CJT148-2001城市供水粪性链球菌的测定.pdf 8页

'CJ中华人民共和国城镇建设行业标准CJ/"r141-150-2001城市供水水质检验方法标准及编制说明和研究报告2001一07门7发布2001门2一01实施中华人民共和国建设部发布 一、城市供水水质检验方法标准Standardmethodsfortheexaminationofwaterofurbanwatersupply标准分享网www.bzfxw.com免费下载 CJ/T148-2001前言本标准由建设部标准定额研究所提出。本标准由建设部给水排水产品标准化技术委员会归口。本标准由国家城市供水水质监测网北京监测站负责起草。本标准起草人:徐欣、金红。本标准参加验证单位:上海监测站、武汉监测站、天津监测站、广州监测站、深圳监测站及顺德监测站(省级)。 中华人民共和国城镇建设行业标准城市供水粪性链球菌的测定CJ/T148一2001Urbanwatersupply-Detectionandenumerationoffecalstreptococcus1.发MY法Methodbyenrichmentinliquidmedium范围本标准规定了用发酵法测定城市供水及其水源水中的粪性链球菌。本标准适用于城市供水及其水源水中粪性链球菌的测定。2方法将水样接种于含叠氮化钠的葡萄糖液态培养基中，叠氮化钠可抑制一般革兰氏阴性细菌的生长，能在此种培养液中生长的菌体可认为是粪性链球菌推测试验阳性。取推测试验为阳性的培养液移至Pfrizer培养基上做确信试验，能在Pfrizer培养基上有棕色晕轮的棕黑色菌落生成，则表示粪性链球菌的证实试验为阳性。3试荆和材料I1叠氮化物葡萄糖液态培养基3.1.1成分(单强度)牛肉膏4.5g胰陈或聚陈巧9叠氮化钠。·29葡萄糖7.5g抓化钠7.5g蒸馏水1L3门.2制法将上述各成分于蒸馏水中加热溶解，调节pH值使其灭菌后为7.2土。1，分装于试管内，高压灭菌器121"C灭菌15min。上述各成分取2倍量为双倍强度培养基。3.2Pfrizer选择性肠球菌琼脂培养基3.2.1成分蛋白陈20.0g酵母膏5.0g3号胆盐10.0g抓化钠5.0g中华人民共和国建设部2001一07-17批标准分享网准www.bzfxw.com免费下载2001一12-01实施46 CJ/T148一2001柠檬酸钠1.0gL叶昔l.0g柠檬酸铁钱0.59叠氮化钠。.25g琼脂15.0g蒸馏水1L12.2制法将上述各成分于蒸馏水中加热溶解，调节pH值使其灭菌后为7.2士。.1，分装于试管内.121C灭菌15min4仪器4.1试管:18mmX180mm.4.2刻度吸管:1mL,10m工。4.3J恒温培养箱。4.4高压蒸气灭菌器。4.5酒精灯。4.6量筒4.7培养皿。4.a冰箱。测定步骤5.1推测试验5.1.1接种不同量的被检水样于一组叠氮化物葡萄糖液态培养基中:接种1mL或更少的水样于单倍强度的液态培养基10ml)中，接种10mL的水样于双倍强度的液态培养基10mL中，接种量的多少与数目应依水样的特性而有所变化，接种量一般为1ml,的十进倍数。51.2接种过的试管应在35C士0.5C的恒温培养箱内培养，21h士2h后检查每一支试管是否有浑浊，如果浑浊不明显，应继续培养到48h士3h后进行检查5.2确信试验经过24l:或48h培养而显示浑浊的所有的叠氮化物葡萄糖液态培养基试管要进一步做确信试验从推测试验为阳性的试管内取一些培养液，划线转移到培养皿中，其内盛有I"Irvoi选择性肠球菌琼脂培养基(3.2).培养皿在35C士。.5C倒置培养24h士2h，具有棕色晕轮的棕黑色菌落生成则显示粪性链球菌确实存在最大可能数(MPN值)的计算及记录根据确信试验的阳性管数查最可能数(MPN)表(见表1)，即可得100ml水样中的粪链球菌的最可能数凸对表中未被列人的组合，以及当试管数和稀释情况不同时，可用简单公式(1)计算:阳性试管数X100MPN1100ml二阳性试管中的水样毫升数X全部试管中的水样毫升数 CJ{T148一2001表1最可能数(MPN)表(接5份10m1水样、5份1mL水样、5份。.1mL水样时，不同阳性及阴性情况下100mL水样中细菌数的最可能数和95写可信限值)出现阳性份数每100mL95%可信限值一出，阳性份数每100mL95%可信限值水样中水样中1mL0.1mL1mL0.1mL细菌的下限上限I1。