发酵方式对银杏发酵液中功能性代谢成分的影响.pdf 9页

'中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn发酵方式对银杏发酵液中功能性代谢成分的影响**邓莉川，王淼，闫华5（江南大学食品学院，江苏无锡214122）摘要：醋酸菌GluconacetobactersaccharivoransL4发酵可代谢生产葡萄糖系列酸，其中葡萄糖二酸-1,4-内酯（DSL）具有解毒抗癌等功效；酵母菌Dekkeraanomala具有较强的耐酸能力，且可产生独特的风味物质。本文以制备一款高产葡萄糖系列酸且风味独特的功能性银杏10发酵饮料为目的，利用醋酸菌G.saccharivoransL4和酵母菌D.anomala进行菌种复配，研究了不同发酵方式对银杏发酵液中葡萄糖系列酸产量的影响。结果表明，酵母菌D.anomala和醋酸菌G.saccharivoransL4共同发酵的最佳复配比例为1：9，总接种量为1％，最适装液量为75mL/250mL，在该最适发酵条件下振荡培养7天，发酵液中DSL的产量可达5.88g/L；若葡糖醋杆菌L4先发酵，当总发酵时间一定（7d）时，酵母菌接种时间越晚，发酵液中15DSL的代谢产量越高，当葡糖醋杆菌L4先发酵4d（发酵液pH＞3.2）时添加酵母菌共同发酵，最终发酵液中DSL产量最高达7.98g/L，且具有良好的风味。关键词：发酵方式；银杏；醋酸菌G.saccharivoransL4；酵母菌D.anomala；DSL中图分类号：Q81520EffectsoffermentationparametersonfunctionalmetaboliccomponentsDENGLichuan,WANGMiao,YANHua(Foodtechnologyandscience,JiangnanUniversity,JiangsuWuxi214122)Abstract:GluconacetobactersaccharivoransL4canproduceaseriesofglucoseacids,including25gluconicacid,glucuronicacid,glucaricacid,andD-saccharicacid1,4-lactone(DSL).Inrecentyears,DSLhasbeenatopicofinterestbecauseofitsanti-toxicandanti-cancerproperties.Dekkeraanomala(akindofyeastwithacidresistance)couldimpartthetypicalflavoroffermentationtothebroth.Thisstudybeganwithexaminationoftheeffectsofdifferentfermentationparameters(culturemethod,inoculationratio,totalinoculationamount,andculturevolumeofG.saccharivoransL4andD.anomala)30onDSLproductioninthefermentationbroth.Resultsindicatedthatundertheoptimizedfermentationconditionsof1Y(yeast):9A(aceticacidbacteria)initialratio,1%totalinoculationamount,75mL/250mLculturevolume,andincubationinashakingincubator,theDSLconcentrationreached5.88g/Laftera7-dayfermentationperiod.Additionally,whenG.saccharivoransL4fermentedfirst,differenttimesofinoculationoftheyeastintothebrothhadacertainimpactontheDSLproduction.Wealso35demonstratedthatwhenthetotalfermentationtimewasfixedat7days,furtherdelayinyeastaddition(thepH>3.2)resultedinhigherDSLproductioninthefermentationbroth.Inoculationofyeastattheoptimumtime,after4daysoffermentationbyG.saccharivoransL4,resultedinthehighestyieldofDSLofupto7.98g/Landamoderateconcentrationof17.6ppmoftheflavoringsubstanceethylacetate.40Keywords:Fermentationparameters;Ginkgobroth;G.saccharivoransL4;Dekkeraanomala;DSL0引言银杏果品味甘美，口感香糯，历来作为药食同源物质稳立于保健食品行业，其富含淀粉、蛋白质、脂肪、钙、磷、铁、镁、钾、胡萝卜素、VB、VC、VD等营养成分，具有改善呼吸系统、改善微循环、降低血液黏度、耐缺氧作用、抗血栓、抗自由基、抗疲劳、抗作者简介：邓莉川（1991-），女，主要研究方向：食品生物技术通信联系人：王淼（1962-），女，教授、博导，主要研究方向：食品生物技术.E-mail:mwang@jiangnna.edu.cn-1- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn[1]45衰老、抗菌等作用。我国银杏资源丰富，但目前银杏果的附加值低，高品质产品稀少，缺[2]乏国际竞争力。葡糖醋杆菌GluconacetobactersaccharivoransL4可将葡萄糖和果糖转换成葡萄糖系列[3]酸，包括葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、葡萄糖二酸、葡萄糖二酸-1,4-内酯（DSL）等代谢产物。肠道中的β-葡萄糖醛酸酶可催化葡萄糖醛酸与内外源毒素、胆红素等物质结合，将致癌物[4][5]50前体转化为致癌物。而葡萄糖二酸及DSL能够有效抑制β-葡萄糖醛酸酶的活性，同时也可通过参与人体代谢活动调节体内激素环境（降低类固醇和部分非类固醇如泌乳刺激素含量）发挥化学防癌作用，预防和有效抑制如食道癌、结肠癌、激素依赖性癌症乳腺癌、肝癌、[6,7][8]皮肤癌和膀胱癌等病症，并具有降低胆固醇，治疗糖尿病等作用。此外，DSL有很强[9-11]的解毒和抗氧化性能，它可以抑制胰岛β细胞凋亡减轻四氧嘧啶(ALX)诱导的糖尿病[12][13]55，缓解盐酸伊立替康(CPT-11)引起的肠道黏膜损伤。单纯使用葡糖醋杆菌L4制备银杏果发酵饮料，虽然DSL产量较高，但产品风味不佳。酵母菌Dekkeraanomala具有较强的耐酸能力，且该菌中的β-葡萄糖苷酶具有较高的活性，通过酶的水解作用将二糖或三糖中的糖苷键解开，可释放出挥发性的香气化合物，增加产品[13]的香气，赋予发酵制品典型的风味。但添加酵母菌与葡糖醋杆菌L4共同发酵，两者均直60接消耗单糖，菌群之间的竞争可能对发酵液代谢产物的组成产生影响。因此，为了提高银杏果发酵液中葡萄糖系列酸的产量，有必要筛选出醋酸菌与酵母菌最佳的复配比例，以及最适合的培养方式、接种量、装液量等发酵条件，并记录它们在发酵过程中的变化，以达到工业化条件。1材料与方法651.1原材料与试剂银杏粉，江苏东台捷尔银杏科技有限公司；醋酸菌GluconatobatersaccharivoransL4、酵母菌Dekkeraanomala，由实验室筛选、分离鉴定；耐高温α-淀粉酶，河北百味生物科技有限公司，酶活20000U/g；糖化酶，酶活260000U/g；中性蛋白酶，天野生物技术有限公司，酶活20000U/g。701.2银杏提取液的制备称取一定量的银杏粉，以1:10的料液比制备银杏溶液，搅拌均匀，添加200U/g耐高温a-淀粉酶于90℃恒温水浴锅中糊化、液化20min后取出冷却，再同时添加3900U/g糖化酶和1600U/g中性蛋白酶于55℃下酶解3h后灭酶，离心过滤得到上清液，煮沸灭菌30min后于4℃冰箱保藏备用。751.3酵母与醋酸菌培养方式的选择酵母和醋酸菌分别接种于银杏提取液中，置于29±1℃下的静止和振荡培养箱中培养，前期每隔6h测一次生长密度，2d后每隔24h测一次，用logCFU/mL单位来表示，绘制生长曲线。无菌环境下以5％总接种量、复配比为1Y9A的酵母和醋酸菌同时接种于装有100ml银80杏酶解液的250ml锥形瓶中，分别置于29±1℃的恒温和振荡培养箱中静止和摇床培养12天，-2- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn每隔2d取样，测定发酵液中的DSL产量、还原糖量和总酸度。