药学毕业论文HPLC法测定氧氟沙星滴眼液中氧氟沙星含量(1).doc 25页

'安徽中医药大学本科毕业论文（设计）HPLC法测定氧氟沙星滴眼液中氧氟沙星含量姓名：学号：专业：药学指导老师：职称：执业药师实习单位：安徽中医药大学药学院201X年6月 安徽中医药大学药学院本科毕业生毕业论文（设计）承诺书本人按照毕业论文（设计）进度计划积极开展实验、实践研究活动，实事求是地做好实验、实践记录，所呈交的毕业论文（设计）是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中特别加以标注引用参考文献资料外，论文（设计）中所有数据均为自己研究成果，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的工作已在论文中作了明确说明并表示谢意。毕业论文（设计）作者签名：毕业论文（设计）指导教师签名：日期： 目录中文摘要...............................................1英文摘要...............................................21实验材料..............................................31.1药材................................................31.2仪器................................................31.3试剂................................................42方法与结果............................................42.1色谱条件............................................42.2溶液的制备..........................................42.2.1供试液的制备......................................42.2.2对照液的制备......................................42.3系统适应性试验......................................42.3.1理论塔板数、分离度、拖尾因子........................42.3.2重复性试验........................................52.4空白对照试验........................................52.5线性范围考察试验....................................62.6精密度试验..........................................72.7供试液稳定性试验....................................72.8重现性试验..........................................82.9加样回收率试验......................................82.10样品含量测定.......................................93讨论与结论...........................................103.1检测波长的确定.....................................103.2pH的影响..........................................103.3柱温影响...........................................10 3.4提取方法筛选.......................................103.5结果...............................................11参考文献..............................................12致谢..................................................13综述..................................................14 中文摘要目的：建立氧氟沙星滴眼液中氧氟沙星含量的高效液相色谱测定方法。