GBT28107-2011枣大球蚧检疫鉴定方法.pdf 14页

'ICS65．020．01B16a宫中华人民共和国国家标准GB／T28107—2011枣大球蚧检疫鉴定方法DetectionandidentificationofEulecaniumgigantea(Shinji)2011—12—30发布2012-06-01实施宰瞀嬲鬻黼警襻瞥星发布中国国家标准化管理委员会“”。 标准分享网www.bzfxw.com免费下载削昌GB／T28107—2011本标准按照GB／T1．1—2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAc／TcZ713提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山西出入境检验检疫局、山西大学、中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。本标准主要起草人：李惠萍、丁三寅、连庚寅、谢映平、黄国明、陈乃中、党海燕、魏春艳、吴海军、牛春敬、田丽红、赵悠悠。 标准分享网www.bzfxw.com免费下载1范围枣大球蚧检疫鉴定方法GB／T28107—2011本标准规定了枣大球蚧EEulecaniumgigantea(Shinji)]的检疫鉴定以雌成虫的形态学特征作为依据，明确了现场检查、标本制备、镜检鉴定、样品保存的方法。本标准适用于枣大球蚧的检疫鉴定。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2．1尾裂(臀裂)analcleft在蚧科中，蚧虫的肛门位置向内凹入，虫体后面出现一条狭缝，被称为尾裂或臀裂。2．2肛板analplate在尾裂背底，肛门之上盖有两块三角形的硬化板，称为舡板。2．3肛环analring肛门凹入位于一筒状结构之内，后者叫肛筒(analtube)，在肛筒的外端有一硬化环。由两个月牙形的环组成，是肛门的开口，称为肛环。肛环上有一至几列环孔，并常有肛环毛6根--8根。2．4气门路stigmaticgroove胸气门到体缘有成列的盘腺，形成气门路。2．5气门洼stigmaticdepression气门路在体缘一端的体壁有不同程度的凹陷，称为气门洼。2．6气门刺stigmaticspine在气门路体缘一端即气门洼处的刺称为气门刺。2．7盘腺discalpores一类孔状的腺体结构，分泌蜡质物覆盖于虫体表面。蚧科中的特征盘腺有五格腺、多格腺和盘状孔。五格腺(quinquelocularpores)圆形，中心有一格，周围围绕五格。多格腺(multilocularpores)中心具一格，周围围绕多格(五格以上)。盘状孔(preopercularpores)圆形，不分格，仅为具有颗粒状表面的膜状结构。2．8管腺tubularducts一类柱形或近柱形的腺体结构，分泌蜡丝形成虫体覆盖物或卵囊。蚧科中的特征管腺为瓶状腺。】 标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T28107—2011瓶状腺(invaginatedtubularduct)，呈柱形管筒，管口内端膨大有硬化框，因大小差异又分为大瓶状腺和小瓶状腺。3枣大球蚧基本信息枣大球蚧(E．gigantea)隶属于同翅目(Homoptera)，蚧科(Coccidae)，大球蚧属(EulecaniumCockerell)。枣大球蚧其他信息参见附录A。4方法原理根据枣大球蚧的寄生危害特点，检查其寄主植物，获取不同发育期的虫体，将若虫饲养至成虫，制成显微玻片进行观察，依据成虫的显微形态特征对种类进行鉴定。5仪器、用具和试剂5．1仪器生物显微镜、体视显微镜、水浴锅。5．2用具放大镜、剪刀、小刀、镊子、昆虫解剖针、小毛笔、养虫瓶、铝盒、纸袋、吸水纸、1．5mL离心管、6cm表面皿、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、解剖刀、酒精灯、滤纸、标签。5．