“三法三穴”不同刺激参数对坐骨神经损伤大鼠痛温觉功能的影响.pdf 7页

'中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn“三法三穴”不同刺激参数对坐骨神经损伤#大鼠痛温觉功能的影响**贾文端，刘瑄慈，于天源，马驰，陶艳红，郭鑫5（北京中医药大学针灸推拿学院）摘要：目的从行为学角度探究推拿手法的力量（A）、时间（B）、频率（C）对坐骨神经损伤大鼠痛温觉功能恢复的影响。方法以SD大鼠为实验动物，建立坐骨神经损伤模型；利用三因素三水平的正交试验设计方案筛选“三法三穴”促进SNI大鼠痛温觉功能恢复的适宜10参数。结果从光热耐痛阈的角度分析，造模7天后，模型组与正常组比较有显著差异（P<0.05），推拿干预20次后，推拿组与模型组比较有显著差异（P<0.05），三因素的优选值为力量2N，时间5min，频率100次/min，三种因素的主次关系为力量>频率>时间。结论“三法三穴”刺激可以促进SNI大鼠痛温觉功能的恢复。力量因素对痛温觉功能的影响最显著，轻度力量、长时间、高频率的刺激更有利于痛温觉功能的恢复。15关键词：推拿；参数；坐骨神经损伤；正交试验中图分类号：R244.1Effectsofdifferentstimulationparametersof"ThreemethodsandThreepoints"onsensoryfunctioninratswith20sciaticnerveinjuryJIAWenduan,LIUXuanci,YUTianyuan,MAChi,TAOYanhong,GUOXin(AcupunctureandTuinaCollegeofBeijingUniversityofChineseMedicine)Abstract:Objective：Explorethestrength(A),time(B),frequency(C)effectsonsensoryfunctionrecoveryinratswithsciaticnerveinjuryfromtheperspectiveofbehavior.Method：SDratswereused25asexperimentalanimalstomakethesciaticnerveinjurymodel;Screeningtheappropriateparametersof"threemethodthreepoints"whichcanpromotetherecoveryofsensoryfunctioninSNIratsbyOrthogonaltestdesignschemewiththreefactorsandthreelevels.Results：Fromtheperspectiveofheattolerance,7daysaftermodeling,therewassignificantdifferencebetweenthemodelgroupandthenormalgroup(P<0.05),After20timesoftuinaintervention,tuinagroupandmodelgroupwere30significantlydifferent(P<0.0Effectsofdifferentstimulationparametersof"ThreemethodsandThreepoints"onsensoryfunctioninratswithsciaticnerveinjury5),Thebestresultofthreefactorsis2N,5min,and100/min,Therelationshipbetweenprimaryandsecondaryofthreefactorsis：strength>frequency>time.Conclusion:“Threemethodsandthreepoints”canpromotetherecoveryofsensoryfunctioninSNIrats.Themostsignificantinfluencefactorsonrecoveryofsensoryfunctionis35strength,Mildforce,longtimeandhighfrequencystimulationismoreconducivetotherecoveryofsensoryfunction.Keywords:tuinatherapy;parameter;sciaticnerveinjury;orthogonaltest400引言推拿手法刺激参数是指推拿操作过程中影响推拿刺激量的可变因素，包括施力大小、作用方向、操作频率等因素。