一细苗的下限上限10wmL管管最可能数{管管管最可能数000<221269780012<0.5730279800102<0.57313311930z04<0.5I1403412931002<0.5700237701014<0.5110I3411891104<0.5I10243151101116<0.515103311931206<05151146161202005<0.5131263211502017117204917130210711721702317021192212294232202z09221307925190230123283111031250300A1193214037310301112253318044500310112254013035300311144344I1704319032014434422205770032117546432809085033017546443501201000900133315024068750401175465135012010004101754652540180140041I2176353920300320041226978541600640580042022767一刁5妻24002.德膜法2.Methodbymembranefiltration范围本标准规定了用滤膜法测定城市供水中粪性链球菌。本标准适用于城市供水及其水源水中粪性链球菌的测定。2方法将水样用孔径<0.45pm的滤膜过滤，并将滤膜移至KF链球菌琼脂培养基上，于35C士。.5"C恒温箱中培养48h，如果有红色或粉红色标准分享网菌落生长，需www.bzfxw.com将菌落接种免费下载于脑心浸萃琼脂培养基上做进一步的48 CJ/T148一2001确信试验，如过氧化氢酶反应为阴性并能在45‘C脑一心浸萃琼脂培养基上生成菌落，则证实粪性链球菌的存在，其检测结果为阳性。3试剂和材料3.1xF链球菌琼脂培养基3.1.1成分3号际陈或聚陈10.0g麦芽糖20.0g乳糖1.0g醉母浸膏10.0g氯化钠5.0g叠氮化钠。49甘油磷酸钠10.0g琼脂20.0g蒸馏水1L3.1.2制法将上述成分溶解于蒸馏水中，置于沸水浴内加热，以溶解其中的琼脂，待完全溶解后再加热5min,然后冷却，温度降到50C或60C时，于100mL培养基内再加1mL的1%的氯化三苯基四氮哇的无菌水溶液(用。.22pm滤膜过滤除菌，用10%的NaCO,溶液将pH调到7.2)。培养基于45"C-50C存放，到灌人平皿之前不可超过4h，有培养基的平皿应在2C-10C保存。过30天不用，弃去。3.2脑一心浸萃液态培养基3.2.1成分幼牛脑的浸萃2009葡萄糖209牛心的浸萃2509NaCl5.0g1-i}陈10.0gNa,HP042.5g蒸馏水11.3-2.2制法将上述各成分于蒸馏水中加热溶解，调节pH值使其灭菌后为7-4,3.3脑心浸萃琼脂培养基脑一心浸萃琼脂培养基除了含有与上述脑一心浸萃液态培养基相同的成分外，再加人15.08的琼脂，灭菌后的pH值应为7.4。分装到试管中做成斜面培养基。4仪器月月.﹃.滤器月n﹃艺滤膜:孔径。.45pm和。.22pm，直径根据滤器规格而定，常用的有3.5cm和4.7cm两种。月八q﹂抽滤设备。月q无齿镊子。月﹃显微镜(10^-15倍)。月﹃其他仪器同多管发酵法。 CJ/"e148一2001测定步骤5.1推测试验5.1门水样过滤:根据水质情况决定过滤水样量.水样量以滤过一张无菌滤膜后能产生20到100个菌落为宜。滤膜经过滤后应直接转移到培养基上，避免在滤膜和培养基之间夹留着空气泡。5.1.2培养:将培养皿倒置，在35C士。.5C培养48h5.1.3计数:粪性链球菌菌落在滤膜上呈现大小不等的红色或粉红色菌落，可用一台低倍(1015倍)的双筒、广野的解剖显微镜或其他功效相同的光学器械，计数每100mL水样中的粪链球菌落数。5.2确信试验5.2.1从滤膜上挑取典型的菌落，接种到脑心浸萃琼脂培养基斜面上，在35C士。.5C培养24h到48h。如果有菌落生长，则继续以下5.2.2和5.2.3的步骤。5.2.2以接种环从脑一心浸萃琼脂培养基斜面上挑取一典型菌落到一片清洁的载玻片上，加几滴新鲜的3%过氧化氢到载玻片的涂抹菌液上，如果没有气泡发生，就显示过氧化氢酶反应为阴性，则菌落可视为粪型链球菌，则继续如下的确信过程如果有气泡发生，则过氧化氢酶反应为阳性，因此菌落不属于粪型链球菌，确信试验到此即可停止5.2.3以接种环从脑心浸萃琼脂培养基上转移一典型菌落到脑心浸萃液态培养基内，在45"C培养48h。此外，也同时转移一典型菌落培养到胆汁液态培养基中，在35"C培养3天。胆汁液态培养基由40mL无菌的10%牛胆液加人60m工无菌的脑心浸萃液态培养基中配成5.2.4转移到上述培养基后.若菌落能得到繁殖，则表示结果为阳性.证实确实存在粪性链球菌。5.3结果计数CFC"/100ml=N/VX100························⋯⋯〔2)式中:N—经证实的粪型链球菌菌落数;V-过滤的水样体积.ml标准分享网www.bzfxw.com免费下载'