GAT597-2006中毒检材中静松灵的定性定量分析方法.pdf 8页

'ICS13.310A9261:1中华人民共和国公共安全行业标准GA/T597-2006中毒检材中静松灵的定性定量分析方法QualitativeandquantitativeanalysisforXylazoliinpoisoningsamples2006-01-17发布2006-05-01实施中华人民共和国公安部发布 GA/T597-2006目U吕本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析标准化分技术委员会提出并归口。本标准起草单位:山东省济南市公安局刑警支队、山东省公安厅科技处。本标准主要起草人:梁凯军、李长立、陈鲁军、刘海燕、王可。www.17jzw.cwww.17bzw.cwww.17jzw.nwww.3x888.c GA/T597-2006中毒检材中静松灵的定性定量分析方法范围本标准规定了中毒检材中静松灵的检验方法。本标准适用于中毒检材中静松灵的定性分析和定量分析。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GA/T122-1995毒物分析名词术语术语和定义GA/T122-1995中确立的以及下列术语和定义适用于本标准。静松灵2-(2,4-Dimethylphenylamido)-4H-5-dihydro一1,3-thiazoleC=H=N2S=206.3，其他名称:二甲苯胺唾哇。3.2SKF525n2-Diethylaminoethyl-a,a-diphenylvalerateC23Hx1N认=353.3，其他名称:丙基解痉素、波罗的芬。4检材4.1中毒者的呕吐物、血液、尿液。4.2中毒尸体的胃及吃剩食物、胃内容、尿、肺、肝、肾、心、脑、血液。对怀疑注射人体内者，还需提供注射部位肌肉、可疑针剂、注射器及器皿等。5气相色谱法、气相色谱一质谱联用法5.1原理5.1.1气相色谱法(GC/NPD)原理本法以SKFs-为内标物，经提取分离、净化、浓缩后，用具有氮磷检测器(NPD)的气相色谱仪进行检测;经与静松灵标准品比较其保留时间或相对保留时间而定性;与平行操作的随行参比(已知浓度的静松灵和SKF-A)进行比较，根据峰高比或峰面积值比，用内标法计算检材中静松灵的含量。5.1.2气相色谱一质谱联用法(GC/MS)原理本法根据静松灵出峰的质谱图而定性;对静松灵选择质荷比M/Z206的离子峰，内标物选择质荷比M/Z86的离子峰，与平行操作的随行参比(已知浓度的静松灵和SKF-A)进行比较，根据峰高比或峰面积值比，用内标法计算检材中静松灵的含量。5.2试荆5.2.1常规试剂本法所用试剂均为分析纯，试验用水为蒸馏水。a)甲醇; GA/T597-2006b)5mol/L的氢氧化钠溶液;c)0.25mol/L的氢氧化钠溶液;d)丙酮;e)6mol/L的盐酸;f)无水硫酸钠。5.2.2静松灵标准溶液5.2.2.1静松灵储备溶液准确称取静松灵100.0mg，用5mL丙酮溶解后，转移到10mL容量瓶中，添加丙酮到刻度，混匀，得10.0mg/mL的储备液，置一10℃冰箱中保存。保存期一年。5.2.2.2静松灵标准使用液将静松灵储备液用丙酮稀释10倍，得1.0mg/mL的静松灵标准使用液。4℃冰箱中保存，保存期三个月。5.2.3内标物标准溶液5.2.3.1内标物储备溶液准确称取内标物SKF,15A100.0mg，用5mL丙酮溶解后，转移到10mL容量瓶中，添加丙酮到刻度，混匀，得10.0mg/mL的储备液，置一10℃冰箱中保存。保存期一年。5.23.2内标物标准使用液将内标物储备液用丙酮稀释10倍，得1.0mg/mL的内标物标准使用液。4℃冰箱中保存，保存期三个月。