1.4酵母与醋酸菌不同发酵条件的筛选表1酵母菌与醋酸菌的不同发酵条件Tab.1DifferentfermentationconditionsofYeastandGluconacetobacter发酵条件总接种量(%)复配比例(Y:A)装液量(mL/250mL)159:1,8:2,7:3,6:4,5:5,4:6,3:7,2:8,1:9,0:1010021,3,5,7,91:9100351:950,75,100,125,15085表1中的不同发酵条件下的样品均置于29±1℃的振荡培养箱中培养7天，取样过0.22μm膜，高效液相测定发酵液中的代谢产物DSL及其他葡萄糖系列酸、醋酸的产量。1.5酵母与醋酸菌培养时间的选择无菌环境下以总接种量1％将已活化的葡糖醋杆菌L4与酵母菌D.anomala的种子液以9：1（v/v）的复配比例同时接种于装有75ml银杏酶解液的250ml锥形瓶中，于30℃、150rpm90转速的振荡培养箱中摇床培养7d，每隔1天取样离心过滤，测定发酵液的pH、还原糖含量、总酸度，同时取样过0.22μm滤膜，测定发酵液中的代谢产物DSL及其他葡萄糖系列酸、醋酸的产量。1.6酵母菌接种时间的选择酵母菌与醋酸菌复配比为1Y9A(v/v)，先将醋酸菌接种于银杏提取液中分别培养1d、952d、3d、4d、5d，再接种酵母菌，总发酵时间为7d，以只添加一定比例的醋酸菌发酵和两菌同时接种发酵做对照，测定发酵液中功能性代谢产物、还原糖含量及接种酵母前后发酵液的pH。2结果与讨论2.1培养方式对银杏发酵液的影响1002.1.1培养方式对菌种生长曲线的影响[14]葡糖醋杆菌L4是严格好氧型细菌，生长代谢过程中对氧气的要求比较高，酵母菌D.anomala是兼性厌氧型真菌，有氧环境下将葡萄糖转化为CO2和H2O，无氧环境下将葡萄糖转化为CO2和乙醇。由图1a可以看到，在静止发酵条件下，酵母菌迅速进入对数期（12~72h），明显快于105醋酸菌（24~144h）。由图1b可以看到，葡糖醋杆菌L4和酵母菌D.anomala在摇床培养下均迅速进入对数期，其中葡糖醋杆菌L4约24h进入稳定期后又很快进入衰老期，且衰老速度较快，而酵母菌D.anomala约48h进入稳定期后菌落数量基本保持稳定。对比图1可以看到，葡糖醋杆菌L4和酵母菌D.anomala在摇床培养下菌落数量的最高点均明显高于静止培养。110-3- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn(a)(b)9.09.58.59.0)8.58.0-1)-18.07.57.57.0logCFUmLlogCFUmL(7.0(6.56.56.0生长密度生长密度6.05.5DekkeraanomalaDekkeraanomala5.5GluconacetobactersaccharivoransGluconacetobactersaccharivorans5.05.0024487296120144168024487296120144168发酵时间（h）发酵时间（h）图1静止（a）和摇床（b）培养下葡糖醋杆菌L4和酵母菌D.anomala的生长曲线Fig.1ThegrowthcurveofG.saccharivoransL4andD.anomalaseparately(a)understaticcultureand(b)shakingculturecondition1152.1.2培养方式对银杏发酵液中代谢产物的影响由图2a可以看到，摇床培养条件下，DSL的代谢速率明显较快且持续增长，静止培养时DSL的代谢速率较慢，在发酵后期才有所增长。由图2b可以看到，混合菌在摇床培养下还原糖量迅速下降至8d后趋近于零，总酸度迅速上升至8d后呈现下降趋势；而在静止培养下还原糖量下降速度较慢，发酵12d后还原糖量趋近于1g/100mL，还原糖利用率明显低于120摇床培养，且发酵液总酸度上升较慢，总酸度较低。综合考虑，选择在摇床环境下进行发酵培养，提高生产效率。(a)(b)5.0静止培养830振荡培养4.57254.063.520)5-13.0gL4(152.5(g/100mL)产量3(g/100mL)2.010DSL21.5总酸度还原糖残量151.00.500024681012024681012发酵时间（d）发酵时间（d）注：□静止总酸度；■静止还原糖残量；△摇床总酸度；▲摇床还原糖残量图2静止和摇床混合培养时发酵液中DSL产量的变化（a）和总酸度及还原糖残量的变化（b）125Fig.2(a)DSLconcentration;(b)TotalacidityandthereducingsugarcontentintheGinkgobrothseparatelyunderstaticandshakingcultureconditions由于摇床培养下，葡糖醋杆菌L4和酵母菌D.anomala生长速率快，菌落数多，醋酸菌迅速消耗还原糖转化葡萄糖系列酸，同时将酵母菌代谢产生的乙醇迅速转化为醋酸，总酸度迅速上升，但随着发酵时间的增加，在氧气充足、糖源不足的环境下，发酵液中的醋酸会[15]130进一步氧化为CO2和H2O，所以在还原糖量趋于零的8d后总酸度逐渐下降。