DB13T 1112-2009 食品中四种甜味剂的测定方法 高效液相色谱法.pdf 6页

'ICS67.100X，八匕、DB13土．、川户…州州J卜于．﹄︺月省地方标准DB13/T1112-2009食品中四种甜味剂的测定方法高效液相色谱法Deternninationoffoursweeteneradditivesinfood壬TPLCmethod2009-05-27发布2009-06-11实施河北省质量技术监督局发布 DB13/T1112-2009月Ij舀本标准中的附录A为资料性附录。本标准河北省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：国家环保产品质量监督检验中心、河北省食品安全重点实验室、河北师范大学生命科学学院、河北医科大学基础医学院。本标准主要起草人：李挥、张岩、庞坤、周正、康素芬、王丽霞、吕品、刘敬泽、杨小龙、张敬轩、范斌、刘东。 DB13/T1112-2009食品中四种甜味剂的测定方法高效液相色谱法范围本标准规定了食品中乙酞磺胺酸钾，糖精钠，环己基氨基磺酸钠，阿斯巴甜的测定方法。本标准适用于饮料中乙酞磺胺酸钾，糖精钠，环己基氨基磺酸钠，阿斯巴甜的测定。本方法乙酞磺胺酸钾的检出限为0.05gg/mL；糖精钠的检出限为0.05¦Ìg/mL；环己基氨基磺酸钠的检出限为2.0jig/mL；阿斯巴甜的检出限为0.05¦Ìg/mL;2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验用水规格和试验方法3原理样品中甜味剂在酸性溶液中以阴离子形式，选用含有类离子对试剂（tris)的甲醇水溶液作流动相，采用反相离子对高效液相色谱法分离，根据色谱峰的保留时间定性，根据峰高或峰面积定量。4试剂除另有规定，所有试剂均为分析纯，为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2稀氨水（(1+1):氨水加水等体积混合。4.3Tris储备液（(0.5mol几）：称取6.057g三（羟甲基）氨基甲烷溶于超纯水中定容到100mL,混合均匀。4.4乙酞磺胺酸钾，糖精钠，环己基氨基磺酸钠，阿斯巴甜标准品：纯度）99%04.5乙酞磺胺酸钾，糖精钠，环己基氨基磺酸钠，阿斯巴甜标准储备溶液：精密秤取乙酞磺胺酸钾、糖精钠各0.1000g，用超纯水溶解稀释至10mL；环己基氨基磺酸钠1.0000g，用超纯水溶解稀释至10mL；阿斯巴甜0.1000g用1:1甲醇水溶液溶解稀释至10mL；阿斯巴甜、乙酞磺胺酸钾、糖精钠浓度分别为：10.0mg/mL；环己基氨基磺酸钠浓度为：100.0mg/mL：于冰箱保存。4.6混合标准使用溶液：取一定量上述标准储备液混合，用超纯水逐级稀释，配成乙酞磺胺酸钾，糖精钠，阿斯巴甜为1.0mg/mL的混合标准使用液，环己基氨基磺酸钠浓度为10.Omg/mL的标准使用液。4.7混合标准使用系列溶液：准确吸取混合标准使用液0.00mL,0.05mL,0.10mL,0.20mL,0.40mL,0.60mL，环己基氨基磺酸钠标准使用液0.00mL,0.10mL,0.50mL,1.0mL,2.0mL,4.0mL加超纯水定容至10mL，配成标准系列。其中，乙酞磺胺酸钾、阿斯巴甜、糖精钠其浓度为0.0gg/mL,5.0¦Ìg/mL,10.0¦Ìg/mL,20.0卩g/mL,40.0卩g/mL,60.0gg/mL，环己基氨基磺酸钠浓度0.0mg八nL,0.1mg/mL,0.5mg/mL,1.0mg加L,2.0mg/mL,4.0mg/mL，置于冰箱冷藏保存。5仪器5.1高效液相色谱仪，带紫外检测器。5.2超声波清洗器。5.3离心机。 DB13/T1112-20095.4抽滤瓶。5.5微孔滤膜：0.45nmo5.6电子天平：感量0.0001g和0.01go分析步骤6.1样品处理：称取5.0g-10.0g（精确到0.01g)试样，用氨水（1+1)调pH至7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经45¦Ìm滤膜过滤，滤液作HPLC分析用。6.2测定6.2.1HPLC参考条件分析柱：C,8,4.6mmx250mm粒度5¦Ìm¡ã流动相：甲醇：5mmol/LTris缓冲溶液（pH4.5）二5:95¡ã波长：205nmo流速：1.2mL/mina柱温：25¡ãC06.2.2标准曲线：分别进样阿斯巴甜、乙酞磺胺酸钾、糖精钠和环己基氨基磺酸钠标准系列溶液各10阝L，进行HPLC分析，然后以峰面积为纵坐标，以四种甜味剂的含量为横坐标，绘制标准曲线。6.2.3试样测定：吸取6.1处理后的试样溶液10¦ÌL进行HPLC分析，测定其峰面积，从标准曲线查得测定液中四种甜味剂的含量结果计算试样中甜味剂成分的含量按下式计算：X二三xVxl000(1)mx1000式中：X一试样中甜味剂成分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg);卜由标准曲线上查得进样液中甜味剂成分的量，单位为微克每毫升(gg/mL);V一试样稀释液总体积，单位为毫升（mL);m一试样质量，单位为克（g)¡ã计算结果保留两位有效数字。精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%. DB13/T1112-2009附录A（资料性附录）四种甜味剂标准物质色谱图娜润肠角－¡¤鹅锡一八笼劝﹂器儿一切一娜翻撒公绍他1．乙酞磺胺酸钾（acesulfame-K);2．阿斯巴甜(aspartame);3．环己基氨基磺酸钠（sodiumcyclamate);4.糖精钠（sodiumsaccharina)图A.1四种甜味剂标准溶液的色谱图 '