抗生素暴露对小白菜幼苗生长及内生细菌的影响.pdf 9页

'中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn抗生素暴露对小白菜幼苗生长及内生细菌#的影响1,211,2**张昊，王盼亮，杨清香5（1.河南师范大学生命科学学院，河南新乡453007；2.河南师范大学环境学院，河南新乡453007）摘要：采用水培实验研究了不同浓度四环素、环丙沙星暴露对小白菜种子萌发和幼苗生长的影响，进一步通过微生物培养的方法探讨了抗生素暴露剂量与小白菜幼苗中抗生素抗性内生-110细菌数量之间的剂量效应关系。结果表明，4mg•L四环素暴露能促进小白菜种子萌发时-1的根伸长和芽伸长，高于4mg•L的四环素和环丙沙星暴露均抑制小白菜种子萌发，且暴露剂量越高抑制作用越明显。在幼苗生长阶段，两种抗生素暴露下小白菜幼苗的根长和株高均呈现随着暴露剂量增加而抑制作用加强的趋势。同时，抗生素暴露明显提高了小白菜幼苗中耐药内生细菌的比例，且该比例随着抗生素暴露剂量的增加显著上升。15关键词：抗生素；蔬菜；抗生素抗性内生细菌；生态毒性中图分类号：X171EffectsofantibioticsexposureongrowthandendophyticbacteriaofChinesecabbageseedlings1,211,220ZHANGHao,WANGPanliang,YANGQingxiang(1.CollegeofLifeScience,HenanNormalUniversity,Xinxiang,Henan453007;2.SchoolofEnvironment,HenanNormalUniversity,Xinxiang,Henan453007)Abstract:TheeffectsofChinesecabbageseedgerminationandseedlinggrowthundertheexposureoftetracyclineandciprofloxacinwereperformedbyhydroponicway.Meanwhile,thedose-effect25relationshipsbetweentheconcentrationsofantibioticsandthenumbersofantibioticresistanceeEffectsofAntibioticsexposureongrowthandendophyticbacteriaofChinesecabbageseedlingsndophyticbacteriaofChinesecabbageseedlingwereevaluatedthroughmicrobialcultivationmethod.Theresultsshowedthatdifferentconcentrationsoftetracyclineandciprofloxacinhaveinhibitoryeffectsonshoot-1elongationandrootelongationofChinesecabbageseedsexceptfor4mg•Ltetracyclineinseed30germinationstage,andtheimpactwasenhancedwhentheconcentrationincreases.InthestageofChinesecabbageseedlinggrowth,therootlengthandplantheightofChinesecabbageseedlingstrengthenedinhibitedeffectwiththeincreasingconcentrationsoftwokindsofantibiotic.Besides,antibiotic-exposurecanobviouslyimprovedtheratesofcorrespondingresistantbacteriainvegetableseedlings,andtheratiosincreasedwiththeincreasingdosageofantibiotics.35Keywords:antibiotic;vegetable;antibioticresistanceendophyticbacteria;ecologicaltoxicity0引言自上世纪五十年代，美国食品与药物管理局（FDA）首次批准抗生素可以用作饲料添加[1]40剂以来，因其能促进动物生长和增产而广泛应用于禽畜养殖业。据调查，中国每年生产超[2]过21万吨抗生素，其中48%用于禽畜养殖等农业生产。然而，大多数兽药抗生素在动物[3]体内并不能被完全吸收代谢，约30~90%会随着动物粪尿排出而进入自然环境，造成农田[4]土壤中抗生素污染日益严重。