DB13T 1108-2009 动物源性食品中泰乐菌素的测定 酶联免疫法.pdf 6页

'ICS67.100X16DB13J卜．﹄、．，．丬．冫pi省地方标准DB13/T1108-2009动物源性食品中泰乐菌素的测定酉每联免疫法DeterminationoftylosinresidueinanimalderivedfoodsEnzyme-linkedimmunosorbentassaymethod2009-05-27发布2009-06-11实施河北省质量技术监督局发布 DB13/T1108-2009月IJ吕本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、河北师范大学生命科学学院、河北医科大学基础医学院、河北省食品安全重点实验室。本标准主要起草人：张岩、吕品、李挥、李丛芬、刘辰魁、王丽霞、刘敬泽、范斌、周正、康素芬、周巍。标准分享网www.bzfxw.com免费下载 DB13/T1108-2009动物源性食品中泰乐菌素的测定酶联免疫法范围本标准规定了动物源性食品中泰乐菌素残留量的酶联免疫测定方法。本标准适用于动物组织中泰乐菌素残留量的测定。本部分的方法检出限:10.0¦Ìg/kg.规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法原理样本中的残留物泰乐菌素与试剂盒中微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗泰乐菌素的抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含泰乐菌素的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出残留物泰乐菌素的含量。4试剂和材料除非另有说明，在分析中均为分析纯试剂和www.bzfxw.comGB/T6682中规定的一级水。4.1泰乐菌素试剂盒：4.1.196孔板：12条X8孔（包被有偶联抗原）。4.1.2泰乐菌素标准溶液：0¦Ìg几，1.5¦Ìg/L,4.5¦Ìg几,13.5林g/L,40.5¦Ìg/L,121.5jig/L.4.1.3酶标二抗。4.1.4抗体工作液。4.1.5底物液A液4.1.6底物液B液。4.1.7终＿「卜液。4.1.820倍浓缩洗涤液。4.1.92倍浓缩复溶液。4.28%氯化钠溶液：取8.0g氯化钠加水溶解定容至100mL4.30.1M氢氧化钠一8%氯化钠溶液：称取0.4g氢氧化钠加8%氯化钠溶液溶解定容至100mLo4.40.1M盐酸溶液：量取4.巧mL浓盐酸，加水定容至500mLo4.5乙睛一0.1M盐酸溶液：量取84mL无水乙腈和16mL0.1M盐酸溶液混合均匀。4.6复溶工作液：用水将2倍浓缩复溶液按1:1体积比进行稀释，复溶工作液在4℃环境可保存一个月。4.7洗涤工作液：用水将20倍浓缩洗涤液按1:19体积比进行稀释，用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。4.8无水乙睛。4.9三氯甲烷。4.10氯化钠。 DB13/T1108-20094.11盐酸。5仪器5.1酶标仪：具450nm滤光片。5.2多道移液器：50林L^300¦ÌL05.3单道移液器：20¦ÌL-200¦ÌL和100阝L-1000¦ÌL¡ã5.4漩AN匀器。5．5低温离心机。5.6微孔过滤器：2mL，并带有孔径为。.45林m的水相微孔过滤膜。5.7旋转蒸发仪。5.8氮吹仪。5.9均质器。5.10振荡器。5.11天平：感量0.01go6分析步骤6.1提取准确称取均质样品2.0g（精确到0.01g)，置于50mL离心管中，加入8mL乙睛一0.1M盐酸溶液，振荡器振荡5min;3000r/min室温(20¡ãC-25"C）离心10min；移取2mL上清液，加入2mLO.1M氢氧化钠一8%氯化钠溶液，混匀混匀1min，加入8mL三氯甲烷萃取，振荡器振荡5min；室温(20¡ãC25¡ãC)3000：离心10min，取下层有机相至10mL玻璃试管中，于50℃一60¡ãC氮吹至干；用1mL复溶工作液溶解干燥后的残留物；取50¦ÌL用于分析。6.2测定www.bzfxw.com测定中吸取不同的试剂和样品溶液时应更换吸头。6.2.1分别吸取取50.tL泰乐菌素标准工作溶液和样品溶液到对应的微孔中，每孔再加入50卩L抗体工作液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应30min6.2.2小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤土作液（250¦ÌL/孔），充分洗涤4-5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。6.2.3每孔加入酶标二抗100林L，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应30min,取出重复洗板步骤6.2.2.6.2.4每孔加入底物液A液50阝L，再加底物液B液50林L，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37¡ãC避光环境中显色15min.6.2.5每孔加入终J一卜液50阝L，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处，测定每孔吸光度值。6.3空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。6.4监控试验每次测定均应做一个添加泰乐菌素标准的显色剂样品。7结果计算在半对数坐标纸上，以吸光度值为纵坐标，泰乐菌素标准工作溶液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。从标准工作曲线上得到试样中相应的泰乐菌素浓度后，结果按公式（1)计算：x＿cxVx1000mx1000式中标准分享网www.bzfxw.com免费下载 DB13/T1108-2009X―试样中泰乐菌素残留量，单位为微克每千克（gg/kg);c―从标准工作曲线上得到的试样中泰乐菌素浓度，单位为微克每升（¦Ìg/L);V―样品溶液的体积，单位为毫升（mL);m―样品溶液所含的试样质量，单位为克（g)o结果表示到小数点后两位。注：计算结果应扣除空白值8确证试验如被测样品中泰乐菌素残留量的值大于检出限时，应用LC-MS/MS进行确证。www.bzfxw.com www.bzfxw.com标准分享网www.bzfxw.com免费下载'