当前，国内外对于推拿基础研究较少，而对于不同力量手法对功基金项目：博士点基金资助项目（20130013110013）；国家自然科学基金面上项目（81674094）作者简介：贾文端（1990-），男，硕士生，主要研究方向：推拿治疗周围神经损伤的机理研究通信联系人：于天源(1965-),男,教授,博导,主要研究方向:推拿治疗周围神经损伤的机理研究.E-mail:yutianyuan@sina.com-1- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn[1]能恢复及组织修复效果的定量定性研究就更少了，这与药理、针刺等相关研究形成鲜明对比。随着推拿学科在临床、教学及科研领域的不断发展，手法的规范化及手法参数的标准化45越来越被相关工作者所重视。尤其是在科研领域，要做到科学严谨的实验设计，就需要客观量化的手法参数。如何客观评价手法的疗效，其关键点就是手法刺激的定性、定量问题。本课题组采用推拿手法模拟仪定时、定量模拟手法。以坐骨神经损伤为例研究周围神经损伤，以SD大鼠为实验动物建立坐骨神经夹持损伤模型，研究手法刺激参数对坐骨神经损伤大鼠痛温觉功能的影响。501材料与方法1.1.实验动物及分组选取雄性,清洁级大鼠（SD）112只，体重180±10g。由斯贝福（北京）实验动物科技有限公司提供。动物购入后，适应性饲养1周。采用随机数字表对实验动物进行分组：随机分为正常组14只，假手术组14只，模型组14只，模型对照组7只、推拿组63只。其中，55推拿组分为九组，即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ，每组7只。1.2.造模方法[2]采用坐骨神经夹持损伤法，模型组与推拿治疗组用10%的水合氯醛麻醉，麻醉剂量为每100g腹腔注射0.35ml；麻醉后俯卧位固定，于右侧臀股交界处剪毛、消毒；沿坐骨神经走行方向用手术剪剪开1cm皮肤切口，止血钳钝性分离肌肉层，充分暴露梨状肌下缘，找60到坐骨神经；使用弯钩镊轻挑起坐骨神经，使用10号持针器夹持5s，力度满扣，造成长约2mm的损伤点，随后逐层消毒、缝合。假手术组暴露坐骨神经的方法与模型组方法相同，但不做夹持，余各步同模型组。1.3.仪器按摩推拿手法模拟仪（中华人民共和国发明专利号：200710187403.1）651.4.干预方法正常组、模型组与假手术组行常规喂养，不做干预。模型对照组于造模后第7天开始干预，干预方式为每天以手抓握9min。主要目的是为了与推拿之间形成对照。推拿组共九组63只，每组7只，于造模后第7天开始干预。干预方式为用“推拿手法模拟器”依次刺激大鼠患侧殷门、承山、阳陵泉穴，施行手法的顺序为点法→拨法→揉法（三法三穴）；刺激70参数见表1。推拿手法模拟仪按摩头的直径约为10mm的圆形接触面。造模七天后开始干预，每日干预1次，每干预10次休息1天，共干预20次。取穴位置依据依林文注所著《实验针灸学》和比较解剖学法进行取穴。表1推拿组（九组）的干预参数Tab.1Interventionparametersoftuinagroup刺激参数组别力量时间频率Ⅰ2N1min30/minⅡ4N1min60/min-2- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cnⅢ6N1min100/minⅣ2N3min60/minⅤ4N3min100/minⅥ6N3min30/minⅦ2N6min100/minⅧ4N6min30/minⅨ6N6min60/min751.5.检测时间造模七天后：将正常组、假手术组及模型组各取7只（共21只）进行行为学检测。干预20次后：将剩余正常组、假手术组、模型组、模型对照组各组7只、推拿组63只（共91只）进行行为学检测。检测光热耐痛阈，评价大鼠温度觉和痛觉恢复情况。测试过程保持安静，室温20～25℃。80测试前将大鼠置于检测盒内，待其适应环境后，用辐射灯光源照射其足跖中后1/3处，按下开始按钮，待大鼠抬脚时计时自动停止，记录此时时间，作为大鼠热痛缩腿反应潜伏期（PWL）。为防止大鼠组织热灼伤，设定光源自动切断时间为21s。每侧下肢测定3次，取其平均值。1.6.统计方法85使用北京中医药大学SAS9.3统计软件对数据进行分析统计，结果以X±S（平均值±标准差）表示。对正常组、假手术组、模型组、模型对照组组间比较时，当各组数据均呈正态性分布、方差齐时,釆用单因素方差分析(One-Way-ANOVA)进行分析，组间两两比较用SNK（Student-Newman-Keuls）法，当各组数据呈正态分布而方差不齐时,釆用近似方差分析；当90各组数据不全为正态性分布时,则采用非参数检验（秩和检验）;当把推拿组（九组）看成一个整体时，与其他各组比较的统计方法同上；当推拿组（九组）之间比较时为正交试验的结果分析，采用多因素实验资料的方差分析——多项分类方差分析（multi-wayclassificationANOVA）及直观分析法，建里正交试验极差分析表，通过计算K值和极差R值可以直接判断三因素——力量、时间及频率的主次关系，得出最优水平及最优组合。