国内外研究证实，土壤中四环素类、磺胺类、大环内酯类和基金项目：教育部博士点基金（20134104110006）作者简介：张昊（1979-），女，副教授，主要研究方向：环境微生物学通信联系人：杨清香（1966-），教授，博导，主要研究方向：环境微生物学.E-mail:yangqx@htu.edu.cn-1- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn-1[5-9]喹诺酮类抗生素的残留浓度达到0.4~300μg•kg，对生态环境构成了严重威胁。45已有研究表明，在抗生素污染的土壤中，植物根系会吸收抗生素而造成药物在植株中的[10][11]积累。吴小莲等分析了珠三角地区长期施用粪肥的蔬菜基地蔬菜中16种典型抗生素的-1[12]含量，发现抗生素检出率高达100%，平均残留量0.91μg•kg。Dolliver等用含有50、100-1mg•L磺胺甲嘧啶的猪粪施肥后，玉米、莴苣及马铃薯中均检测到了磺胺甲嘧啶残留。王[13]瑾等报道了在长期施用猪粪的农田中种植韭菜后，植物根部有土霉素和金霉素检出，而50未施用猪粪的对照组中则未检测出上述两种抗生素。据报道，农作物吸收和积累抗生素后会[14]对植物生长造成影响。Kong等研究土霉素暴露下紫花苜蓿生长时发现，幼苗芽生长和根生长的抑制率分别高达61%和85%。其次，农作物中抗生素的污染会通过食物链的传播影响人类健康。例如，食品中残留的抗生素被人体尤其是幼儿吸收之后，可能会引起过敏反应[15-16][17]甚至中毒反应。Langford等用含有抗生素的牛奶喂养奶牛，发现其肠道中耐药细菌的55比例要远远高于用不含抗生素牛奶饲喂的奶牛，说明长期摄食含有抗生素的食物可能导致动物体内肠道微生物耐药性的产生。目前，农作物对抗生素的吸收和积累问题以及对人类的健康威胁已经引起了人们的重视，但鲜有抗生素暴露与蔬菜内生细菌耐药性的报道。植物内生细菌是存在于植物组织中的[18]细菌，与植物体的生长发育等关系密切。本研究选择日常生活中常见蔬菜小白菜为研究60对象，模拟了水培环境下不同剂量四环素、环丙沙星暴露对蔬菜种子萌发及苗期生长的影响。通过对蔬菜生长指标的监测以及幼苗中耐药性内生细菌数量变化的解析，揭示环境中抗生素胁迫对蔬菜生长的生态毒性效应，为畜禽粪肥用于蔬菜种植可能带来的生态安全和健康风险提供可供参考的科学依据。1材料与方法651.1实验材料1.1.1蔬菜小白菜品种为上海青（BrassicachinensisL.，冬野美冠），发芽率98%，购自新乡市科达种子有限公司。1.1.2抗生素70四环素，分子式C22H24N2O（图81a），分析纯（≥97.0%）；环丙沙星，分子式C17H18FN3O3（图1b），分析纯（≥95.0%），Dr.EhrenstorferGmbH公司生产。图1四环素（a）和环丙沙星（b）的分子结构式-2- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn1.1.3培养基[19-20]75蔬菜水培体系采用1/2浓度Hoagland营养液。蔬菜幼苗中总可培养内生细菌培养[21]采用LB固体培养基，耐药性内生细菌培养采用含四环素、环丙沙星终浓度分别为16-1-1[22]µg•mL、4µg•mL的LB固体培养基。培养基中抗生素浓度的设定参考CLSI（2013）。1.2实验方法1.2.1种子萌发实验80选取籽粒饱满一致的种子，浸泡于0.1%的NaClO溶液中表面消毒10min，然后用去离[23]子水冲洗干净。在铺有滤纸的培养皿中加入10mL新配制的不同浓度抗生素溶液（四环-1-1素浓度分别为4，16，30，50，100mg•L；环丙沙星浓度分别为1，4，10，20，50mg•L），对照组中添加等体积无菌水。将表面消毒的种子均匀摆放入内，每皿20粒种子，每种抗生素每个浓度设置三个重复，25℃恒温遮光培养。待对照组种子根伸长约20mm时停止实验。851.2.2水培育苗实验挑取1.2.1对照组中长势均一的种子播种于穴盘中育苗。苗龄两叶一心时，选取生长均一的幼苗移至含1/2浓度Hoagland营养液的水培箱中，每箱定植12株。同时水培箱中含有与1.2.1中一致的不同浓度抗生素溶液，对照组处理仅含有营养液，每个处理3个重复。水培箱采用打氧通气，调节营养液pH为6.0~6.4，培养环境保持白天温度25±2℃，夜晚温90度18±2℃，每日光照12小时，湿度维持65~70%。幼苗生长15天后收获。1.2.3蔬菜生长指标测定[18]种子萌发实验结束后测量种子萌发过程中的根伸长和芽伸长。幼苗收获后，置于无菌滤纸上将表面残余水分吸干，测量根长和株高。