GBT28079-2011水稻稻粒黑粉病菌检疫鉴定方法.pdf 8页

'ICS65．020．01B16a园中华人民共和国国家标准GB／T28079--2011水稻稻粒黑粉病菌检疫鉴定方法DetectionandidentificationofT／lletiahorridaTak．2011—12—30发布2012-06-01实施宰瞀鹳紫瓣訾糌瞥翼发布中国国家标准化管理委员会“⋯ 标准分享网www.bzfxw.com免费下载刖置GB／T28079—2011本标准按照GB／T1．1—2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC／TC271)提出并归13。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准主要起草人：吴品珊、罗家风、杜洪忠、严进。 标准分享网www.bzfxw.com免费下载1范围水稻稻粒黑粉病菌检疫鉴定方法GB／T28079--2011本标准规定了水稻稻粒黑粉病菌形态学鉴定的方法。本标准适用于水稻Oryzasativa、大米、稻壳中水稻稻粒黑粉病菌的检疫和鉴定。2水稻稻粒黑粉病菌基本信息中文名：水稻稻粒黑粒病菌学名：nlletiahorridaTak．。异名：Tilletiabarclayana(Bref．)Saee．&P．Syd．；Neovossiahorrida(Takah．)Padwiek&A．Khan；NeovossiabarclayanaBref．。病害英文名：blacksmutofrice，ricekernelsmut。属真菌界Fungi，担子菌门Basidiomyceta，黑粉菌纲Usfilaginomycetes，外担菌亚纲Exobasidio—myeetidae，腥黑粉菌目Tilletiales，腥黑粉菌科Tilletiaceae，腥黑粉菌属Tilletza。病菌的形态特征与我国进境植物检疫性有害生物小麦印度腥黑穗病菌Tilletiaindica以及黑麦草腥黑穗病菌Tilletiawalkeri近似。水稻稻粒黑粉病菌的其他信息参见附录A。3方法原理根据稻粒黑粉病菌孢子的形态特征和对寄生造成的症状特征为判断稻粒黑粉病菌的依据。4仪器4．1生物显微镜。4．2体视显微镜。4．3往复式振荡器。4．4低速离心机。5试剂5．1吐温一20(Tween-20)。5．2席尔氏浮载剂(参见附录B)。6检测6．1肉眼观察将水稻稻粒、大米或夹杂在其他货物中的水稻稻粒置于灭菌的白色瓷盘中，根据下列特征检查菌瘿I 标准分享网www.bzfxw.com免费下载cB／v28079--2011和病粒：病粒外表污绿色或污黄色，有时似健粒，饱满或略秕，松软，隐约可见内部的黑色物，破裂后即可散出；有时病粒开裂，散出黑粉；有的病粒呈暗绿色或焦黄色；也有的病粒局部隐暗，米粒部分破坏，胚完好。对疑似病粒，挑取黑粉制片。6．2洗涤检验称取50g样品，倒人250mL灭菌的三角瓶内，加灭菌水100mL、吐温一201滴～2滴，铝箔纸封口，将三角瓶在振荡器上振荡洗涤5min。将洗涤悬浮液注入10mL～20mL灭菌的刻度离心管内，1000r／min离心3min，倒掉上清液，再加剩余洗涤悬浮液，重复离心，直至所有洗涤悬浮液离心完毕，留沉淀物。在沉淀物中加入席尔氏浮载剂，视沉淀物的量，定容至1mL～3mL，吸取5pL～20pL沉淀物悬浮液制片。7鉴定在油镜(100×)下随机观察测量30个成熟的黑粉菌冬孢子，记录冬孢子大小、表面突起形状、突起高度。同样条件下观察不孕细胞形态特征，测量相关特征数值。8稻粒黑粉病菌形态特征8．1冬孢子冬孢子球形或近球形，浅褐色至深褐色，直径17pm～36／zm，平均24Pm～28pm。