方法：高效液相色谱法，使用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（5μm，250×4.6mm）；以醋酸铵高氯酸钠溶液-乙腈（85:15）为流动相；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量：10μl；检测波长为293nm。结果：氧氟沙星在0.030~0.150mg/ml范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系，线性回归方程为Y=502505X+2.7333(r=0.9998)；回收率为99.78%，相对标准偏差（RSD）为0.73%（n=9）。结论：本方法灵敏、准确、专属性强，可用于测定氧氟沙星滴眼液中氧氟沙星的含量。关键词：氧氟沙星；HPLC；含量测定；方法学研究-20- ABSTRACTObjective:ToestablishaHPLCmethodforthecontentdeterminationofOfloxacininOfloxacineyedrops.Methods:HPLCmethod,thechromatographiccolumnwasHypersilC18(5μm，250×4.6mm）;themobilephaseconsistedofammoniumacetateandsodiumperchloratesolution(Dissolve7.0gofsodiumperchloratemonohydrateand4.0gofammoniumacetatein1300mlofwater,adjustthepHto2.5withphosphoricacid)-acetonitrile(240mlofacetonitrile)(85:15);theflowratewas1.0ml/min,whilethecolumntemperaturewassettingat30℃,anddetectingwavelengthat293nm.Results:Thelinearrangeswas0.030~0.150mg/mlforOfloxacin,therecoverywas99.78%,RSDwas0.73%(n=9).Conclusion:Themethodwassensitive,accurateandhighspecificforcontentdeterminationofOfloxacininOfloxacineyedrops.Keywords：Ofloxacin；HPLC；Determinationofcontent；Methodologicalresearch-20- HPLC法测定氧氟沙星滴眼液中氧氟沙星的含量眼科疾病是一种常见病、多发病，在世界范围内的发病率较高，近年来，其发病率呈逐年上升的趋势。据世界卫生组织统计，世界范围内视力受损的人数约为2.85亿，发展中国家的视力受损者人数约占全世界的90％，而80%的视力损害是可以避免或治愈的；儿童和老人是眼科疾病疾病的高发年龄段。氧氟沙星为第三代氟喹诺酮类合成抗菌药，对由细菌引起的多种感染有高度的抗菌活性。其滴眼液适用于治疗细菌性结膜炎、角膜炎、角膜溃疡、泪囊炎、术后感染等外眼感染[1]。氧氟沙星通过抑制细菌DNA螺旋酶的活性，导致酶的切割和连接功能受阻，阻止DNA复制，从而起到抗菌作用[2]。研究其含量测定方法学，有助于控制药品质量，提升药品品质，保障用药安全。目前氧氟沙星的浓度测定方法主要有微生物法、高效液相色谱法(HPLC)、紫外检测法、HPLC荧光检测法、高效毛细管电泳法（HPCE）和微柱液相色谱法（μ-LC）等[2-6]。本文选择采用HPLC法测定氧氟沙星滴眼液中氧氟沙星的含量。1.试药和仪器1.1试药氧氟沙星滴眼液（规格5ml：15mg；批号：110801、110802、110803）：安徽示康药业有限公司生产。氧氟沙星对照品（130454-201102）：中国药品生物制品检定所提供。1.2仪器TU-1221型紫外分光光度计（北京通用科学仪器有限公司）;LC-10ATvp型输液泵（日本岛津公司）；SPD-10Avp型检测器（日本岛津公司）；JS-3050色谱工作站（大连江申分离科学技术公司）；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（5μm，250×4.6mm）-20- （大连依利特分析仪器有限公司）；pHS25型酸度计（上海精科雷磁仪器厂）；AG135电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）;KQ2200E医用超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）。