种子萌发的根伸长、芽伸长和幼苗的根长、株高抑制率计算公式如下：[24]95抑制率=（对照组测量值－实验组测量值）/对照组测量值×100%1.2.4蔬菜幼苗中内生细菌计数将蔬菜幼苗按以下步骤进行表面消毒处理：70%乙醇3min，0.1%氯化汞3min，70%乙醇1min，灭菌蒸馏水冲洗6~7次后，用无菌滤纸吸干水分。将幼苗转入灭菌研钵中研磨成汁，经梯度稀释后分别涂布在LB固体培养基和含抗生素的培养基平板上，每个稀释度重复1003次。28℃恒温培养72h后，计数平板上的菌落数目，计算总内生细菌数、抗四环素内生[24]细菌和抗环丙沙星的内生细菌数。1.3数据处理及分析用Excel2016软件对实验数据进行整理并绘制图表，用SPSSV22.0软件进行单因素方差分析。-3- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn1052结果与分析2.1抗生素暴露对小白菜种子萌发的影响用不同浓度的四环素和环丙沙星处理小白菜种子，种子萌发过程中的根伸长和芽伸长结果以及不同浓度抗生素对种子萌发的抑制效果见图2（A、B）。4A-23.68-6.20**-2.9336.9824.70）34.2526.36cm**2**39.46****76.76长度（**77.511**0根伸长芽伸长-1-1-1-1-1-11100mg·L4mg·L16mg·L30mg·L50mg·L100mg·L4B-0.7832.716.208.27）18.92cm249.0757.3058.53**55.89长度（******76.941**0根伸长芽伸长-1-1-1-1-1-10mg·L1mg·L4mg·L10mg·L20mg·L50mg·L图2不同浓度四环素（A）、环丙沙星（B）暴露下小白菜种子萌发的根伸长、芽伸长及其抑制率*、**分别表示抗生素处理组与对照组间的显著性差异（P<0.05）和极显著性差异（P<0.01）；柱状115图上数字表示抗生素处理的抑制率（%）。下同-1从图2A可知，与对照处理相比，四环素暴露剂量为4mg•L时，能促进小白菜种子萌发时的根伸长和芽伸长，且对根伸长的促进作用达到极显著水平（P<0.01）。但随着暴露剂量逐渐升高，其对种子根伸长和芽伸长均表现出抑制作用，且抑制率随着抗生素浓度增加而-1上升。在最高100mg•L的四环素暴露下，小白菜种子根伸长的抑制率达到78%，芽伸长抑-1120制率达到26.36%。同时，图2B显示，除1mg•L环丙沙星对种子的芽伸长无明显抑制作用外，在供试剂量下，环丙沙星暴露对小白菜种子萌发时的根伸长、芽伸长均有明显抑制作-1用，且对根伸长的抑制作用更加显著。随着暴露浓度上升到50mg•L，环丙沙星对根伸长的抑制率达到77%，对芽伸长的抑制率达到59%。2.2抗生素暴露对小白菜幼苗生长的影响125水培条件下，用含有不同浓度四环素、环丙沙星的营养液分别培养小白菜幼苗，幼苗的株高、根长结果以及不同浓度抗生素对其生长抑制效果见图3（A、B）。-4- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn8A33.54638.18**）**53.50cm23.4624.864**65.5465.30****25.82**长度（****45.7357.26**2**0根长株高-1-1-1-1-1-10mg·L4mg·L16mg·L30mg·L50mg·L100mg·L8B26.8440.516*38.74**42.29）cm****51.6824.5821.234****27.06*25.51长度（****70.112**0根长株高130-1-1-1-1-1-10mg·L1mg·L4mg·L10mg·L20mg·L50mg·L图3不同浓度四环素（A）、环丙沙星（B）暴露下小白菜幼苗的根长、株高及其抑制率从图3A可以看出，与对照处理相比，四环素暴露对小白菜幼苗的生长表现极显著的抑制作用（P<0.01），根长和株高均随着暴露浓度升高而明显下降。在供试浓度范围内，四环135素对小白菜幼苗的根长和株高抑制率分别为33.54~65.54%和23.46~57.26%。图3B显示了不同浓度环丙沙星暴露对小白菜幼苗根长和株高的影响，结果同样表明，在供试浓度下环丙沙星暴露抑制了小白菜幼苗的根长和株高，且随着暴露剂量的增加，抑制率明显上升。最高-150mg•L环丙沙星对小白菜幼苗根长和株高的抑制率分别达到52%和70%。2.3抗生素暴露对小白菜幼苗中可培养内生细菌的影响140不同浓度四环素、环丙沙星暴露下，小白菜幼苗中总内生细菌及耐药性内生细菌的计数结果见图4。从图4A可以看出：与对照处理相比，四环素暴露下小白菜幼苗中总可培养内生细菌的数量逐渐减少，但四环素耐药性内生细菌数量有所上升，在不同暴露剂量下四环素耐药性内生细菌的数量无明显变化。