95对于三因素中某一因素而言，K值的大小可反映该因素不同水平的优劣，对于光热耐痛阈测定的耐痛时间，对应相应因素，K值越小，说明在这个水平推拿干预对痛温觉功能的恢复效果最好。统计结果以P<0.05为临界点，比较数据的差异性是否具有统计学意义。2结果大鼠右侧足底光热耐痛阈测定结果见表2。造模7天后，模型组与正常组比较有统计学-3- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn100差异（P<0.05）；正常组与假手术组比较无统计学差异（P>0.05）。说明大鼠坐骨神经损伤后，足部痛温觉功能明显减退。从光热耐痛阈角度分析，造模7天后，模型组痛温觉功能显著降低。推拿干预20次后，模型组与正常组比较有统计学差异（P<0.05）；推拿组与模型组及正常组比较均有统计学差异（P<0.05）。说明推拿虽然不能完全治愈痛温觉功能障碍，但可105以改善坐骨神经损伤后痛温觉功能恢复的状况。表2大鼠右侧足底光热耐痛阈测定结果（单位：s）Tab.2Resultsofheattolerance(unit:s)平均值±标准差组别N造模7d后干预20次正常组75.87±1.33*5.99±1.17*假手术组77.18±1.78*7.11±1.43*模型组714.09±1.63△13.96±1.63△模型对照组713.79±1.58△推拿组6310.43±2.76△*注:与正常组比较△P<0.05；与模型组比较*P<0.05。110图1：光热耐痛阈Fig.1heattolerance采用“三法三穴”的方法进行推拿干预对大鼠痛温觉功能的恢复有效，但推拿的不同参数是否会影响其结果？为判断推拿参数（力量、时间、频率）对光热耐痛阈的影响，首先建立直观的正交分析表，将推拿组（九组）每组光热耐痛阈的均值进行分析，结果见表3。115表3推拿组光热耐痛阈的正交分析表Tab.3Orthogonalanalysistableoftuinagroup-4- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn正交试验结果的直观分析表组别A（力量）B（时间）C（频率）结果（单位：s）Ⅰ1119.45Ⅱ21210.61Ⅲ31312.36Ⅳ1229.25Ⅴ2239.2Ⅵ32112.45Ⅶ1338.61Ⅷ2318.85Ⅸ33213.1K19.110.8110.25K29.5510.310.98K312.6310.1810.05R3.530.620.93注：K1、K2、K3为所在因素3水平所对应的实验指标和的平均值，R为所在列因素的极差。表3为光热耐痛阈正交试验的极差分析表，通过分析K值和极差R值的大小，可以判断各因素的主次关系，得出最佳因素及各因素的最优水平，从而得出“三法三穴”的最优参120数组合。对于A（力量）因素而言，K3>K2>K1，说明最佳力值是2N，其次是4N，最后是6N；对于B（时间）因素而言，K1>K2>K3，说明最佳时间是5min，其次是3min，最后是1min；对于C（频率）因素而言，K2>K1>K3,说明最佳频率是100次/min，其次是30次/min，最后是60次/min。因此，依据光热耐痛阈来评价痛温觉功能的恢复，优选的刺激参数组合是125A1B3C3，即力量2N，时间5min，频率100次/min。从R值的大小可以看出RA>RC>RB,可以认为，三因素的主次关系为力量>频率>时间。但其主次关系是否具有统计学意义还需进一步运用统计软件分析。为分析推拿组各参数的差异性是否具有统计学意义，运用北京中医药大学SAS9.3软件对上表中的结果（光热耐痛阈）进行方差分析，方差分析结果见表4。130表4推拿组光热耐痛阈的正交分析结果Tab.4Orthogonalanalysisresultsoftuinagroup因素DF（自由度）MS（均方）F值P值A（力量）211.164.110.02B（时间）20.321.890.34C（频率）20.724.170.19由表4方差分析结果可知：因素A、B、C对结果的影响有统计学差异（P<0.05）。但从单因素来看，力量（A）因素的影响显著（P<0.05），时间（B）因素和频率（C）因素的影响不显著（P>0.05）。从F值的大小判断（对应因素的F值越大，该因素对结果的影响也135越大），则可认为各因素的主次关系为：力量>频率>时间，这与直观分析法得出的结果一致。