1.3试剂所用水为双蒸水，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：HypersilC18（5μm，250×4.6mm）；流动相：以醋酸铵高氯酸钠溶液（取醋酸铵4.0g和高氯酸钠7.0g，加水1300ml使溶解，用磷酸调节pH至2.5）-乙腈（85:15）为流动相；体积流量：1ml/min；柱温：30℃；检测波长：293nm。2.2溶液的制备2.2.1供试液制备：精密量取供试品4ml（约相当于氧氟沙星12mg），置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸稀释成120μg/ml，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。作为供试液。2.2.2对照液的制备：精密称取氧氟沙星对照品12.10mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。作为对照品溶液。试验操作方法：按《中国药典》（2010年版二部）方法调试好高效液相色谱仪，设置流速为1.0ml/min，检测波长为293nm，柱温为30℃，待基线平稳后进样，进样量为10μl，并记录色谱图。对照品与供试品HPLC图谱如下：图1：氧氟沙星对照品HPLC谱图图2：供试液（批号110801）HPLC谱图2.3系统适应性试验2.3.1理论塔板、分离度、拖尾因子-20- 按上述HPLC条件，供试品在系统中的理论塔板数按氧氟沙星峰计算为4510，氧氟沙星峰同相邻峰的分离度为2.113，拖尾因子为0.980。符合药典要求。如图3所示。图3：系统适应性试验HPLC图谱2.3.2重复性试验精密称取氧氟沙星对照品12mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶解并稀释至刻度，用0.45μm微孔滤膜过滤，作为供试液，备用。调试高相液相色谱仪，待基线平稳后进样10μl，连续进样5次，并记录色谱图。5次测定结果见表1。表1：重复性试验结果进样次数12345峰面积5888978459183549592019135897266458768127RSD(%)0.32由实验结果可知，重复进样5次，RSD（%）为0.32，表明重复性试验良好。2.4空白对照试验精密量取氧氟沙星滴眼液辅料2ml（约相当于氧氟沙星6mg），置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸制成浓度相当于氧氟沙星0.12mg/ml的溶液，按上述方法进行试验，并记录色谱图。结果表明，辅料对实验结果无干扰。-20- 图4：空白辅料HPLC色谱图2.5线性范围考察精密称取氧氟沙星对照品15.12mg，置于50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶解并稀释至30.24μg/ml，精密移取此液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml分别置于10ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸稀释至刻度，得到30.24μg/ml、60.48μg/ml、90.72μg/ml、120.96μg/ml、151.20μg/ml五梯度溶液，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，备用。测定方法：取上述五溶液各10μl，进样，并分别记录色谱图；每种浓度重复进样3次。对最终结果进行处理，见表2。表2：氧氟沙星浓度（μg/ml）与峰面积（A）线性相关性浓度（ug/ml）30.2460.4890.72120.96151.20峰面积11495790429915807448737115983161474789518峰面积21522227430444549456668236088909776111371峰面积31504530330090607451359106018121375226516平均值1507516030150321452254816030061475375802RSD(%)0.73回归方程Y=498517X-0.0004r=0.9998-20- 图5：氧氟沙星滴眼液线性试验从试验结果可知，本试验氧氟沙星在浓度为0.030mg/ml~0.150mg/ml范围内进样10μl，线性关系良好，r为0.9998（n=5）。2.6精密度试验精密吸取氧氟沙星滴眼液2ml（约相当于氧氟沙星6mg），至50ml容量瓶中，加0.1mol/L盐酸稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。