锁掷酵母油对血脂异常小鼠脂代谢影响的研究.pdf 10页

'中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn锁掷酵母油对血脂异常小鼠脂代谢影响的#研究**应丹瑜，杜超，张伟国，钱和5（江南大学食品学院，无锡214122）摘要：本实验对锁掷酵母油改善血脂异常小鼠血脂代谢的效果和机制进行了研究。从60只8周龄雄性昆明小鼠中随机挑选10只作为空白对照组（BC），剩余50只用高脂膳食喂养4周建立血脂异常模型。随后将模型小鼠随机分为5组：高脂模型组（HM）、酵母油低（SL）、10中（SM）、高（SH）剂量组和多烯康组（PC），进行灌胃给药。高脂饲料喂养8周后处死小鼠，分别测定血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量；显微镜观察肝脏、脂肪组织切片；RT-PCR测定肝脏组织脂代谢相关基因表达。结果显示，与高脂模型相比，酵母油能够不同程度地减轻小鼠体重，降低血清TC、TG值，且SL组变化不大。RT-PCR结果表明，高脂小鼠肝脏SREBP-1c、15FAS、ACC、CPT-1表达均显著上升；与高脂组相比，SH、SM组均能够显著下调SREBP-1c和ACC的mRNA表达，上调CPT-1表达。结果表明锁掷酵母油具有良好的降血脂功效，且降TC、LDL-C效果优于多烯康。关键词：营养与食品卫生；血脂异常；CPT-1中图分类号：R15120EffectsofS.pararoseusoilonlipidmetabolisminthedyslipidemiamiceYINGDanyu,DUChao,ZHANGWeiguo,QIANHe(FoodScienceandTechonlogySchool,JiangnanUniversity,214122)25Abstract:ThispaperwasdesignedtoinvestigatethebeneficialeffectsofS.pararoseusoilonthelipidmetabolisminKunmingmicefedwithahigh-fatdiet.Tenmicewererandomlyselectedfrom60miceascontrolgroup(BC)andtherest50micewerefedwithahigh-fatdiettobeadyslipidemiamodle.After4weeks,The50micewererandomlydividedinto5groups:high-fatmodelgroup(HM),lowdoseofS.pararoseusoil(SL),middledoseofS.pararoseusoil(SM),highdoseofS.pararoseus(SH)and30doxicongroup(PC).Themiceweresacrificedaftereightweeksandtheconcentrationoftotalcholesterol(TC),triglyceride(TG),highdensitylipoproteincholesterol(HDL-C)andlowdensitylipoproteincholesterol(LDL-C)inserumweremeasured.Liverandfathistologicalanalysiswasperformedbymicroscopy.ThemRNAexpressionofSREBP-1c、FAS、ACCandCPT-1inliverweremeasuredbyRT-PCR.ComparedwiththeHMgroup,thebodyweight,serumTC,TGlevelof35high/middledoseofS.pararoseusoilgroupweresignificantlydecreased.RT-PCRresultshowedthattheexpressionofSREBP-1c、FAS、ACCandCPT-1weresignificantlyup-regulatedinhigh-fatgroup.Comparedwithhigh-fatgroup,high/middledoseofS.pararoseusoilgroupweresignificantlydecreasedtheexpressionofSREBP-1candACC,increasedthemRNAexpressionofCPT-1.TheresultsimpliedthattheS.pararoseusoilhavebeneficialeffectsonthecontrolofserumlipidandit40havemorebeneficialeffectsonthecontrolofTCthandoxiconwhileithavelesseffectsonthecontrolofTGthandoxicon.Keywords:NutritionandFoodHygiene;Dyslipidemia;CPT-1基金项目：“十二五”规划国家重点技术研发项目（2012BAD36B02，2015BAD16B01）作者简介：应丹瑜（1992-），女，硕士研究生，主要研究方向：天然产物开发利用通信联系人：钱和（1962-)，女，教授，主要研究方向：食品安全与质量控制.E-mail:amtf168@126.com-1- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn0引言45近二三十年来，随着生活水平的提高，居民饮食中的脂肪和碳水化合物摄入增加，我国人群血脂水平迅速升高，血脂异常已成为我国重要的公共卫生问题。