www.17jzw.co5.2.4静松灵/内标物混合标准溶液准确吸取等量静松灵标准使用液和内标物标准使用液混合而成(静松灵。.5mg/mL;SKF525A0.5mg/mL),4℃冰箱中保存，保存期三个月。5.3仪器5.3.1气相色谱仪配有氮磷检测器(NPD)的气相色谱仪、色谱数据处理系统。5.3.2气相色谱一质谱联用仪配有标准El源的四极杆质谱。5.3.3GDX-403固相柱使用前用5mL甲醇活化，再用5mL水淋洗。5.3.4其他仪器www.17bzw.ca)离心机;b)恒温水浴锅;c)15mL具塞刻度试管;d)电动振荡器;e)10pL,100IL微量注射器。5.4操作方法5.4.1定性分析5.4.1.1提取5.4.1.1.1固相萃取法5.4.1.1.1.1尿液1ml，加3mL水稀释后，加内标物标准使用液1pL---2uL(SKF,,s=1wg-2pg),加5mol/L的NaOH数滴调pH值11-12，然后加至经甲醇、水活化处理过的GDX-403固相柱中，控www.17jzw.ne制流速为1mI./min--3mL/min。过柱，用5ml水清洗柱子，真空抽干，用氯仿:丙酮(1:1)5mL洗脱。洗出液在70℃水浴上挥发浓缩到。.2mL左右供检。zwww.3x888.co GA/T597-2006同时取相应的空白检材两份(各1mL)，其中一份添加静松灵/内标物混合标准使用液2pL-4pL(SKFsz1A1pg-2pg;静松灵1pg-2pg)，按上述程序平行操作，进行空白对照和已知对照分析。5.4.1.1.1.2血液1mL，肺、肝、肾、心、脑、胃组织或肌肉等检材绞碎后取1g，添加内标物标准使用液1pL-2pL(内标物1pg-2pg),6mol/L的盐酸2mL，在80℃下水解1h，冷后离心过滤，滤液用5mol/L和0.25mol/L的NaOH调pH值11^-12，然后加至经甲醇、水活化处理过的GDX-403固相柱中，控制流速为1mL/min-3mI./min。用5mL水洗柱子，真空抽干，用氯仿:丙酮(1:1)5mL洗脱。洗出液在70℃水浴上挥发浓缩到0.2mL左右供检。同时取相应的空白检材两份，其中一份添加静松灵/内标物混合标准使用液2pL-4pL(SKFs25A1pg-2pg;静松灵1pg-2pg)，按上述程序平行操作，进行空白对照和已知对照分析。5.4.1.1.2液一液萃取法5.4.1.1.2.1尿液、针剂取1mL，加3mL水稀释后，加内标物标准使用液1pL-2pL(SKF,I,A1pg-2pg)，加5mol/L的NaOH数滴碱化调pH值11-12，加氯仿5ml_振荡提取10min-15min，离心1min-2min，吸取氯仿液，经无水硫酸钠脱水，于70℃水浴上挥发浓缩到。.2mL左右供检。同时取相应的空白检材两份，其中一份添加静松灵/内标物混合标准使用液2pL-41,L(SKF121A1pg-2pg;静松灵1pg-2pg)，按上述程序平行操作，进行空白对照和已知对照分析。5.4.1.1.2.2血液1m工一，肺、肝、’肾、心、脑、胃组织或肌肉等检材绞碎后取1g，添加内标物标准使用液1pL-2pL(SKF,,,Alpg-2pg),6mol/I的盐酸2mL，在80℃下水解1h，冷后离心过滤，滤液用5mol/L和0.25mol/L的NaOH调pH值11-12，加氯仿5mL振荡提取10min-15min，离心1min-2min，吸取氯仿液，经无水硫酸钠脱水，于70℃水浴上挥发浓缩到。.2mI左右供检。同时取相应的空白检材两份，其中一份添加静松灵/内标物混合标准使用液2pL-4pL(SKF5z5A1pg-2Vg;静松灵1pg-2pg)，按上述程序平行操作，进行空白对照和已知对照分析。5.4.1.2检测5.4.1.2.1分析条件5.4.1.2.1.1气相色谱条件色谱柱:(1)0.2mm-0.5mmX25m-30m膜厚0.25pmDB-1石英毛细管柱;(2)0.2mm-0.5mmX25m-30m膜厚0.25pmDB-5石英毛细管柱。