3试剂70％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、10％氢氧化钠(或10％氢氧化钾)溶液、冰醋酸、酸乙醇溶液(冰醋酸：95％乙醇：蒸馏水体积比为2：9；9)、酸性品红(酸性品红95％乙醇饱和溶液)、二甲苯、石炭酸一二甲苯溶液(石炭酸：二甲苯体积比为1：2)、中性树胶、乙醇一甘油保存液(70％乙醇：甘油的体积比为50：1)。6现场检查6．1叶片检查用放大镜检查寄主植物叶片正面、反面及叶脉两侧。如有黄色、淡黄色或黄褐色的固着虫体，体被白色蜡壳、蜡片或蜡块，则将带虫叶片取下，放人养虫瓶。6．2枝条检查检查枝条、分叉、裂缝、芽腋及其附近，重点检查枝的向地一侧：——如有灰褐色并被龟裂状蜡层的虫体，或被一层污白色毛玻璃状蜡壳虫体，则连寄主采下，放入养虫瓶或用吸水纸包被，再放入纸袋内，置于铝盒中；——如有红褐色至紫褐色半球形或近球形的虫体，或体被灰白色薄蜡粉；或为亮褐色至亮黑褐色的虫体干尸，则均连同寄主采下，用吸水纸包被，再放人纸袋内，置于铝盒中。6．3将现场所取虫样标本送实验室鉴定。2 标准分享网www.bzfxw.com免费下载7实验室检疫鉴定GB／T28107—20117．1症状检查检查送检样品(参见6．1和6．2)，将虫样轻移入70％乙醇或乙醇一甘油保存液中固定保存。7．2标本制备将现场所取和实验室挑取的虫样标本按固定、加热、解剖清洗、染色、脱色、脱水、封片的步骤制成玻片标本(参见附录B)。7．3镜检鉴定将玻片标本置于生物显微镜下观察形态特征，先确定是否属于蚧科(参见c．1)，然后确定是否属于大球蚧属(参见c．2)，最后核对种的特征，并与近似种相区分(参见c．3)。8枣大球蚧鉴定特征8．1雌成虫8．1．1田间形态特征(参见图D．1)8．1．1．1产卵前的雌成虫虫体长18．8mm，宽18．0mm，高14．0mm，属于大球蚧属中个体最大者；产卵前的年轻雌成虫体鼓起近半球形，头半部高突，后半部略狭而斜；体黑红褐色至紫褐色，或有些发绿红褐色，体背有暗红色或红褐色花斑组成的4个纵列，各斑块问不连续。靠近背中央的2列花斑较小，呈明显的3对～4对，外侧2纵列斑块常由6块组成。体被灰白色绒毛状薄蜡粉，蜡粉覆盖虫体不严，光滑的体壁和花纹闪光清晰可见。8．1．1．2雌成虫虫体干尸虫体干尸固着树枝很紧，可持续1年甚至更长时间不易脱落，用手捏干尸，可感到体壁薄，易将顶部捏碎。8．1．2显微形态特征(参见图E．1)8．1．2．1体腹面腹面可见触角1对，7节，以第3节最长，第4节突然变细。足3对，均小，腿节小于气门盘直径，胫节的长为跗节的1．3倍，跗、爪冠毛均细尖。胸气门2对，每条气门路上五格腺20个～25个，呈不规则1列。多格腺分布于腹面中区，尤以腹部为密集。大瓶状腺在腹面亚缘区成密集带状分布，小瓶状腺见于胸部中区。8．1．2．2体缘体缘具缘刺，尖锥形。气门洼不显，气门刺与缘刺近似，略小，相互靠近。8．1．2．3体背面肛板三角形2块，合成正方形，其后角外缘有长、短毛各2根。肛周体壁幼时不硬化，老熟期硬化3 标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T28107—2011无网纹。肛环宽，有内、外列孔及环毛8根。腺体在背面盘状孔丰富，有少量小瓶状腺。背刺散布。8．2雄成虫(参见图D．2和图F．6)8．2．1虫体体长2．35mm～3．50mm，翅展4．80mm～5．20mm。头部黑褐色，前胸、腹部、触角和足为黄色。8．2．2头部触角丝状，lo节，长约1．50Yl[3m。单眼5对，背、腹眼各1对，侧眼在头之两侧各3个，呈弧形排列，环绕于头部触角周缘。8．2．3胸部中胸气门和后胸气门各1对，周围均无腺体分布。前翅1对，半透明。后翅退化为平衡棒，呈叶片状。胸足3对，胫节末端有1长距。爪稍弯曲，末端有小齿。爪冠毛和跗冠毛各1对，跗冠毛粗，爪冠毛较细，末端均膨大呈球形。8．2．4腹部腹部8节，具刚毛，在腹面和背面稀疏分布，腹部末端数量最多，约8根，簇生。第8节有一尾突。阳茎鞘长度约为体长之半，基部上方两侧各有一个尾槽，尾槽内壁具多格腺和粗长刚毛2根，尾槽内各生出一根白色细长的蜡丝，长度约为体长的3倍。8．