与四环素处理的作用类似，环丙沙星暴露时，小白菜幼-1苗中总可培养内生细菌数量均呈下降趋势，在不高于4mg•L的暴露剂量下，环丙沙星耐药-1145性内生细菌数量与对照相处理相比明显降低（图4B），但随着暴露剂量持续增加到50mg•L，幼苗中环丙沙星耐药内生细菌数量不断上升，且均高于对照处理。进一步分析耐药性内生细-1菌占总可培养内生细菌的比例可知，除1mg•L环丙沙星暴露时环丙沙星耐药内生细菌比例低于对照处理外（图5B），在供试的四环素和环丙沙星暴露剂量下，小白菜幼苗中四环素耐药性内生细菌的比例从2.94%增加到13.10%（图5A），环丙沙星耐药性内生细菌的比例150从10.40%增加到47.17%（图5B），且两种耐药内生细菌的比例均随着抗生素暴露剂量的增加而呈现极显著上升趋势。-5- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cnA6)总可培养细菌四环素抗性内生细菌-1/cfu·g42细菌丰度Log(004163050100四环素浓度/mg·L-1B6总可培养细菌环丙沙星抗性内生细菌)-1/cfu·g4细菌丰度2Log(0014102050环丙沙星浓度/mg·L-1155图4不同浓度四环素（A）、环丙沙星（B）暴露下小白菜幼苗中总内生细菌和耐药性内生细菌数量/%16A****12**/总内生细菌8****40抗性内生细菌04163050100四环素浓度/mg·L-1/%60B**40****/总内生细菌**20*0抗性内生细菌014102050环丙沙星浓度/mg·L-1图5不同浓度四环素（A）、环丙沙星（B）暴露下小白菜幼苗中耐药性内生细菌占总可培养内生细菌的比例1603讨论本研究探讨了不同剂量四环素、环丙沙星暴露对小白菜种子萌发及幼苗生长的影响。在-6- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn-1种子萌发过程中，4mg•L四环素暴露明显促进了小白菜种子的根伸长和芽伸长，说明低[26]剂量抗生素处理对小白菜种子萌发具有促进作用。据报道，魏子艳等证实低浓度的诺氟[27-29]沙星和金霉素对黄瓜种子芽伸长有一定促进作用。Migliore等也发现低浓度恩诺沙星对165黄瓜、生菜、豆、萝卜生长有促进作用。同样在四环素暴露的环境下，随着暴露剂量增加，四环素对小白菜种子萌发时的根伸长和芽伸长均表现出抑制作用，这是由于抗生素的生物毒[30]性效应造成的。与四环素的影响效应不同，本研究中不同剂量环丙沙星暴露均明显抑制-1小白菜种子的萌发。即便在较低暴露剂量下（4mg•L），环丙沙星对种子根伸长的抑制作用也极显著高于无抗生素暴露的对照处理，说明不同抗生素对小白菜种子的毒性效应不同。[26]170例如，魏子艳等在研究金霉素、诺氟沙星和磺胺对甲氧嘧啶对蔬菜种子根伸长和芽伸长的生态毒性时证实，蔬菜种子根和芽伸长对不同抗生素的敏感性不尽相同。同时，比较两种抗生素暴露对小白菜种子萌发时根伸长和芽伸长的抑制率发现，根伸长的敏感性要明显大于芽伸长，这是由于种子萌发时通过根部直接吸收抗生素，导致根部抗生素的累积而对根部生[19]长产生胁迫，而种子的芽伸长也随着抗生素的吸收、运输而被抑制。175与抗生素暴露对种子萌发的影响类似，水培条件下，四环素、环丙沙星暴露均显著抑制了小白菜幼苗的生长，且抑制率随着抗生素暴露剂量的增加而增强，这是由于长时间抗生素暴露对植物的生长发育产生了生态毒性。有分析认为，污染环境下，植物对抗生素的吸收降低了其对叶酸的吸收，而叶酸与脱落酸和细胞分裂素的前体嘌呤的合成有关。因此，抗生素[20,28]的污染影响了植物体正常的生长发育。同时，抗生素暴露对小白菜幼苗发育过程中根生180长的抑制作用更为显著，这与对种子萌发的处理结果一致。进一步分析抗生素暴露对小白菜幼苗中内生细菌的影响发现，两种抗生素暴露下蔬菜中总可培养内生细菌的数量均有所下降，且降低的趋势与抗生素暴露剂量的增加相对应。由于[31-32]本研究选择的供试药物四环素和环丙沙星均属于杀菌效果较好的广谱性抗生素，因此其-1在环境中的残留可以有效降低敏感细菌的数量。但同时值得注意的是，除低剂量（1mg•L）185环丙沙星暴露外，本研究中随着抗生素暴露剂量的增加，小白菜幼苗中耐药性内生细菌的数量不断上升，尤其耐药菌占总可培养内生细菌的比例均极显著高于无抗生素暴露的对照处理。分析造成这一现象的可能原因是，水培条件下植物更易于吸收环境中的抗生素，而植株中抗生素的积累为内生细菌的生长提供了持续的环境压力，在环境诱导和选择压力作用下，耐药细菌的生存活性及数量均得以提高，因此导致在总可培养内生细菌中耐药菌的比例显著190增加。我课题组在前期研究施用鸡粪（含抗生素残留）对蔬菜内生细菌的影响时发现，经常施用粪肥的芹菜、小白菜和黄瓜中阿莫西林、卡那霉素、庆大霉素和头孢氨苄耐药性内生细[33][34]菌的比例均明显高于不施用粪肥的蔬菜。