-5- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn3讨论在本次实验中，推拿干预的穴位为殷门、承山及阳陵泉穴，属于神经肌肉相关区域，为足太阳膀胱经和足少阳胆经经脉所过部位，符合针灸学循经取穴及局部取穴的原则。从解剖140学角度分析，殷门穴位于坐骨神经干，承山和阳陵泉分别位于坐骨神经的分支即胫神经和腓总神经上。本课题组前期以相同的干预方法研究得知，推拿对周围神经损伤后的行为学改善、形态[3]学恢复，以及组织内神经生长因子、脑源性神经营养因子、肌源性神经营养因子的增长均[4]有显著意义。145推拿对坐骨神经损伤的起效时间以干预治疗20次后明显。因此，实验选取造模后7d[5]（推拿干预0天）、推拿干预20d后这2个时间点。本次实验通过光热耐痛阈来探究手法参数对SNI大鼠痛温觉功能恢复的影响，结果显示力量2N，时间5min，频率100次/min对痛温觉功能的恢复最优选，各因素的主次关系为力量>频率>时间。对于力量因素而言，实验共设置三个参数，分别是2N、4N和6N，结果证实采150用4N和6N的力量对痛温觉功能的恢复不如采用2N的力量，而对于频率和时间，优选频率为100次/min，时间为5min，说明轻力量，高频率，较长时间的刺激对痛温觉功能的恢复更有利。手法力量的大小是影响推拿疗效的关键因素，前人对于手法力度有“轻而不浮，重而不[6]滞”的描述，精炼概括了手法的要求。张介宾在《类经》中论述:“今见按摩之流不知利155害，专用刚强手法，极力困人，开人关节，走入元气，莫为此甚；病人亦以谓法所当然，即有不堪，勉强忍受，多见强者致弱，弱者不起，非惟不能治病，而适以增害，用若辈者，不可不为知慎”。可见，过于刚强的手法可能会产生负面效果。按摩推拿学教材中指出手法要求持久、有力、均匀、柔和，从而达到“深透”和“渗透”[7]的效果。160推拿学属于中医学的一部分，受中国古代哲学和传统文化“以和为贵”、“柔弱胜刚强”等思想的影响，故在手法操作时强调柔和。有力与柔和并不矛盾，有力，是指要有一定的力度，但并非力量越大越好，推拿治病并非只要有力气就行,力量过大,往往造成治疗动作生硬粗暴,把病人搞得痛苦不堪,这种治疗[8]方法往往是有害的。柔和，并非软弱无力，即使最轻柔的手法，也要求“轻而不浮”。轻165手法往往是力度小,动作轻,患者觉得舒适,易接受,但深透不够,因此在临床治疗中应根据病情辩证施治,手法要做到轻重结合,刚柔相济。通过实验研究，笔者认为当采用轻力量的手法时，频率可适当加快，操作时间可适当延长，手法操作上连贯、有序即可达到柔和的效果。而当采用重力量的手法时，则需要减慢手法操作的频率方可达到柔和的状态，另外，操作时间不宜过长。1704结论本实验采用三因素三水平的正交试验设计方案，得出“三法三穴”促进坐骨神经损伤大鼠痛温觉功能恢复的优选参数组合，为后续实验选择刺激参数提供参考；同时，根据实验结果得出优选的参数组合为力量2N，时间5min，频率100次/min，三种因素的主次关系为力-6- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn量>频率>时间，可以认为轻力量，高频率，较长时间的刺激更有利于痛温觉功能的恢复，175为临床采用推拿治疗感觉功能障碍方面的疾病提供了参考依据。[参考文献](References)[1]ChapelleSL,BoveGM.Visceralmassagereducespostoperativeileusinaratmodel.JBodywMovTher,2013,17(1):83-88.180[2]HasegawaK.Anewmethodofmeasuringfunctionalrecoveryaftercrushingtheperipheralnervesinanaesthetizedandunrestrainedrats[J].Experiential,1978,34(2):272-3.[3]吴凡,张蓓,郑慧敏,等.推拿治疗坐骨神经损伤大鼠行为学研究[J].成都中医药大学学报,2013,(01):41-43.[4]韦景斌.推拿干预对周围神经损伤大鼠脊髓背角中NTFs表达变化的研究[D].北京中医药大学,2011.40-42[5]冼思彤,于天源,潘璠,等.推拿对坐骨神经损伤大鼠背根神经节降钙素基因相关肽表达的影响[J].中医学185报,2015,(09):1311-1314.[6]郭汝宝,沈国权,张喜林,严隽陶.试论推拿手法中的[7]于天源，林彩霞，薛卫国，等.按摩推拿学[M].北京：中国中医药出版社，2015.[8]阎博华,丰芬,彭趣思.柔则养筋在中医推拿治疗中的运用[J].四川中医,2014,(05):49-51.-7-'