因此，在摇床环境下进行发酵时间不宜过长。2.2复配比例对银杏发酵液中代谢产物的影响酵母菌与醋酸菌的比例对于其代谢产物的产量至关重要。由于发酵基质是经酶解处理-4- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn过的含有丰富的可直接被菌种吸收利用的可发酵型单糖，酵母菌和醋酸菌在培养液中均直接[16]135消耗单糖，两者会形成竞争体系，若增加其中一个菌的数量可能会迅速生长，分布相对更广从而支配另一个菌群，通过微生物之间的竞争对代谢产物的组成产生影响。(a)(b)7306255)-1)20-1gL4(gL(15产量3醋酸产量10DSL25100A1Y9A2Y8A3Y7A4Y6A5Y5A6Y4A7Y3A8Y2A9Y1AA1Y9A2Y8A3Y7A4Y6A5Y5A6Y4A7Y3A8Y2A9Y1A复配比例复配比例图3不同复配比例对发酵液中代谢产物DSL产量（a）及醋酸产量（b）的影响Fig.3Theeffectofratioson(a)DSLconcentrationand(b)theyieldofaceticacidinGinkgobroth140由图3可以看到，当酵母菌比例小于醋酸菌时，DSL的产量明显增加，而醋酸产量则逐渐减小。当复配比例为1Y9A时发酵液的代谢产物DSL产量(4.65±0.2g/L)明显高于其他复配比例(3.6±0.2g/L)，但低于仅用葡糖醋杆菌L4发酵代谢的DSL产量(6.4±0.2g/L)。由图1b可知，在氧气、糖源均较为充足的情况下，酵母菌和醋酸菌生长速率均很快，但是酵母菌生长菌落数量级明显比醋酸菌高，因此，酵母菌所占比例越高（≤5Y），酵母菌迅速生145长而占据发酵液微生物群的主体位置，消耗单糖转化为乙醇，再由醋酸菌转化为乙酸，从而导致乙酸产量增加，DSL产量则相对减少。当酵母菌比例大于醋酸菌时，DSL的产量有略微上升趋势。可能是由于D.anomala酵[17]母通过生产乙醇，提高醋酸产量，抑制糖酵解，从而刺激葡萄糖系列酸的生成。另外，肉桂酸不利于微生物的繁殖生长，D.anomala酵母可以将含苯乙烷基酸类代谢转化成乙烷基[18]150苯酚或其衍生物，从而减少有毒物质。这不仅可以为发酵饮料提供特殊香气，还可以促[19][20]进醋酸菌的生长，DSL的浓度因此也会有所增长。因此，虽然添加酵母菌在一定程度上会减少功能性成分DSL的代谢产量，但少量的酵母菌也可以促进醋酸菌的生长，且为发酵饮料提供香气，所以，选择酵母菌D.anomala与醋酸菌G.saccharivoransL4的复配比例为1:9较合适。1552.3接种量对银杏发酵液中代谢产物的影响由图4可以看到，随着接种量的增加，DSL产量逐渐减少，醋酸产量逐渐增大后减少，接种量为1％时，葡萄糖系列酸总产量明显较高，可作为菌种复配的最适接种量。醋酸菌与酵母菌复配比例相同，总接种量增大，两菌添加量也相对增加。在总发酵时间一定时，发酵初期醋酸菌接种量较多，菌体生长迅速进入对数期，代谢葡萄糖系列酸的速160率较快，但随着pH迅速下降，发酵液中菌体的生长受到抑制，发酵后期葡萄糖系列酸代谢速率减慢；反之则反。同样，总接种量增大，酵母菌添加量相对增加，且单位体积内酵母菌的增加量比醋酸菌高1个数量级，菌体迅速生长，乙醇产量增高，导致醋酸含量增大。-5- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn50DSL葡萄糖系列酸45醋酸4035)30-1gL25(20产量1510501％3％5％7％9％总接种量图4不同接种量对发酵液中代谢产物产量的影响165Fig.4TheeffectofinoculationamountsontheyeildoffunctionalmetaboliccomponentsinGinkgobroth2.4装液量对银杏发酵液中代谢产物的影响装液量直接影响菌种发酵的溶氧量，氧气充足可促进菌的生长代谢，但氧气过量也会对菌的生长造成负面影响。由图5可以看出，当装液量大于75ml/250mL时，DSL产量随着装液量的增加而减小，醋酸产量在装液量为100ml/250mL时达到最大后也逐渐减小。