DB34T1359-2011饲料中阿维霉素的测定-高效液相色谱法.pdf 7页

'ICS65.120B46DB34安徽省地方标准DB34/T1359—2011饲料中阿维霉素的测定-高效液相色谱法Determinationofavilamycininfeed-Highefficiencyliquidchromatographymethod文稿版次选择2011-03-16发布2011-04-16实施安徽省质量技术监督局发布 DB34/T1359—2011前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准主要起草人：蔡一杰、明文庆、张莉、刘红云、吴蕾、丁作坤、陶小平、钱志平、吴昊。I DB34/T1359—2011饲料中阿维霉素的测定-高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中阿维霉素检验的高效液相色谱测定方法。本标准适用于饲料中阿维霉素的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3试样制备按GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，粉碎至过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。4原理饲料中的阿维霉素用乙腈-水(1:1)超声提取，以乙腈-0.2％磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值至3.0)(51:49)为流动相，高效液相色谱仪进行分析，外标法定量。5试剂和溶液5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682二级水的规定。5.2阿维霉素标准品：纯度≥90％。5.3标准储备液：准确称取阿维霉素对照品适量,用乙腈-0.2％磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值至3.0)(51:49)的溶液配制成0.5mg/mL的标准储备液，储存4℃冰箱备用，有效期7天。5.4标准工作溶液：精密量取适量阿维菌素储备液，用乙腈-0.2％磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值至3.0)(51:49)稀释成0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0µg/mL的标准工作液，储存4℃冰箱备用，有效期7天。5.5乙腈：色谱纯5.6流动相：乙腈-0.2％磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值至3.0)(51:49)。5.7磷酸二氢铵。5.8微孔滤膜：孔径0.45μm，有机相。6仪器设备1 DB34/T1359—20116.1高效液相色谱仪（配紫外检测器）。6.2饲料粉碎机。6.3旋转蒸发仪。6.4分析天平，感量0.0001g，0.001g。6.5超声波清洗机。6.6梨形瓶，50mL。7测定步骤7.1试样提取称取粉碎后的饲料样品2g（精确至0.001g），置于200mL锥形瓶中，加入乙腈-水(1:1)50mL超声提取30min，过滤。滤液于50℃水浴中旋转减压蒸发至干，加10ml流动相（5.6）溶解，过0.45μm滤膜过滤后供高效液相色谱仪测定。7.2色谱条件色谱柱：C18(4.6×150mm，5μm)或相当的色谱柱。检测波长：214nm。流动相：乙腈-0.2％磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值至3.0)(51:49)。流速：1.0mL/min。7.3上机测定取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。8结果计算按照下式计算试样中药物的含量：A×Cs×V×1000X=.................................(1)As×m×1000式中：X——试样中药物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A——试样溶液对应的色谱峰面积响应值；As——标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V——定容体积，单位为毫升（mL）；Cs——标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；m——试样质量，单位为克（g）。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度9.1灵敏度本方法的检测限为0.5mg/kg。2 DB34/T1359—20119.2准确度本方法添加浓度为1.0mg/kg时，回收率为80％～120％。9.3精密度本方法的批内变异系数CV≤10％，批间变异系数CV≤15％。_________________________________3'