柱温:(1)程序升温:始温2000C，速率100C/min，终温2800C(5min);(2)程序升温:始温2200C，速率100C/min，终温2800C(5min).检测器:氮磷检测器(NPD),检测器温:3000C。汽化室温;2800C载气(Na):流速1.9mL/min-2ml./mine5.4.1.2.1.2GC/MS质谱条件El源电子能量(70eV)、质量扫描范围10amu-700amu、扫描速度最高6000amu/s;sim数32X32(通道X离子组)GC-17A电子式流量控制器(AFC)毛细管色谱柱和宽口毛细管柱接口DB-5毛细柱，30mX0.25mm，始温1000C，速率200C/min，终温2500C(5min);检测器温度2300C，近样口温度2600C;He作载气，流量1.0ml./min，分流比(30:1)05.4.1.2.2进样将检材提取浓缩液、空白对照液和已知对照提取浓缩液0.5KL-2IL及静松灵/内标物混合标准使用液。.5pL-v2F}L，按上述条件分别注人色谱仪及气质联用仪中，每个试样进样3次。5.4.1.2.3记录和计算记录各样品中内标物、静松灵标准品和可疑静松灵的保留时间及峰高和峰面积值，填人GC,GC/MS内标法定性分析结果表中。计算它们的保留时间平均值，并以内标物的保留时间为1，计算静松灵的相对保留时间。计算静松灵的相对回收率。 GA/T597-2006相对回收率(%)二(添加后经提取的静松灵/内标物的峰高及峰面积比的均值)/(添加量的静松灵/内标物混合标准液的峰高及峰面积比的均值)X1005.4.2定f分析5.4.2.1取样准确称取或量取各种检材(呕吐物、胃内容、搅碎的肝等脏器组织1g，尿、血液、可疑针剂等1mL)两份。按其中静松灵含量的多少，用微量注射器准确加人内标物标准使用液2pL--20pL(SKF,zsA2pg-20Vg),混匀。另取相应的空白检材两份，用微量注射器准确加人静松灵/内标物混合标准使用液4pL-40pL(静松灵2pg-20pg9SKFszsn2pg-20pg)，混匀。5.4.2.2提取根据不同检材的特点，分别选用5.4.1.1.1利5.4.1.1.2项中所述方法进行操作。5.4.2.3测定按5.4.1.2项中所述操作进行。5.4.2.4记录与计算5.4.2.4.1记录检材及空白添加标准品中静松灵及内标物峰高或峰面积值填人GC定量分析记录表中，并计算出检材中静松灵及内标物的平均峰高或峰面积。5.4.2.4.2计算相对校正因子了=[添加于空白检材中静松灵进样量(拜9)x内标物峰高或峰面积平均值」/[添加于空白检材中内标物进样量(pg)X静松灵峰高或峰面积平均值〕5.4.2.4.3计算检材中静松灵含fW(mg/100g或100mL)W=[fx检材中静松灵峰高或峰面积平均值X内标物添加量(pg)X100]/[检材中内标物峰高或www.17jzw.c峰面积平均值X检材量(9或mL)X100]5.4.2.4.4计算相对相差相对相差(%)=(IA-BIX2)/(A+B)X100式中:A,B为两份检材平行定量测定的数值。5.5结果评价5.5.1定性结果评价5.5.1.1气相色谱法(CG)法、气质联用法(CG/MS)在生物检材中的检出限分别为5ng/g(mL)及0.2pg/g(mL)，静松灵及其内标物的气相色谱保留值及检出极限见表1。如果添加于空白检材中的静松灵相对回收率在60%以上，检材未出现相应的静松灵色谱峰，可以认为检材中不含静松灵，阴性结果可靠。