3卵长圆形，初产时为白色，渐变粉红色。卵在体下常被白色细蜡丝搅裹成块，不易散开。8．41龄若虫8．4．1田间形态特征(参见图D．3)固定后若虫扁平，草履形，体被白色透明蜡质，成平滑的薄蜡壳，其背中部有一条隆线。透过蜡壳可见体色淡黄，眼色淡红。8．4．2显微形态特征(参见图F．1)8．4．2．1虫体椭圆形，体长0．60mm～0．72mm，宽0．30mm～o．50mm。8．4．2．2触角6节；足3对，发达，具跗冠毛和爪冠毛各1对，均细长，末端明显膨大。8．4．2．3体缘刺细尖，稀疏分布，腹部之缘刺略长于头部的，最末1根最长，约70pm。8．4．2．4胸气门2对，直筒状，气门刺各3根，锥状等大；气门路上有五格腺4个～5个，排成l列。8．4．2．5肛门位于虫体背面腹部末端，臀裂浅而宽，肛筒伸至臀裂之间且明显外露。肛板表面具网纹。肛板端毛3根，中央1条极长，约380pm。肛环毛6根，背面2根最长，约300rim。8．52龄若虫8．5．1田间形态特征(参见图D．3和图D．4)8．5．1．1发育前期虫体体被白色半透明介壳，边缘有长方形白色蜡片12对，头部前端为1块，前、后胸气门处各有一条白色蜡丝覆盖于长方形蜡片之下，背中隆线加宽，背部有前后两个环状壳点(蜡块)，臀末两根白色蜡丝部分露出介壳。4 标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T28107—20118．5．1．2发育中期虫体背部有前、中、后3个环状壳点。8．5．1．3越冬后，2龄雌若虫体被一层灰白色半透明星龟裂状的蜡层，蜡层外附少量白色蜡丝，体缘的缘刺被蜡层覆盖呈白色。8．5．2显微形态特征(参见图F．2)虫体椭圆形，黄褐至栗褐色，体长1头部具单眼1对。触角为7节。足发达，腿节长度大于气门盘直径。8．5．2．4体缘刺密集1列，锥状，粗大，亚缘刺1列，细小，刚毛状。胸气门扩大呈喇叭状，各气门路上五格腺到多格腺已多至10个～15个，呈不规则排列，气门刺与缘刺已无大区别。8．5．2．5虫体背面散布锥状小刺。肛筒加长，疏松网状，肛板的长端毛消失，肛板端毛5根，肛环毛6根。管状腺体在虫体腹面成宽亚缘带，在腹部中央零散分布。8．63龄若虫(参见图F．3)虫体背、腹两面管状腺数量增多，在亚缘区成带状排列，在背中和缘区散布。8．7蛹8．7．1田问形态特征(参见图D．4)越冬后雄蛹被一层茧壳，长椭圆形，不太突，毛玻璃状半透明，背面有圆形、直角形等蜡块，茧壳上以缝分成几小块，雄茧边缘有成列的短细蜡丝。8．7．2显微形态特征(参见圈F．4和图F．5)8．7．2．1雄预蛹体近梭形，黄褐色。体长1．20mm～1．80iTlm，宽0．40mm～o．60mm，各器官和附肢发育不完全，具有触角、足、翅芽的雏形。8．7．2．2雄蛹体色深褐，长椭圆形，离蛹。体长1．70mm～2．00mm，宽0．50mm～o．70mm。无眼。触角10节。翅芽半透明，宽度和厚度均增加，已达中足。胸部背板骨化明显。腹部分节明显，可见8节，密布有微刺毛，腹部体缘具三角锥状刚毛，腹部末端数量最多。交配器钝圆锥形，表面光滑，基部有4根～6根微型刚毛，在末端刚毛密集分布，约18根～20根。9结果判定以雌成虫鉴定特征为主要依据，其余虫态的形态特征可作参考，符合8．1描述的可鉴定为枣大球蚧(E．gigantea)。10标本和样品保存将枣大球蚧及重要的为害状标本妥善保存，各龄若虫、蛹和成虫均可用乙醇一甘油保存液保存，成虫也可制成玻片标本保存，同时记录害虫名称、来源、截获时间、地点、人员等相关信息。对检出该蚧虫的样品，要进行无害化处理。l23258 标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T28107—2011A．1寄主附录A(规范性附录)枣大球蚧其他信息国槐(SophorajaponicalL．)、刺槐(Robiniapseudo—acaciaL．)、枣(ZizyphussativaGaertn．)、酸枣(ZizyphusspinosusHu)、朴树(CeltissinensisPers．)、榔榆(UhnusparvifoliaJaeq．)