优化新生脉散方对心衰大鼠心功能及NT-proBNP水平影响的实验研究简报.pdf 5页

'中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn优化新生脉散方对心衰大鼠心功能及#NT-proBNP水平影响的实验研究简报1221112**马生飞，王帅，王贤良，成涛，孙笑冰，汤岐梅，毛静远5（1.天津中医药大学；2.天津中医药大学第一附属医院）摘要：目的：通过建立心衰大鼠模型，观察优化新生脉散方对心衰大鼠心功能及血清N端前脑钠肽（NT-ProBNP）水平的影响。方法：选择Wistar大鼠120只，雄性，SPF级，8周10龄，体重230-260g，随机抽取16只，分为空白对照组、假手术组各8只；剩余104只大鼠通过冠状动脉前降支结扎术复制心衰模型，术后28天采用超声心动图评价，左室射血分术(LVEF)≤45%为心衰模型成功，随机分为模型对照组、新生脉散方组、优化新生脉散方高、中、低剂量组、优化新生脉散方中剂量1天组及3天组。除1天组、3天组，余各组均干预7天，检测心衰大鼠LVEF值及血清NT-ProBNP水平。结果：（1）优化新生脉散方高、中15剂量组及优化新生脉散方给药3天组，给药后较给药前LVEF值均显著升高(P＜0.05)；组间比较，优化新生脉散方高剂量组优于模型对照组、低剂量组，有统计学差异(P＜0.05)。（2）优化新生脉散方高、中、低剂量组和新生脉散方组大鼠给药后血清NT-ProBNP水平均低于模型对照组，有统计学差异(P＜0.05)；优化新生脉散方不同剂量组及不同给药时间组的NT-ProBNP水平组间比较，高剂量组低于中剂量组、低剂量组，给药7天组低于3天组、120天组，但均无统计学差异(P＞0.05）。结论：优化新生脉散方能够改善心衰大鼠心功能，降低血清NT-ProBNP水平。关键词：内科学；心力衰竭；N-末端脑钠肽前体；左室射血分数；优化新生脉散方中图分类号：R54心脏、血管（循环系）疾病25BriefreportofresearchontheefficiencyofOptimizednewShengmaipowdersoncardiacfunctionandNT-ProBNPinHFrats12211MAShengfei,WANGShuai,WANGXianliang,CHENGTao,SUNXiaobing,12TANGQimei,MAOJingyuan30(1.TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine;2.FirstTeachingHospitaoofTianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine)Abstract:Objective:ObservetheefficiencyofOptimizednewShengmaipowdersoncardiacfunctionandssrumNT-ProBNPlevelinHFrats.Methods:Usingthemethodligatureanteriordescendingcoronaryarterycopyheartfailureratmodel,thendivideintoblankcontrolgroup,sham-operatedgroup,35modelcontrolgroup,OptimizednewShengmaipowdershighdosegroup,middledosegroup,low-dosegroup,OptimizednewShengmaipowders1daygroupand3daygroup,newShengmaipowdersgroup.Correspondingmethodsandtreatmentcycletointerferetherats.DetecttheLVEFandsuremNT-ProBNPlevelinHFratsaftertreatmentwithTraditionalChinesemedicine(TCM).Results:OptimizednewShengmaipowdershighdosegroup,middledosegroupcanimprovetheLVEFinHF40ratsthanbeforetreatment(P＜0.05),highdosegroupisbetterthanmodelcontrolgroup（P＜0.05）andlow-dosegroup(P＜0.05).ThelevelsofserumNT-ProBNPinmodelcontrolgrouparesignificantlyhigherthanthatintheOptimizednewShengmaipowdershighdosegroup,middledosegroup,low-dosegroup,newShengmaipowders(P＜0.01).ThelevelsofserumNT-ProBNParedecreased基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金（20131210110005）作者简介：马生飞（19870），男，博士研究生，中西医结合心血管内科通信联系人：毛静远（1962-），男，主任医师，博士生导师，中西医结合心血管内科.E-mail:jymao@126.com-1- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cnwiththeincreaseofthedosageofOptimizednewShengmaipowdersandtreatmentcycle(P＞0.05).45Conclusion:TheOptimizednewShengmaipowderscanimprovecardiacfunctioninHFrats;TheOptimizednewShengmaipowderscanreducethelevelofserumNT-ProBNPinHFrats.Keywords:nternalmedicine;heartfailure(HF);aminoterminalprobrainnatriureticpeptide(NT-ProBNP);leftventricularejectionfraction(LVEF);OptimizednewShengmaipowders0引言50心力衰竭（心衰）是一种复杂的临床综合征，为各种心脏病的终末阶段，多种内源性的[1]神经内分泌和细胞因子参与其中，导致心脏的结构发生重塑，心功能逐渐下降。心衰属于中医学“喘证”、“水肿”等范畴，近年来，大量的临床试验证实了中医药治疗心衰的临床疗效。优化新生脉散方是由天津中医药大学第一附属医院的院内制剂新生脉散方化裁而成，前期临床研究显示优化新生脉散方能够改善患者心功能，缓解心衰患者的临床症状，具有较好的临[2]55床疗效及安全性。本研究采用结扎冠状动脉前降支法制备心衰大鼠模型，观察优化新生脉散方对心衰大鼠心功能及血清NT-ProBNP水平的影响，为临床应用进一步提供实验依据。1材料和方法1.1试验动物雄性Wistar大鼠，230~260g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司；动物等级：60SPF级；合格证编号：SCXK（京）2012-0001；实验室：清洁级实验动物房，许可证号：SYXK（津），动物房温度：19-23摄氏度，相对湿度45-65%。1.2仪器及试剂低温冷冻离心机（HettichMIKRO22R），全自动酶标仪（ThermoMULTISKANMK3），摇床（苏坤SKY-200B），漩涡仪（天力TL96-A），-80℃超低温冰箱（日本SANYYO公65司MDF-382E），Vevo2100超高分辨率小动物超声实时影像系统（加拿大），NT-ProBNP试剂盒（USCNSEA485Ra）。1.3实验用药优化新生脉散方、新生脉散片由天津中医药大学第一附属医院制剂室提供，0.5%羟甲基纤维素钠混悬液、水合氯醛、异氟烷、生理盐水。701.4心衰大鼠模型复制清洁、健康Wistar大鼠，体重230-260g，适应性喂养72h。经腹腔注射10%水合氯醛0.3ml/l00g进行麻醉，麻醉后，将大鼠置于手术台，剃去左测胸前毛发。大鼠背位固定，分离大鼠颈部皮肤、肌肉，直视下以16G静脉鞘管针带芯插入甲状软骨下方气管，拔除针芯，接小动物呼吸机辅助通气，70-80次/min，潮气量0.7-0.8ml。剪开大鼠左侧胸部皮肤、肌肉，75分开左侧第3、4肋间，暴露心脏，小心打开心包，在距离左心耳下2-3mm处用5/0可吸收丝线将左冠状动脉前降支结扎。结扎后心电图机示大鼠标II导联ST段弓背抬高为手术成功依据。将胸腔内渗出血液和空气挤压排出，关闭胸腔，缝合胸部皮肤。大鼠自主呼吸恢复后拔出气管插管。假手术组只穿线不结扎，余操作同模型组。术后3天常规予大鼠10万单位青霉素腹腔注射预防感染。术后4周（28天）行超声心动图检查评价手术组大鼠模型，-2- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn80以LVEF≤45%作为心衰模型成功标志。1.5超声心动图检测大鼠经异氟烷雾化麻醉后，用胶带背位固定于操作台，在大鼠胸部均匀涂抹超声耦合剂，手术板向左倾斜30-45度，方便探头摆放进行多普勒超声心动图检测，B-型超声长轴切面（二维成像），见到左心室、二尖瓣和主动脉流出道，获得图像，然后采用M-型超声获得M-mode85图像，在胸骨旁左心短轴截面左室乳头肌切线测量获得左室舒张末内径（LVEDD）、左室收缩末期内径（LVESD）、左室前壁厚度（LVAW）、左室后壁厚度（LVPW）等参数，采用超声系统自带软件分析左室射血分数（LVEF）。