如果静松灵的相对回收率在60%以下，检材未出现相应静松灵色谱峰，原操作有误，阴性结果不可靠，应重新检验www.17bzw.c表1静松灵及其内标物的气相色谱保留值及检出极限www.17jzw.nwww.3x888.c GA/T597-20065.5.1.2气相色谱法(GO法中如果空白检材经提取后，未出现静松灵色谱峰，而检材有相应色谱峰时，说明空白检材无干扰，阳性结果说明可能有静松灵;如果空白检材中出现有静松灵相应的色谱峰，空白有干扰，即便检材有相应色谱峰，结果也不可靠，应用其他方法验证，经选择不同色谱条件(两种以上不同极性色谱柱)，均出现静松灵相应色谱峰时，方可认定静松灵及内标物的GC分析图谱见图1,(s1000000峰1睁松灵2.895min;峰2内标物(SKFszsn)4.6207min图1静松灵及内标物(SKF525,)的GC分析图谱5.5.1.3GC/MS联用技术可用来确证生物检材中的静松灵。静松灵的质谱图见图2，静松灵的特征离子:m/z146,m/z159,m/z191,m/z206，峰度比为2/1/1.2/4。采用选择离子检测方式可提高其灵敏度。2)6爪二-}103-}-1"}I-,-1I3IF"-.二1I46L_159二1718三干二二}图2静松灵的GC/MS分析图谱5.5.2定f结果评价两份检材的相对误差若不超过10%，结果按两份检材含量的平均值计算。相对误差若超过10%,需要重新进行测定。6薄层色谱法6.1原理检材中的静松灵经提取、净化、浓缩后，与添加提取的静松灵标准品，在同一薄层板上点样、展开，静松灵与显色剂作用而显现斑点。通过比较两者的R,值及显色情况，进行定性分析6.2试剂6.2.1常规试剂a)硅胶G或硅胶GF21;b)其他试剂同5.2.1. GA/T597-20066.2.2展开荆a)氯仿’环己烷，丙酮(40，40:20);b)环己烷:丙酮(40:10);c)苯，二氧六环，乙醇，浓氨水(50，40，10，1),62.3改良碘化秘钾显色荆次硝酸秘200mg,碘化钾5g,碘2g、浓盐酸1mL、冰醋酸ImL同于500mL烧杯中搅拌，混匀后加水至250mL再混匀。6.3仪器a)电动振荡器;b)离心机;c)恒温水浴锅;d)0.25m.-0.3mm高效硅胶G薄层板;e)层析缸;f)喷雾器6.4操作方法6.4.1提取针剂、呕吐物、胃内容、尿等检材，取0.5g(mL)-5g(mL)，不加内标物标准使用液，其他操作同5.4.1.1.2。对照检材及空白检材中也不加内标物，对照检材中添加静松灵标准使用液1叮6.4.2检测www.17jzw.co6.4.2.1点样距薄层板底部1.5cm-2.0cm处，间隔1cm-1.5cm，依次点加检材、空白检材和对照检材的提取浓缩液适量及静松灵储备液1KL-2pLa6.4.2.2展开层析缸中放入选用的展开剂，将点好试样的薄层板放人层析缸中展开，当溶剂前沿展至7cm^10cm时，取出晾干。6.4.2.3显色将展开、晾干后的薄层板置通风柜中，喷显色剂，片刻，静松灵显出桔红色斑点。6.4.2.4计算R,值R,=原点至斑点中心距离/原点至展开剂前沿的距离6.5结果评价www.17bzw.c6.5.1本法对静松灵纯品检出限为。.1pg，有较高的灵敏度，适合于微量及痕量检材的定性分析。6.52用本法进行定性分析，应选择两种以上不同极性的展开剂展开，不同展开剂条件下静松灵的R值及检测限见表2.R,值与斑点颜色均与静松灵标准品相同，且空白无干扰时，方能得出肯定结论。表2静松灵的R，与检测限一!展开剂:{展开剂:}展开剂3}项目抓仿，环己烷，丙酮苯，二氧六环，乙醇，浓氨水(40，40，20)环E(40A1i01)PM(50，40，10，1)0.600.870.1yg1y只0.1yg6.5.3如果添加在空白检材中的静松灵相对回收率在60%以上，检材未出现相应的斑点，可以认为检材中不含静松灵，阴性结果可靠。如果静松灵的相对回收率在60%以下，检材未出现静松灵相应的斑www.17jzw.ne点，属操作有误，阴性结果不可靠，应重新检验或用气相色谱及气质联用法验证。标准资料收藏家www.17bzw.cn易启标准网免费提供十万标准书籍资料下载会打字、5分钟快速自助建网站www.17jzw.com易启建站网免费提供建站平台，商业网站1年仅www.3x888.co'