血脂异常是指人体血液中脂类物质组成及浓度异常，以及某些脂类代谢物异常堆积所导致的器官、系统功能紊乱，一般是指血总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）超过正常[1,2]值及/或高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）低下。血脂异常与心血管疾病、糖尿病、代谢综50合征等疾病的发生密切相关，而降脂治疗能够降低此类疾病的风险。[3]本实验室从自然界中筛选并诱变得到一支锁掷酵母（SporidioboluspararoseusJD-2）。[4,5]前期研究可知，锁掷酵母能累积大量油脂，含量约为酵母粉的50%；通过对其所提取油脂的成分分析可知，锁掷酵母油富含大量不饱和脂肪酸，且含有类胡萝卜素、角鲨烯、麦角[6][7]固醇等营养物质。不饱和脂肪酸已被证实能够有效调节血脂，预防心血管疾病；麦角固55醇是一种植物固醇，它能抑制胆固醇的吸收，从而降低血液胆固醇水平；类胡萝卜素具有维[8]生素源活性，具有抗氧化活性。综上所述，初步推测锁掷酵母油脂可能具有良好的调节血脂作用。本实验从锁掷酵母中提取油脂并进行分析，通过与降脂药物多烯康的比较，探究酵母油干预对血脂异常小鼠血脂代谢紊乱的改善效果，为其后期的开发及推广应用提供理论依据。601材料与方法1.1材料1.1.1样品制备锁掷酵母（SporidioboluspararoseusJD-2）从自然界中筛选并保藏于中国典型菌种保藏[2]中心，保藏号：CCTCCM2010326。锁掷酵母培养方法参考韩梅等人的方法。用去离子水65洗涤酵母发酵液两遍，离心得酵母细胞。用去离子水稀释酵母细胞后，过高压均质机破壁，50Mpa条件下均质5次。再次离心，所得破壁酵母细胞加入乙酸乙酯萃取，混合液搅拌10min后用旋转蒸发仪（40℃）蒸去乙酸乙酯溶剂，得到锁掷酵母油，置于-80℃保存。1.1.2其他材料与设备β-胡萝卜素、麦角固醇、角鲨烯标准品（美国Sigma公司）、甘油三酯（TG）、总胆70固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）试剂盒（南京建成生物工程研究所）；其他试剂均为分析纯。RNA提取试剂盒（美国Biomiga公司）；cDNA逆转录试剂盒、实时荧光定量试剂盒（上海捷瑞生物工程有限公司）。AB204-N电子分析天平、PL2002电子分析天平（MettlerToledo仪器有限公司）；5804R冷冻离心机（德国Eppendorf公司）；CM1950冷冻切片机、ModellRM2235组织切片机（德75国Leica公司）；Cobas-c501自动生化分析仪（德国Roche公司）；M5酶标仪（美国Molecular-2- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cnDevices公司）；Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司）；OneDrop超微量分光光度计（美国Thermo公司）；实时荧光定量PCR仪（美国AppliedBiosystems公司）。1.2方法1.2.1样品主要成分测定80样品脂肪酸成分分析参考国家标准GB/T17377-2008；总类胡萝卜素含量测定参考施秋[9][6]妤的方法，总麦角固醇和角鲨烯含量测定参考韩梅等人的方法。1.2.2动物实验选取8周龄昆明种雄性小鼠60只（苏州斯莱克实验有限责任公司），基础饲料适应性喂养7天后眼眶静脉丛采血，测定血清TC、TG、HDL-C和LDL-C水平。随机挑选10只[10]85小鼠作为空白对照组（BC），饲料参照美国营养学会推荐的AIN-93M实验动物饲料配方配制而成，剩余50只小鼠喂以高脂饲料，饲料组成为78.8%基础饲料、1%胆固醇、20%猪油和0.2%胆酸钠。饲喂4周后眼眶采血，再次测定血脂四项水平，与4周前对比血脂变化。再根据TC水平将饲喂高脂饲料的50只小鼠进行随机分组，分别为高脂模型组（HM）、酵母油低剂量90组（SL）、酵母油中剂量组（SM）、酵母油高剂量组（SH）和多烯康组（PC），将酵母油和多烯康溶于3‰的蔗糖脂肪酸酯溶液进行经口灌胃，具体内容见表1。表1给药期间的喂养与灌胃内容Tab.1Fodderandgavagecontentsforthemice组别饲料灌胃内容物空白对照（BC）AIN-93M3‰蔗糖脂肪酸酯溶液高脂模型（HM）高脂饲料3‰蔗糖脂肪酸酯溶液酵母油低剂量（SL）高脂饲料酵母油0.8g/kgbw酵母油中剂量（SM）高脂饲料酵母油1.6g/kgbw酵母油高剂量（SH）高脂饲料酵母油3.2g/kgbw多烯康（PC）高脂饲料多烯康1.6g/kgbw分别于饲养的第0、2、4、6、8、10周进行眼眶静脉丛采血，用于血脂测定。给药895周后结束实验，乙醚麻醉，摘取眼球，收集血样，断颈处死。迅速取肝脏、肾脏、肺、心脏、睾周脂等脏器，并在预冷的生理盐水中清洗后称重；切取适当大小肝脏组织和睾周脂组织浸泡于福尔马林溶液中，充分固定后制作组织切片，用于组织病理学研究。