1.6NT-ProBNP测定大鼠末次给药后禁食12h，经腹腔注射10%水合氯醛溶液（0.3ml/100g）麻醉，麻醉后90迅速打开大鼠腹腔，经腹主动脉取血2ml于采血管中，3000r/min离心15min，取上层血清，ELISA法检测大鼠血清NT-ProBNP水平。1.7分组及给药120只大鼠随机抽取16只大鼠，分为空白对照组、假手术组各8只，余104只为手术组，术后28天，共存活63只，采用超声心动图检测手术组大鼠LVEF，LVEF值≤45%为心95衰模型成功，根据LVEF值数值大小排序并编号56只，采用随机数字表法分为优化新生脉散方高剂量组、中剂量组、低剂量组、新生脉散方组、模型对照组，优化新生脉散方（中剂量）1天组、3天组，每组8只。优化新生脉散方高、中、低剂量组分别予优化新生脉散方高剂量1.62g/ml、中剂量0.81g/ml、低剂量0.405g/ml，10ml/kg/d灌胃给药，连续给药7天；模型对照组、假手术组、100空白对照组：分别予0.5%羟甲基纤维素钠混悬液，10ml/kg/d，灌胃给药，连续7天；新生脉散方组予新生脉散方0.97g/ml，10ml/kg/d，灌胃给药，连续7天；优化新生脉散方1天组、3天组，予优化新生脉散方0.81g/ml，10ml/kg/d，灌胃给药，分别治疗1天、3天。用药剂量根据临床成人用量按体表面积换算大鼠的用量，低剂量为常规剂量的一半，高剂量为常规剂量的两倍。1051.8统计学分析计量资料以均数±标准差（x±s）表示。应用统计软件SPSS22.0进行统计分析，资料符合正态分布、方差齐的前提下进行单因素方差分析（ANOVA），两两比较使用LSD法分析，治疗前后相同指标单个组别比较采用独立样本配对T检验。P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01为差异有显著统计学意义。1102研究结果2.1大鼠一般状态空白对照组大鼠皮毛光亮、活动自如，呼吸均匀，体重持续增长，空白对照组无死亡；假手术组大鼠手术后1周，伤口愈合，皮毛光泽度变好，活动自如，呼吸均匀，体重持续增长，假手术组无死亡；模型组104只大鼠，手术死亡25只，主要死于麻醉意外、呼吸衰竭。115术后大鼠出现不同程度的饮食减少、喜蜷缩、活动减少，呼吸急促，皮毛光泽度下降。手术-3- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn后第2-28天死亡共16只，死亡大鼠腹部膨隆，经解剖均可发现大鼠大量胸水、腹水，考虑大鼠死于重度心衰。2.2各组大鼠干预前后LVEF比较给药前，各治疗组与模型对照组大鼠的LVEF值无统计学差异（P＞0.05），具有可比120性。给药后，优化新生脉散方高、中剂量组及给药3天组LVEF值较给药前均显著升高(P＜0.05)；组间比较，优化新生脉散方高剂量组优于模型对照组、低剂量组，有统计学差异(P＜0.05)。（详见表1）。表1各组大鼠给药前后LVEF情况（x±s）项目n给药前LVEF（%）给药后LVEF（%）空白对照组778.86±12.5978.14±11.01假手术组874.28±10.8375.73±10.30模型对照组638.15±5.8039.11±4.19新生脉散方组638.85±5.5741.02±3.59△☆＃优化新生脉散方高剂量组738.16±4.9149.93±7.87△优化新生脉散方中剂量组635.47±6.2540.47±10.62优化新生脉散方低剂量组735.55±7.8239.62±10.39优化新生脉散方给药1天组736.74±5.1639.38±4.82△优化新生脉散方给药3天组737.63±5.2544.76±9.40△☆＃注：与治疗前相比，P＜0.05；与模型对照组相比，P＜0.05；与低剂量组相比，P＜0.051252.3各组大鼠血清NT-ProBNP水平比较模型对照组大鼠血清NT-ProBNP水平显著高于空白对照组、假手术组（P＜0.01）；优化新生脉散方高、中、低剂量组及新生脉散方组大鼠血清NT-ProBNP水平均显著低于模型对照组，有统计学差异（P＜0.05）；优化新生脉散方高剂量组血清NT-ProBNP水平低于中剂量组，中剂量组低于低剂量组，但无显著统计学差异（P＞0.05）；优化新生脉散方中剂130量组（给药7天）优于3天组、1天组，但无显著统计学差异（P＞0.05）；新生脉散方组大鼠血清NT-ProBNP与优化新生脉散方各组之间比较无显著统计学差异（P＞0.05）（详见表2）。