当装170液量为50ml/250mL时，DSL(3.82±0.1g/L)和醋酸(12.20±0.1g/L)的产量明显低于装液量为75ml/250mL的产量（DSL:5.65±0.2g/L,醋酸:13.65±0.2g/L），可能当氧气过于充足时，醋酸菌生长速度加快，发酵液pH迅速下降，细胞提前进入衰老期，从而导致细胞的代谢产物减少。因此，菌种复配的最适装液量为75ml/250mL。DSL45葡萄糖系列酸醋酸403530)-125gL(20产量1510505075100125150装液量（mL/250mL）175图5不同装液量对发酵液中代谢产物产量的影响Fig.5TheeffectofculturevolumesontheyeildoffunctionalmetaboliccomponentsinGinkgobroth2.5培养时间对银杏发酵的影响由图6a可以看到，可以看到，葡萄糖系列酸及DSL总产量发酵前4d增长较慢，4~7d迅速增长后又缓慢增加，醋酸产量增加至7d后逐渐减少；由图6b可以看到，pH由原始6.27180逐渐减小至3.02，7d后趋于平衡；还原糖消耗率也逐渐增加至7d后趋于稳定。因此，菌种复配的最适培养时间可选为7d。-6- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn(a)DSL(b)还原糖消耗率4.240醋酸pH值葡萄糖系列酸90354.030803.8）)25%-1（3.6gL70(20值3.4pH产量15603.210还原糖消耗率503.050402.81234567812345678发酵时间（d）发酵时间（d）图6不同培养时间下发酵液中代谢产物产量（a）和理化指标（b）的变化Fig.6Theeffectofculturetimeon(a)theyeildoffunctionalmetaboliccomponentsand(b)pHlevel,consumed185reducingsugarinGinkgobroth由上述数据可知，混合菌在以1％的总接种量、1Y9A的复配比例、75ml/250mL的装液量的条件下振荡发酵7d，各功能成分及各理化指标均趋于稳定，其中DSL产量达5.88±0.2g/L，醋酸产量达21.87±0.4g/L。2.6酵母菌接种时间对醋酸菌发酵银杏过程中代谢产物及风味的影响190已知葡糖醋杆菌L4与酵母菌共同发酵的代谢产物DSL明显比单纯发酵葡糖醋杆菌L4少很多，因此我们可以大胆假设，总发酵时间一定时，先发酵葡糖醋杆菌L4一段时间，在合适的时机添加酵母菌共同发酵，可以得到更多的功能性代谢产物DSL，同时得到较好的风味。(a)(b)DSL葡萄糖系列酸6.56050醋酸6.04550405.5）值4035ppm5.0)pH-1（gL304.5(30254.0产量2020酵母接种时的乙酸乙酯产量3.515103.0102.5050d1d2d3d4d5d0d1d2d3d4d5d对照酵母接种时间酵母接种时间(c)(d)还原糖消耗率3.102.0发酵液pH值911.83.05）901.63.00600nm1.4）%891.22.95值pH1.0882.900.887发酵液酵母生长浓度（0.62.85还原糖消耗率（0.4862.800.2D.anomala0.0852.750d1d2d3d4d5d对照3.03.54.04.55.05.56.0酵母接种时间pH值195图7发酵液的初始pH（a）、发酵液中功能性代谢产物及乙酸乙酯的产量（b）、还原糖消耗率及发酵液-7- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cnpH值在酵母菌不同接种时间下的变化（c）及不同pH环境下D.anomala酵母的生长密度（d）Fig.7InitialpH(a),theyeildoffunctionalmetaboliccomponentsandEthylacetateconcentration(b),theconsumedreducingsugar(%)andfinalpHleveloffermentationbrothatdifferentinoculationtimeofD.anomala(c)andthegrowthdensityofyeastatdifferentpHs(d).200由图7a可以看到酵母接种时间越晚，醋酸菌单独发酵时间越长，发酵液pH则越低，随着发酵时间的增加，pH在发酵前2天从6.27迅速下降到3.72，分别在第3、4、5天降至3.43、3.22、2.98。已知当pH≤3.2时，酵母菌D.anomala生长受到抑制，当pH>3.2时，其生长密度逐渐增大（图7d）。