、法桐(PlatanusorientalisL．)、栾树(KoelreuteriapaniculataLaxm)、臭椿(AilanthusaltissimaSwing)、香椿(CedrelasinensisA．Juss)、楝(MeliaazedarachL．)、胡桃(JuglansregiaL．)、苹果(MaluspumilaMill．)、桃(PrunuspersicaStokes)、樱花(PrunusserrulataLindl．)、板栗(CastaneamollissimaBlume)、文冠果(Xanthocerassorb帕liaBunge)、蒲公英(Taraxacumsp．)、苦菊(Chrysanthemumsp．)、甘草(GlycyrrizaUralensisFiseh．G．GlabraL．)等。A．2分布枣大球蚧原记录于日本，现已扩散到俄罗斯(远东地区)和中国的局部地区。A．3传播途径6枣大球蚧固着在植株上为害，易随寄主的调运远距离传播和扩散。 标准分享网www.bzfxw.com免费下载附录B(资料性附录)玻片标本的制作GB／T28107—2011B．1将乙醇一甘油保存液中的虫体移人装有10％氢氧化钠(或10％氢氧化钾)溶液的离心管中，如是活体标本应预先在70％乙醇溶液中固定1h～2h后，再置于前述液体中。B．2将放人标本的离心管置于40℃～50℃的水浴锅中加热，定时观察，当虫体涨满内容物近透明时移至凹玻片上，在体视显微镜下解剖，一手执解剖刀，一手执解剖针，先用解剖刀的刀尖刺人虫体的背腹交接线上，再用解剖针在刀口皮层上刮动，逐渐向前剖开皮层，成背腹两面，并在虫体的一侧稍留一段相连的部分，再用沸水将内容物冲洗掉。B．3将洗干净的虫体移人表面皿中，滴人酸乙醇中和5min，用滤纸吸掉酸乙醇。B．4再加入70％乙醇浸泡5min，吸掉乙醇，滴人酸性品红溶液，染色12h～16h。B．5用70％乙醇洗掉多余染色剂，再依次经过95％乙醇、无水乙醇，脱水各5min。B．6用滤纸吸掉乙醇，滴入石炭酸一二甲苯溶液，3rain后吸掉。B．7滴人二甲苯3min后，将虫体移人载玻片上的中性树胶中整姿后盖上盖玻片。B．8待玻片标本晾干后，即可用生物显微镜来观察各虫态的形态特征，进行鉴定。 标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T28107—2011附录c(资料性附录)蚧科、大球蚧属雌成虫的鉴定特征及枣大球蚧与近似种的区别c．1蚧科雌成虫的鉴定特征体周围有一圈缘毛或缘刺；胸气门开口至体缘之间由五格腺组成了气门路；体末有一尾裂，其底端背面有两块相对的三角形肛板。c．2大球蚧属雌成虫的鉴定特征触角6节～8节。第3节最长。足分节正常，腿节长度约和气门盘直径等长；胫、跗关节不硬化，爪、跗冠毛各2根，爪下无齿。体背有筛状孔、杯状腺；腹面有五格腺、多格腺、杯状腺和暗框孔。气门洼不显，气门刺明显或否，明显时2刺～3刺，不明显时和缘刺无区别。C．3枣大球蚧与近似种的区别皱大球蚧E．kuwanaiKanda是枣大球蚧E．gigantea的近似种，常与枣大球蚧混合发生，生活习性相近，主要区别在于皱大球蚧：——雌成虫虫体鼓起呈半球形，长5．0mm～7．omm，高4．0mm～6．0mm，略小于枣大球蚧。产卵前虫体黄褐色，光亮，具虎皮状斑纹，一条蓝黑色背中线宽而明显，从头端直延伸至肛门边。体背侧具蓝黑色斑纹，体侧下缘有锯齿状色带，又似西瓜皮花斑；——雌成虫虫体干尸，颜色暗淡，鲜艳花纹消失，体壁皱缩，木质化，用手捏捻不易碎；——显微特征肛环毛6根。 附录D(盗料性附录)枣大球蚧田闻形态特征图匿D1雌成虫固D2雄成虫囤D3叶片上1、2龄若虫围D4越冬后枝条上的虫体(雌雄分化 GB／T28107—2011附录E(资料性附录)枣大球蚧雌成虫显微形态特征图罄：+’?I蘩肛板气图E．1枣大球蚧雌成虫显微形态特征图小瓶状腺盘状孔 附录F(资料性附录)枣大球蚧各虫态显微形态特征图GB／T28107—2011图F．11龄若虫图F．22龄若虫圈F．33龄雌若虫图F．4雄预蛹图F．5雄蛹◎ GB／T2B．107—2011圉F．6雄成虫—————一'