Udikovickolic等在研究施加粪肥对土壤中耐药细菌的影响时也发现，施加粪肥的土壤中β-内酰胺类耐药细菌的丰度显著高于对照处理。综上所述，抗生素暴露不仅会抑制蔬菜的生长发育过程，还可能诱导耐药性内生细菌的增加。195由于蔬菜中的耐药内生细菌可能随着食物链传播到达人体，对人类健康构成威胁，因此应当引起人们的关注。4结论-1（1）低剂量（4mg•L）四环素暴露促进小白菜种子萌发时的根伸长和芽伸长，高于4-1mg•L的四环素暴露和不同浓度环丙沙星暴露均抑制小白菜种子萌发，且抑制率随着抗生素200暴露剂量增加而升高。-7- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn（2）水培条件下，不同剂量四环素、环丙沙星暴露均抑制小白菜幼苗的生长，且抑制率随着抗生素暴露剂量的增加而加强。-1（3）除1mg•L环丙沙星外，四环素、环丙沙星暴露均提高了水培小白菜幼苗中耐药性内生细菌的比例，且随着抗生素暴露剂量的增加该比例显著上升。205[参考文献](References)[1]罗义,周启星.抗生素抗性基因(ARGs)--一种新型环境污染物[J].环境科学学报,2008,28(8):1499-1505.[2]LuoY,MaoD,RyszM,etal.TrendsinantibioticresistancegenesoccurrenceintheHaiheRiver,China.[J].EnvironmentalScience&Technology,2010,44(44):7220-7225.210[3]SarmahAK,MeyerMT,BoxallAB.Aglobalperspectiveontheuse,sales,exposurepathways,occurrence,fateandeffectsofveterinaryantibiotics(VAs)intheenvironment[J].Chemosphere,2006,65(5):725-59.[4]ZhuYG,JohnsonTA,SuJQ,etal.DiverseandabundantantibioticresistancegenesinChineseswinefarms[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica,2013,110(9):3435-40.[5]BaguerAJ,JensenJ,KroghPH,etal.Effectsoftheantibioticsoxytetracyclineandtylosinonsoilfauna[J].215Chemosphere,2000,40(7):751-757.[6]HamscherG,SczesnyS,HöperH,etal.Determinationofpersistenttetracyclineresiduesinsoilfertilizedwithliquidmanurebyhigh-performanceliquidchromatographywithelectrosprayionizationtandemmassspectrometry[J].Analyticalchemistry,2002,74(7):1509-18.[7]Dı́Az-CruzMS,AldaMJLD,BarcelóD.Environmentalbehaviorandanalysisofveterinaryandhuman220drugsinsoils,sedimentsandsludge[J].TracTrendsinAnalyticalChemistry,2003,22(6):340-351.[8]XieYF,LiXW,WangJF,etal.SpatialestimationofantibioticresiduesinsurfacesoilsinatypicalintensivevegetablecultivationareainChina[J].ScienceoftheTotalEnvironment,2012,430(14):126-131.[9]JacobsenAM,Halling-SørensenB,IngerslevF,etal.Simultaneousextractionoftetracycline,macrolideandsulfonamideantibioticsfromagriculturalsoilsusingpressurisedliquidextraction,followedbysolid-phase225extractionandliquidchromatography-tandemmassspectrometry[J].JournalofChromatographyA,2004,1038(1-2):157-70.