调试高效液相色谱仪，待基线平稳后进样10μl，连续进样6次，并记录色谱图。6次测定结果见表3。表3：精密度试验结果进样次数123456峰面积580302855827981157996993581255425836269058502654RSD(%)0.28由试验结果可知，样品重复进样6次，RSD(%)为0.28，表明精密度试验良好。2.7供试液的稳定性试验精密量取氧氟沙星滴眼液2ml（约相当于氧氟沙星6mg），置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸稀释至刻度，用0.45nm微孔滤膜过滤，取续滤液，备用。取上述溶液10μ-20- l，进样，记录色谱图；并于0、1、2、4、8、12、24小时重复进样一次，共7次，考察样品的稳定情况，见表4。表4：稳定性试验结果时间（h）012481224峰面积58030362583089335798684359125632584529405849364858503762RSD（%）0.65结果发现，在24小时内，本品的有关物质未见明显增多，说明供试液稳定。2.8重现性试验精密量取氧氟沙星供试品2ml（约相当于氧氟沙星6mg），置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶解并稀释至刻度，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试液，备用。调试高效液相色谱仪，待基线平稳后进样10μl，连续进样5次，并记录色谱图。另精密称取氧氟沙星对照品6mg，同法制得氧氟沙星对照品溶液，调试高效液相色谱仪，待基线平稳后进样10μl，并记录色谱图。5次测定结果见表5。表5：重现性试验结果进样次数12345峰面积5803028559763371609124805872554259362690RSD(%)0.82由实验结果可知，重复进样5次，RSD（%）为0.82，表明重现性试验良好。2.9加样回收率试验精密称取氧氟沙星对照品约12mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为对照品溶液；再按照氧氟沙星滴眼液处方量的80%、100%、120%分别称取氧氟沙星原料，分别加入处方量的辅料，各3次，配置氧氟沙星滴眼液100ml，取上述制备液各4ml，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试液。取供试品溶液和对照品溶液各10μl分别注入高效液相色谱仪，依法操作，分别记录色谱图，按外标法以峰面积计算其回收率。结果见表6。-20- 表6：样品回收率试验结果比例相当于4ml的量（mg）峰面积回收量(mg)回收率(%)平均(%)RSD(%)80%19.65480127939.71100.6599.780.7329.974948729110.01100.4139.92487845249.8799.49100%112.286091348012.32100.35212.135976311712.0999.67312.306021516612.1899.04120%114.487193302914.55100.50214.357036441914.2399.20314.527081752014.3398.67从上述结果可以看出，本次试验氧氟沙星回收率为99.78%，RSD(%)为0.73。说明辅料对检测结果无影响。2.10样品的含量测定精密量取氧氟沙星滴眼液2ml（约相当于氧氟沙星6mg），至50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；另精密称取氧氟沙星对照品适量，同法制成含氧氟沙星0.12mg/ml溶液，作为对照品溶液。取供试品溶液和对照品溶液各10μl分别注入高效液相色谱仪，依法操作，分别记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。本品三批样品检验结果见表7。表7：样品含量测定结果批号110801110802110803含量（%）100.1100.699.4-20- 根据三批样品的检验结果，将本品的含量限度订为：含氧氟沙星（C18H20FN3O4）应为标示量的90.0%~110.0%。3结果与讨论3.1最大波长的确定最佳波长的选择：取氧氟沙星适量，加上述流动相配制成浓度为6μg/ml供试品液，照紫外可见分光光度法（《中国药典》2010年版二部附录IVA）测定，从紫外吸收图可以看出，本品的最大吸收波长为293nm，因此选择293nm为检测波长。