因此，pH越低，酵母菌生长速率越低，乙醇产量越少，醋酸产量则越少，葡萄糖系列酸和DSL产量则相对越多；同时乙酸乙酯的产量也随着酵母接种205时间的推迟而减少（图7b）；pH越低，微生物数量越少，还原糖消耗率和总酸度则越低。当酵母菌在醋酸菌发酵第5d（pH2.98）接种时，酵母菌的生长受到抑制，功能成分的代谢产量、风味物质、pH及还原糖消耗率与葡糖醋杆菌L4单独发酵的各项指标基本一致。结果表明在醋酸菌发酵第4d（发酵液pH>3.2）时添加酵母菌共同发酵7d最佳，该条件下，DSL产量高达7.98g/L，比两菌同时发酵多2.10g/L，且风味物质乙酸乙酯产量适量，210达17.6ppm。3结论银杏资源广且营养丰富，但目前利用价值较低。本文将银杏经水解预处理后得到含有小分子营养物质的银杏提取液，可供微生物及人体吸收利用，从而作为发酵基质发酵酵母菌D.anomala和醋酸菌G.saccharivoransL4。实验发现两者共同发酵的最佳复配比例为1:9，215总接种量为1％，最适装液量为75mL/250mL，在该最适发酵条件下振荡培养7天，发酵液中DSL的产量可达5.88g/L。为提高DSL产量，尝试先发酵葡糖醋杆菌L4再接种酵母菌共同发酵，结果发现，当总发酵时间为7d时，酵母菌接种时间越晚，发酵液中DSL的代谢产量越高，风味物质乙酸乙酯含量则越低，当葡糖醋杆菌L4先发酵4d，即发酵液pH＞3.2时添加酵母菌共同发酵，最终发酵液中DSL产量最高达7.98g/L，且具有良好的风味。220[参考文献](References)[1]钟华锋.银杏山药复合饮料的研制[J].食品研究与开发，2014，35(5)[2]NguyenKhoiNguyen,PhuongBangNguyen,HuongThuyNguyen,PhuHongLea.Screeningtheoptimalratioofsymbiosisbetweenisolatedyeastandaceticacidbacteriastrainfromtraditionalkombuchaforhigh-levelproductionofglucuronicacid[J].LWT-FoodScienceandTechnology,2015,64:1149-1155.225[3]宋廷懋.我国银杏制品市场的现状和未来[J].家庭医药，2012.[4]BrownJM,Manley-HarrisM,FieldRJ,etal.AnNMRStudyoftheequilibrationofD-glucaricacidwithlactoneformsinaqueousacidsolutions[J].JCarbohydChem,2007,26(8/9):455-467.[5]MarshC.MetabolismofD-glucuronolactoneinmammaliansystems.FurtherstudiesofD-glucuronolactonedehydrogenaseofratliver[J].BiochemJ,1963,89(1):108-114.230[6]BespalovVG,AleksandrovVA.Anticarcinogeniceffectofpotassiumsaltsofglucaricandglucuronicacidininducedmodelsofcervicalandesophagealtumors[J].VoprOnkol,2012,58(4):537-540.[7]OredipeOA,BarthRF,DwivediC,etal.Dietaryglucarate-mediatedinhibitionofinitiationofdiethylnitrosamine-inducedhepatocarcinogenesis[J].Toxicology,1992,74(2):209-222.[8]ZoltaszekR,HanausekM,KilianskaZM,etal.ThebiologicalroleofD-glucaricacidanditsderivatives:235potentialuseinmedicine[J].PostepyHigMedDosw,2008,62:451-462.[9]NakajimaM,IrimuraT,NicolsonGL.Asolid-phasesubstrateofheparanase:itsapplicationtoassayofhumanmelanomaforheparansulfatedegradativeactivity[J].AnalBiochem1,1986,57(1):162-171.