冬孢子侧面观表面有疣突，顶弯曲、尖锐，成熟的孢子顶端平截或钝，被透明的胶质鞘包围，高1．5pm～4．0pm；正面观疣突均匀分布，排列紧密，呈多角型。8．2不孕细胞不孕细胞球形，近球形，透明，孢壁光滑，大d、(22tzm--36pm)×(14}tm--24／zm)，壁厚1．5pm～5．0“m。8．3水稻稻粒黑粉病菌与近似种的比较见附录c和参见附录D。9结果判定如样本的形态特征与第8章描述吻合，可判定为水稻稻粒黑粉病菌TilletiahorridaTak．。否则不视为水稻稻粒黑粉病菌。10样品保存检疫鉴定后保存样品，以备复验、谈判和仲裁。由鉴定人标识确认、样品管理员登记，置于干燥、防虫、防鼠处保存，保存期为一年，有特殊需求保存期可适当延长。保存期满，需经灭菌后方可处理。 标准分享网www.bzfxw.com免费下载A．1寄主范围附录A(资料性附录)水稻稻粒黑粉病菌其他信息GB／T28079--20”主要寄主水稻(Oryzasativa)，次要寄主有臂形草属(BrachiariaGriseb．)、马唐属(DigitariaHaller)、黍属(PanicumL．)和狼尾草(Pennisetumglaucum)。A．2分布欧洲：希腊，意大利，俄罗斯。亚洲：孟加拉，柬埔寨，中国(安徽、甘肃、广东、广西、贵州、河北河南、湖北、湖南、江苏、江西、吉林、辽宁、四川、台湾、云南、浙江)，印度，印度尼西亚，日本，朝鲜，韩国，马来西亚，缅甸，尼泊尔，巴基斯坦，菲律宾，塔吉克斯坦，泰国，乌兹别克斯坦，越南。非洲：塞拉利昂。中美洲加勒比海：洪都拉斯，古巴，尼加拉瓜，巴拿马，特立尼达和多巴哥。北美洲：墨西哥，美国。南美洲：阿根廷，巴西，圭亚那，苏里南，委内瑞拉。大洋洲：澳大利亚，斐济，所罗门群岛。 标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T28079--201B．1麦克凡氏缓冲液附录B(资料性附录)席尔氏浮载剂的配制方法B．1．1配制0．1mol／L的柠檬酸溶液称取19．21g无水柠檬酸溶于1000mL蒸馏水中。B．1．2配制0．2mol／L的磷酸氢二钠溶液称取28．40g无水磷酸氢二钠溶于1000mL蒸馏水中。B．1．3配制麦克凡氏缓冲液取0．1mol／L的柠檬酸溶液5．5mL和0．2mol／L的磷酸氢二钠溶液194．5mL混合，即为pH8．0的麦克凡氏缓冲液。B，2席尔氏浮载剂的配制称取6g无水乙酸钾溶于300mL麦克凡氏缓冲液中，加甘油120mL和乙醇180mL混匀，即为席尔氏浮载剂。 标准分享网www.bzfxw.com免费下载附录C(规范性附录)水稻稻粒黑粉病菌与近似种的冬孢子形态圈●●●●●◆●一●◆0◆％◆|图C2小麦印度腥黑穗病菌豇fjPlkindica的冬孢子光学显微镜形态固(引自LoriMC 标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T28079--2011附录D(资料性附录)水疆稻粒黑粉病菌与近似种的比较表D．1水稻稻粒黑粉病菌与近似种的比较水稻稻粒黑粉病菌小麦印度腥黑穗病菌黑麦草腥黑穗病菌特征Tilletia矗orridaTilletiaindicaTilletiawalkeri范围17～3622～4723～45冬孢子直径Item平均24～2835～4130～31顶弯曲、尖锐，成熟磺部偶尔弯益，锥冬孢子脊或刺孢子顶端平截或钝，顶部偶尔弯曲，尖或状、平截或钝。高高1．5pm～4pm钝，高1．5pm～5．0／,tm3弘m～6pm冬孢子形状球形或近球形球形冬孢子颜色浅褐色至深褐色红褐色、黑褐色至黑色红褐色至黑褐色寄主永稻小麦黑麦草6'