图6：最佳波长紫外图谱3.2pH的影响缓冲液的pH过高将缩短保留时间,过低又会对色谱柱有较大的损害。因此，在兼顾分离效果和保护色谱柱的同时，将缓冲液的pH定位为2.5。3.3柱温影响柱温过高过低都会对样品的色谱行为产生影响。温度过高会烧坏色谱柱；温度过低，影响氧氟沙星分离效果。本次实验比较了25℃、30℃、40℃三个不同温度下氧氟沙星滴眼液中氧氟沙星峰同杂质峰的分离程度，结果在30℃的温度下，氧氟沙星分离效果最好。3.4提取方法筛选-20- 本实验对供试品溶液的制备方法进行了比较，比较了水、15%甲醇、50%甲醇作为提取溶媒，结果采用15%甲醇作为提取溶媒效果最好。考察了超声处理30、45、60min，结果所得溶液中氧氟沙星的量相似，故选择超声提取时间为30min。3.5结果本实验采用HPLC法测定，专属性强，能快速准确地测定氧氟沙星滴眼液中氧氟沙星的含量，可作为该品的质量控制标准。-20- 参考文献[1]王乃平主编.药理学[M].上海:上海科学技术出版社,2006,8:284.[2]贺延新,慎金宏.氟喹诺酮类抗菌药的合理应用[J].淮海医药,2008,3,26(2):162-163.[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].二部.北京:中国医药科技出版社,2010:821-822.[4]李金祥,徐天凤,等.微柱液相色谱法测定氧氟沙星滴眼液中氧氟沙星的含量[J].辽宁师范大学学报(自然科学版),2008,31(4):463-465.[5]曾祥林,梁佳,等.HPCE法测定氧氟沙星滴眼液的含量[J].中国药师,2009,12(11):1582-1583.[6]段静波.高效液相色谱法测定氧氟沙星的含量[J].牡丹江医学院报,2009,30(5):91-93.-20- 致谢此次毕业论文能够得以顺利完成，并非我一人之功劳，是所有指导过我的老师，帮助过我的同学和一直关心支持着我的家人对我的教诲、帮助和鼓励的结果。我要在这里对他们表示深深的谢意！首先，我要感谢我的指导老师——老师，老师虽然平日里工作繁多，但在我做毕业设计的每个阶段，从实习落实到查阅资料，设计草案的确定和修改，中期检查，后期订正等整个过程中都给予了我悉心的指导，并纠正论文写作过程中出现的各种错误。除了敬佩的专业水平外，他严谨的治学态度和不断创新的科研精神也是我永远学习的榜样，并将积极影响我今后的学习和工作。可以说没有您的悉心指导就没有这篇论文的顺利完成。其次感谢总经理和各位师兄师姐，感谢他们在公司实习期间对我的指导和亲手示范，论文的顺利完稿也有你们的功劳。然后感谢老师和老师，在实习的安排和落实方面，得益于她们无私帮助。以及所有教授过我课程的安徽中医学院的老师们，感谢他们两年来对我的大力栽培。再者感谢我的父母，没有你们，就没有我的今天，你们的支持与鼓励，永远是支撑我前进的最大动力。最后感谢身边所有的朋友与同学，谢谢你们两年来的关照与宽容，与你们一起走过的大学时代，将会是我一生最珍贵的回忆。-20- 综述：喹诺酮类抗菌药氧氟沙星研究进展摘要：氧氟沙星（Ofloxacin）是日本第一制药株式会社1985年开发上市的第二代喹诺酮类广谱合成抗菌药，用于治疗细菌引起的多种感染。具有抗菌活性强，有广谱、高效、易透过细胞膜及毒副反应小等优点，已在日、美、欧洲等许多国家和地区上市，1992年在我国获准上市。目前，氧氟沙星各种剂型不断出现，临床应用范围有所扩大；对氧氟沙星发展状况进行研究，有助于了解国内外氧氟沙星生产应用状况，提高医药企业竞争力。关键词:氧氟沙星；抗菌药；喹诺酮；进展Abstract:Ofloxacin,consideredtobeasecond-generationfluoroquinolonebroad-spectrumsyntheticantibacterialagents,inventedbytheDaiichiPharmaceuticalCo.,Ltdin1985.withitsoutstandingtreatmentagainstinfectionsthatcausedbyavarietyofbacteria.Characterizedbystrongantibacterialactivity,bioavailability,broad-spectrum,highefficiency,easilypermeationtothecellmembraneandlowtoxicity,listedinJapan,U.S,Europeandothercountriesorregions.In1992,OfloxacingotitsapprovingformarketinginChina.Atpresent,variousOfloxacinformulationsappearcontinuously,andclinicalapplicationsexpandeditsownscoperecently;ResearchingonthedevelopmentofOfloxacinishelpfultotheunderstandingofdomesticandexternalOfloxacinproductionandapplicationconditions,andimprovingthecompetitivenessofthepharmaceuticalcompaniesaccordingly.Keywords:Ofloxacin；Antibacterialagents；Quinolone；Advance氧氟沙星为第二代喹诺酮类合成抗菌药，1985年在日本研制成功，氧氟沙星及其左旋体左氧氟沙星分别于1990年12月和1996年12月首次上市。作为第二代喹诺酮类合成抗菌药，氧氟沙星具有良好的抗革兰氏阴性菌的活性，特别是具有较宽的抗菌谱[1]-20- ；经过20多年的发展，氧氟沙星各种剂型相继出现，复方制剂以及与其他抗菌药联用在临床上获得了广泛的应用，为其赢得了较大的市场份额。虽然在发达国家临床上逐步被第三、四代喹诺酮类抗菌药取代，但在发展中国家仍然有着广阔的市场。1.氧氟沙星特点及市场状况1.1氧氟沙星化学特性图7：氧氟沙星结构式图8：左氧氟沙星结构式氧氟沙星（Ofloxacin），本品为白色或微黄色结晶性粉末；无臭、味苦；遇光渐变色。本品在氯仿中略溶，在甲醇中微溶，在冰醋酸中易溶，在稀酸及0.1mol/L氢氧化钠溶液中略溶。盐酸氧氟沙星主要成分为氧氟沙星。其化学名为：(S)-(-)-9-氟-2，3-二氢-3-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-7-氧代-7H-吡啶并[1,2,3-de]-[1,4]苯并噁嗪-6-羧酸半水合物。分子式：C18H20FN3O4·1/2H2O，分子量：370.38[1]。1.2药理作用：氧氟沙星口服吸收迅速完全，胆汁中的浓度时血药浓度的7倍。突出特点是在脑脊液中浓度高。尿中药物浓度在服药48小时后仍维持在杀菌水平，体内抗菌活性约为诺氟沙星的3-5倍。对革兰阳性菌作用比诺氟沙星强；对革兰阴性菌中肠杆菌科细菌的抗菌活性与诺氟沙星相似或稍高。主要用于敏感菌所致的泌尿道、呼吸道、胆道、皮肤软组织、耳鼻喉及眼部的感染；也是治疗结核病的二线药物[2]。1.3国内外市场状况据报道，美国强生公司的左氧氟沙星/氧氟沙星2006年世界市场销售额高达15.3亿美元，在全球畅销处方药排名第64位；2007年世界市场销售额高达16.45亿美元；2008年上半年为8.47亿美元。日本第一三共/参天制药公司的左氧氟沙星，2006年世界市场销售额高达10.02亿美元，在全球畅销处方药排名第105位。-20- 在1993年我国药品专利法生效前，氧氟沙星已有多家国内制药企业仿制成功，约有100多家药厂生产氧氟沙星原料药和制剂。1995年，左氧氟沙星正式进入中国市场，1997年实现国产化，2002年跃居抗感染药物第1位，从而替代环丙沙星成为喹诺酮类药中的排头兵。2007年国内共有106家制药厂向医院供应左氧氟沙星制剂，国内22城市样本医院左氧氟沙星购药金额为5.04亿元，比上年增长了13.3%，2008年上半年购药金额为2.65亿元。其中排名前4位的是：扬子江药业、第一制药（北京）有限公司、新昌制药和北京双鹤药业，这4家制药企业约占左氧氟沙星制剂总销售80%左右的份额。在2007年我国重点城市样本医院中，左氧氟沙星的购药金额为5608万元，比上年减少了0.5%；2008年上半年购药金额为2374万元[3]。随着第三、四代喹诺酮类大规模应用，氧氟沙星市场空间正被逐渐压缩，年销售额增幅略有降低，但在发展中国家氧氟沙星仿制药以及联合用药的出现，使其仍有广大市场。2.氧氟沙星合成工艺研究目前，氧氟沙星的合成路线主要有两条。路线一是由2,3,4—三氟硝基苯为起始原料,经部分水解,与氯丙酮缩合、氢化环合,再与乙氧亚甲基丙二酸二乙酯反应,然后在PPA中环化得喹诺酮酯化物,水解后再与N—甲基哌嗪缩合而得。该方法较为成熟,目前国内生产厂家都用该法,其缺点是难以选择其3—位甲基立体构型。图9：氧氟沙星合成路线一路线二是以2,3,4,5—四氟苯甲酰乙酸乙酯为原料,经与原甲酸三乙酯反应得3,3与2—氨基丙醇反应得4，再经环化成5后,经酯水解,与N—-20- 甲基哌嗪缩合而得氧氟沙星。或由2先与N—甲基哌嗪缩合后,再用类似方法制得氧氟沙星。本路线的优点在于选用不同构型的2-氨基丙醇可以控制3—位甲基的立体构型[4]。戚建军[5]等对氧氟沙星的合成工艺进行研究，证明改进后的合成路线具有收率高，成本低等特点。