[10]KumarK,GuptaSC,BaidooSK,etal.Antibioticuptakebyplantsfromsoilfertilizedwithanimalmanure[J].JournalofEnvironmentalQuality,2005,34(6):2082-5.[11]吴小莲,向垒,莫测辉,等.长期施用粪肥蔬菜基地蔬菜中典型抗生素的污染特征[J].环境科学,2013,23034(6):2442-2447.[12]DolliverH,KumarK,GuptaS.Sulfamethazineuptakebyplantsfrommanure-amendedsoil[J].JournalofEnvironmentalQuality,2007,36(4):1224-30.[13]王瑾,韩剑众.饲料中重金属和抗生素对土壤和蔬菜的影响[J].生态与农村环境学报,2008,24(4):90-93.235[14]KongWD,ZhuYG,LiangYC,etal.Uptakeofoxytetracyclineanditsphytotoxicitytoalfalfa(MedicagosativaL.)[J].EnvironmentalPollution,2007,147(1):187-93.[15]王虹,蒋卫杰,余宏军,等.禽畜废弃物中的抗生素及其在蔬菜等农作物中的富集[J].中国蔬菜,2011(12):10-15.[16]GrammerLC,GreenbergerPA.DrugAllergyandProtocolsforManagementofDrugAllergies,3rd240Edition[J].Allergy&AsthmaProceedings,2004,25(3):199-203.[17]LangfordFM,WearyDM,FisherL.Antibioticresistanceingutbacteriafromdairycalves:adoseresponsetothelevelofantibioticsfedinmilk[J].JournalofDairyScience,2003,86(12):3963-6.[18]赵帅,周娜,赵振勇,等.基于高通量测序分析盐角草根部内生细菌多样性及动态规律[J].微生物学报,2016,56(6):1000-1008.245[19]金彩霞,陈秋颖,刘军军,等.两种常用兽药对作物发芽的生态毒性效应[J].环境科学学报,2009,29(3):619-625.[20]QixingZ,QianruZ,JidongL.ToxiceffectsofacetochlorandmethamidophosonearthwormEiseniafetidainphaiozem,northeastChina[J].JournalofEnvironmentalSciences,2006,18(4):741-5.[21]陈天寿.微生物培养基的制造与应用[M].北京:中国农业出版社,1995:179-184.250[22]CockerillFR.Performancestandardsforantimicrobialsusceptibilitytesting:twenty-thirdinformationalsupplement[M].ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,2013.[23]PanM,ChuLM.Phytotoxicityofveterinaryantibioticstoseedgerminationandrootelongationofcrops[J].Ecotoxicology&EnvironmentalSafety,2016,126:228-237.[24]肖明月,安婧,纪占华,等.六种常见抗生素对小白菜种子萌发及生理特性的影响[J].生态学杂志,2014,25533(10):2775-2781.[25]LupwayiNZ,ClaytonGW,HansonKG,etal.Populationsandfunctionaldiversityofbacteriaassociatedwithbarley,wheatandcanolaroots.[J].CanadianJournalofSoilScience,2004,84(3):245-254.[26]魏子艳,王金花,夏晓明,等.三种抗生素对蔬菜种子芽与根伸长的生态毒性效应[J].农业环境科学学报,2014(2):237-242.-8- 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