表2各组大鼠血清NT-ProBNP浓度（x±s）项目nOD值浓度（pg/ml）空白对照组70.150±0.018104.67±36.56假手术组80.154±0.039119.66±83.97□○模型对照组60.471±0.1921896.33±1795.29☆新生脉散方组60.260±0.046385.67±166.54☆优化新生脉散方高剂量组70.267±0.056416.67±221.90☆优化新生脉散方中剂量组60.306±0.104611.67±503.21优化新生脉散方低剂量组70.335±0.073695.00±363.50优化新生脉散方给药1天组70.349±0.153918.67±962.70△优化新生脉散方给药3天组70.412±0.1001146.33±774.97□○☆注：与空白对照组相比，P＜0.01；与假手术组相比，P＜0.01；与模型对照组相比，P＜0.05-4- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn1353讨论[3]2014年发布的《慢性心力衰竭中医诊疗专家共识》指出，心衰的基本中医证候特征为本虚标实、虚实夹杂；本虚以气虚为主，标实以血瘀为主，常兼水饮等，气虚血瘀水饮证为心衰的基本证候类型。优化新生脉散方主要由黄芪、丹参、葶苈子、茯苓、党参、刺五加等组成，具有益气活血利水之功效。现代药理研究发现，黄芪的有效提取物黄芪皂苷能够抑[4]140制心肌细胞肥大，降低心肌细胞凋亡，改善心功能。丹参酮类和丹酚酸类具减少心肌纤维[5,6]+化，抗氧化能力，改善心脏的收缩功能。葶苈子水提物能增强心肌收缩性，促进Na、—Cl和水的排出，抑制RAAS和交感神经系统活性，减少血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素（ET）、[7-9]醛固酮(ALD)的生成而抑制心室重构。刺五加有效提取物刺五加皂苷能够提高心肌的抗氧[10,11]化能力，改善心功能。本研究结果显示，优化新生脉散方能够显著提高心衰大鼠LVEF，145且优于新生脉散方。[12]脑钠肽（BNP）是慢性心衰患者预后、危险分层以及诊断、判断疗效的重要指标。研究发现，N-末端脑钠肽前体（NT-ProBNP）与心室舒张压力、心室射血分数以及心功能密切相关，NT-ProBNP随着心衰加重而升高，并且与其左室射血分数呈负相关，可以用于心[13]衰的诊断和预后评估。本研究显示心衰大鼠血清NT-ProBNP水平显著升高，优化新生脉150散方能够降低心衰大鼠血清NT-ProBNP水平。综上所述，优化新生脉散方能够改善心衰大鼠的心功能，降低血清NT-ProBNP水平，其具体作用机制尚待深入研究探讨。[参考文献](References)[1]张健，陈兰英.心力衰竭[M].北京：人民卫生出版社，2011.155[2]王贤良，袁杨，毛静远，等.优化新生脉散方联合西药治疗慢性心力衰竭单病例交叉随机对照研究[J].中医杂志，2015，56（21）：1849-1853.[3]毛静远，朱明军.慢性心力衰竭中医诊疗专家共识[J].中医杂志，2014，55（14）：1258-1260.[4]ZhaoZ,WangW,WangF,etal.EffectsofAstragalosideIVonheartfailureinrats[J].ChinMed.2009,4(1):6.[5]FuJ,HuangH,LiuJ,PiR,ChenJ,LiuP.TanshinoneIIAprotectscardiacmyocytesagainstoxidative160stress-triggereddamageandapoptosis[J].EurJPharmacol.2007,568(1-3):213-221.[6]JiangB,ChenJ,XuL,etal.SalvianolicacidBfunctionedasacompetitiveinhibitorofmatrixmetalloproteinase-9andefficientlypreventedcardiacremodeling[J].BMCPharmacol.2010,10(1):10.[7]郭娟，陈长勋，沈云辉.葶苈子水提液对动物实验性心室重构的影响[J].中草药，2007，426（10）：1519-1523.165[8]孙凯，李铣.葶苈子化学成分和药理作用的研究进展[J].中草药，2002，33（07）：U003-U005.[9]张晓丹，范春兰，余迎梅，等.葶苈子水提液对CHF大鼠利尿作用的影响[J].中国现代应用药学，2010，27（03）：210-213.[10]李洋.刺五加叶皂苷对实验性心室重构的影响及其机制研究[D].吉林：吉林大学，2009.[11]刘冷，睢大员，曲绍春，等.刺五加叶皂苷对急性心肌梗塞大鼠心室重构的作用[J].吉林大学学报(医170学版)，2004，30（01）：66-70.[12]Odar-CederlofI,BjellerupP,WilliamsA,etal.Dailydialysesdecreaseplasmalevelsofbrainnatriureticpeptide(BNP),abiomarkerofleftventriculardysfunction[J].HemodialInt,2006,10(4):394-398.[13]EimerMJ,EkeryDL,RigolinVH,etal.ElevatedB-typenatriureticpeptidesystolicfunction[J].AmJCardiol,2004,94(5):676-678.175-5-'