[10]Saluk-JuszczakJ.Acomparativestudyofantioxidativeactivityofcalcium-D-glucarate,sodium-D-gluconateandD-glucono-1,4-lactoneinahumanbloodplateletmodel[J].Platelets,2010,21(8):632-640.240[11]WangRC,NeohTL,KobayashiT,etal.Antioxidativecapacityofthedegradationproductsofglucuronicandgalacturonicacidfromsubcriticalwatertreatment[J].ChemEngTechnol,2011,34(9):1514-1520.-8- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn[12]BhattacharyaS,MannaP,GachhuiR,etal.D-saccharicacid1,4-lactoneprotectsdiabeticratkidneybyamelioratinghyperglycemia-mediatedoxidativestressandrenalinflammatorycytokinesviaNF-κBandPKCsignaling[J].ToxicolApplPharmacol,2013,267(1):16-29.245[13]FittkauM,VoigtW,HolzhausenHJ,etal.Saccharicacid1,4-lactoneprotectsagainstCPT-11-inducedmucosadamageinrats[J].JCancerResClinOncol,2014,130(7):388-394.[14]FengJ,QingshanShi,YoushengOuyang,Yibenchen.ResearchprogressofGluconacetobacter[J].Chemicalandbiologicalengineering,2009,26(5).[15]王硕.醋酸菌的分离与鉴定以及红茶菌培养的研究[D].安徽：安徽农业大学，2008.250[16]Hibbing,M.E.,Fuqua,C.,Parsek,M.R.,&Peterson,S.B.Bacterialcompetition:survivingandthrivinginthemicrobialjungle[J].NatureReviewsMicrobiology,2010,8:15-25.[17]Freer,S.N.,Dien,B.,&Matsuda,S.ProductionofaceticacidbyDekkera/BrettanomycesyeastsunderconditionsofconstantpH[J].WorldJournalofMicrobiology&Biotechnology,2003,19(1):101-105.[18]DuncanA.N.Edlin,ArjanNarbad,MichaelJ.Gasson,J.RichardDickinson,andDavidLloyd.Purificationand255characterizationofhydroxycinnamatedecarboxylasefromBrettanomycesanomalus[J].EnzymeandMicrobialTechnology,1998,22:232-239.[19]NicolasBuron,MonikaCoton,PatrickLegendre,JérômeLedauphin,ValérieKientz-Bouchart,HuguesGuichard,DanielBarillier,EmmanuelCoton.ImplicationsofLactobacilluscollinoidesandBrettanomycesD.anomalainphenolicoff-flavourdefectsofciders[J].InternationalJournalofFoodMicrobiology,2012,153:260159-165.[20]Schifferdecker,A.J.,Dashko,S.,Ishchuk,O.P.,&Pi_skur,J.ThewineandbeeryeastDekkerabruxellensis[J].Yeast,2014,31:323-332.-9-'