％PMS2％agar(热)B．6ponceauStrichloroaceticacid2010mg0．5inL25mg9．5IllL3ml。3mI。5mgO．2mI。3mI。乩儿乩止儿叫儿札o∞∞∞∞：∞o儿止儿止儿儿札_耋儿儿儿乩止Ⅲ儿_窨％呱∞∞∞∞∞∞n撕∞加∞∞∞o∞n¨汕i12；10● GB／T14927．1—2008salfosalicylicaciddistilledwaterB．70．2mol／LTris—HCI(pH8．0)0．25mol／LMg(C2H302)20．5mol／I。glucose-6一phosphatedehydr。genase1％MTT0．25％PMS1％TPN2％agar(热)B．8l％FeCI。1％K。[Fe(CN)6]2％agar(热)电泳后将膜浸入0．3％的双氧水中30s，再用蒸馏水漂洗2遍后贴在B8酶显色板上。B．9烷化剂cystaminedihvdrochloride1，4一dithiohreitolNH。oHdistill．edwaterB．100．2mol／I，Tris—HCI(pH8．0)p—naphthylacidphosphatefastblueBBsalt0．2mol／LMnCl22％agar(热)B．11B—naphthylacidphosphatefastblueRRsalt0．2mol／I．MnCl2distilledwater2％agar(热)B．120．2mol／LNaH2P04(pH7．5)Lleucyl1alanineperoxidase0．2mol／LMnClo—dianisidinedlhvdrochloridecrotalusadamanteusvenomB．130．2mol／I．Tris—HCI(pH8．0)p—naphthylphosphatedisodiumsaltfastblueRRsaltMgSO。·7H206．00g200mI，2mI，150ML300“I。150“I。150uL150“I。3mI，4mL4I[11I，3mI。112．5mg)mg25“I。1mI。5mL10mg10nag0．1mI。3mI。10mg10mg0．1mL5mI。3mI。5ml。0mg2．0mg0．1mI，0．2mI，2．0mg5．0mL5．0mg8．0mg6．Omg21 GB／T14927．1—2008附录c(资料性附录)常用近交系小鼠生化位点标记基因常用近交系小鼠生化位点标记基因见表C．1。表C．1常用近交系小鼠生化位点标记基因LoclAkplCar2Ce2EslEs3Esl0GpdlGpilHbbldhlModIPgmlPep3丁rfStrainA／babCabadabAKR／一babcbadbabC3H／Hebcbd8abC57BL／6absababCBA／JabcbdbhabaCBA／OLababCbdbaBALB／cbababadabDBA／labCbadbabDBA／2ababcbadbab615abCabasababTAl／TM。baCbSabacbTA2babcabdabTWbabCaPbab3为TAl的天医突变系。 附录D(资料性附录)常用近交系大鼠生化位点标记基因常用近交系大鼠生化位点标记基因见表D．1。表D．1常用近交系大鼠生化位点标记基因CB／T14927．1—2008LOClAkplAJpCslEslEs3Es4Es6Es8Es9Esl0HbbStrainF344／Nababab8aI。OU／Cab8abaSHRabababaWKYbadbabaI．Ew／MabadbababAClbabababBNabadbab8'