3.氧氟沙星剂型研究氧氟沙星主要有片剂、胶囊、注射液、乳剂、滴剂等多种剂型，规格多样，临床应用广泛。李云霞[6]等对氧氟沙星滴眼液的制备进行研究，为医院自制成方制剂做出了探索。吴畏[7]等对氧氟沙星乳剂进行研究，同甲硝唑合用制得复方乳剂。生产和临床特殊需要，在另一方面催生了新剂型，如万慧杰[8]等对氧氟沙星缓释微丸的研制进行了摸索，拓展了氧氟沙星制剂形式。秦颢[9]则对氧氟沙星凝胶剂进行研究，提出了凝胶剂的研制工艺。杨忠东[10]等结合临床需要，研制成氧氟沙星漱口液。4.氧氟沙星含量测定方法研究随着时代发展，科学技术日新月异，检测手段不断完善，仪器朝着智能化，微型化，快速检测发展，加上临床需要催生出的各种新剂型，不同剂型在生产过程中对质量控制的要求不一，不同仪器检测手段也不同。目前应用最广泛的当属高效液相色谱法测定氧氟沙星的含量，其余检测方法虽然在生产中应用较少，但某些仍然有不可替代的地位，在快速检测中发挥了重大的作用。4.1高效液相色谱法中国药典二部规定(2010年版)，各种氧氟沙星制剂（包括片剂、胶囊、眼膏剂等），在研究生产中常用的含量测定方法为高效液相色谱法。该法用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸铵高氯酸钠溶液-乙腈（85:15）为流动相；在294nm波长处检测氧氟沙星含量。该法具有高效、快速、准确性好等特点，成为测定氧氟沙星含量的首选方法，日本药典和美国药典均采用此法。宁德俄[11]等研究了HPLC法测定复方氧氟沙星滴眼液中氧氟沙星的含量，证明该法灵敏、准确、专属性强，可用于测定氧氟沙星滴眼液中氧氟沙星的含量。王国兰[12]等则建立反相高效液相色谱法测定复方氧氟沙星滴眼液中氧氟沙星的含量及有关物质，进一步丰富了高效液相色谱法的应用范围。-20- 4.2其他有效测定方法氧氟沙星是抗菌谱广、抗菌作用强、无交叉耐药性、给药方便的氟喹诺酮类抗菌剂。此类抗菌制剂含量的测定有UV法、一阶导数光谱法、系数倍率差示光谱法、非水滴定法等。荧光分析法也是测定其含量的有效方法之一。邱瑾[13]研究了氧氟沙星在乙酸—乙酸钠缓冲溶液(pH3.3)中的荧光行为，最大激发波长和发射波长分别为298nm和502nm。并建立了荧光法测定滴眼液、滴耳液中氧氟沙星的含量，在0.05～0.75mg/L范围内线性关系良好(r＝0.9994)，平均回收率大于98％。段静波[14]则创造性运用UV法，建立了氧氟沙星氯化钠半成品的含量测定方法，结果证明该方法具有简单、快捷、准确、检测时间短等优点。郑维国[15]采用标准曲线法测定氧氟沙星含量，避免了每次测定时对照品的大量使用。其他有效方法如HPCE法在氧氟沙星的含量测定中也有举足轻重的作用[16]。5.氧氟沙星临床应用研究氧氟沙星为第三代氟喹诺酮类合成抗菌药，抗菌机制为：通过抑制细菌DNA螺旋酶的活性，导致酶的切割和连接功能受阻，阻止DNA复制，从而起到抗菌作用。与第二代相比较在抗菌作用上,明显增强了对革兰阳性球菌的活性,但厌氧菌对之不敏感或耐药，广泛用于泌尿、生殖系统的感染[17]。临床上主要用于敏感菌所致的泌尿道、呼吸道、胆道、皮肤软组织、耳鼻喉及眼部的感染；也是治疗结核病的二线药物。据张胜军[18]报道，在氟喹诺酮类抗菌药中，氧氟沙星的左旋体使用频率最高，达到39.48%，联合用药占91.20%。然而，随着临床应用的广泛，不合理用药的增加，细菌的耐药性问题日益突出，严重地影响了氧氟沙星的疗效和临床应用[19]。有关氧氟沙星不良反应报道时常见诸报端，如变态反应、神经失常、肝肾功能损害等[20]。6.发展展望氧氟沙星作为第三代氟喹诺酮类合成抗菌药，在临床使用仅经历了不到20-20- 年时间，世界各地已经出现了不同菌属的耐药细菌，我国由于抗菌药物的不合理使用，细菌耐药情况尤为严重。为此，在应对细菌耐药的问题上，首先应加强临床常见病原菌对喹诺酮类药物的耐药监测，了解其耐药情况，指导临床合理用药，防止耐药菌株的传播。其次，应加强细菌对氧氟沙星耐药研究，目前研制成功的左旋体左氧氟沙星，抗菌效果强于氧氟沙星；总之，在临床应用时，应严格掌握氧氟沙星的适应证，根据病人情况、肝肾功能、抗菌谱等来确定剂量及疗程，注意相互配伍禁忌，必要时监测血药浓度，充分发挥其广谱、高效低毒的优势，减少耐药性、降低不良反应，提高患者的治疗效果[19]。尽管氧氟沙星前景比较乐观，但其耐药菌株依然是不可忽视的问题此外，氟喹诺酮类药物的不良反应也比较常见，对临床治疗也造成一定的困扰。在不久的将来，随着第四代氟喹诺酮类药物的大规模应用，氧氟沙星的临床应用将会被逐步淘汰。-20- 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