整个实验期间，小鼠自由进食。每日观察小鼠的自主活动、反应性、饮水饮食、粪便排泄、毛发光泽等，每周称重一次，记录体重变化，每3天一次记录进水量与摄食量。1001.2.3血液指标检测小鼠禁食12h后眼眶取血，室温静置4h，3000rpm、4℃离心10min分离制备血清。所得的血清用Cobas-c501自动生化分析仪检测TC、TG、HDL-C、LDL-C含量。动脉粥样-3- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn硬化指标（atheroclerosisindex,AI）=（TC—HDL-C）/HDL-C。1.2.4肝脏、脂肪组织HE染色105肝脏和脂肪组织在中性甲醛溶液中充分固定，经脱水、包埋、切片、HE染色后，在光学显微镜下观察组织结构及病理变化。1.2.5肝脏组织中SREBP-1c、FAS、ACC、CPT-1基因表达的测定提取小鼠肝脏组织总RNA，以260nm/280nm光吸收比值（1.80-2.00）鉴定RNA纯度，逆转录合成cDNA。以β-actin为内参，对目的基因进行RT-PCR扩增，目的基因表达量根110据Ct值法，引物序列见表2。表2实时荧光定量PCR引物序列Tab.2Sequenceofprimersforquantitativereal-timePCR目标基因上游/下游引物序列（5’-3’）Forward:CTGCTTGGCTCTTCTCTTTSREBP-1cReverse:CTTGTTTGCGATGTCTCCForward:TTCGGTGTATCCTGCTGTFASReverse:GGCTTGTCCTGCTCTAACTForward:GGCAGCAGTTACACCACATACACCReverse:TCATTACCTCAATCTCAGCATAGCForward:GAGAGGGGAGGACAGAGACPT-1Reverse:ACACCACATAGAGGCAGAAGForward:GGGAAATCGTGCGTGACβ-actinReverse:AGGCTGGAAAAGAGCCT1.3数据统计和数据分析各组数据以平均值±标准差（x±s）表示。采用SPSS19.0（美国SPSS公司）one-way115ANOVA及Duncan检验进行分析比较，P＜0.05则认为存在显著性差异。2结果与讨论2.1样品主要成分分析锁掷酵母油室温下呈液态，为透亮的深红色。本实验对所提取的锁掷酵母油进行了脂肪[6]酸组成分析，并根据韩梅等人进行的前期研究对酵母油中主要营养物质的含量进行了测120定。由表3、4可知，锁掷酵母油的脂肪酸主要成分为不饱和脂肪酸，其中油酸含量为71.46%，亚油酸为5.38%，其次饱和脂肪酸棕榈酸含量为17.23%，硬脂酸为2.15%。锁掷酵母油中还含有丰富的营养物质，其中类胡萝卜素的含量为0.41g/kg，角鲨烯含量为1.46g/kg，总麦角固醇含量为3.13g/kg。-4- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn125表3锁掷酵母油中主要营养物质含量Tab.3ThemaincompositionsofS.pararoseusoil成分含量（g/kg）类胡萝卜素总量0.41±0.01角鲨烯1.46±0.03总麦角固醇3.13±0.06表4锁掷酵母油的脂肪酸组成Tab.4ThefattyacidcompositionofS.pararoseusoil成分含量（%）C14:0Tetradecanoicacid0.99C16:0Hexadecanoicacid17.23C16:1(Z)-7-Hexadecenoicacid0.23C16:1(Z)-9-Hexadecenoicacid0.73C18:0Octadecanoicacid2.15C18:1(Z)-9-Octadecenoicacid71.46C18:2(Z,Z)-9,12-Octadecadienoicacid5.38C18:3(Z,Z,Z)-9,12,15-Octadecatrienoicacid0.35C20:0Eicosanoicacid0.54C20:111-Eicosenoicacid0.28C22:0Docosanoicacid0.43C24:0Tetracosanoicacid0.232.2小鼠基本生理情况130表5锁掷酵母油对血脂异常小鼠体重的影响Tab.5EffectofS.pararoseusoilonbodyweightinhighfatdiet-fedmice组别剂量体重（g）（g/kgbw）造模初造模终/给药初给药终给药期间增长量a45.29±2.71aaa空白对照（BC）—35.59±1.3651.54±3.486.24±1.14a51.52±3.75bcc高脂模型（HM）—35.36±1.0263.98±5.4312.46±2.23a51.85±3.83bcc酵母油（SL）0.835.65±1.3764.09±5.0312.24±1.98a51.34±3.80bbcb酵母油（SM）1.635.67±1.0060.24±5.218.90±1.71a51.07±3.97bbb酵母油（SH）3.235.75±1.3459.08±4.808.01±1.14a51.66±4.13bcc多烯康（PC）1.635.69±1.6463.69±5.3412.03±1.51实验期间，各组小鼠生长良好，未出现异常行为，无腹泻及死亡现象。高脂饲料喂养小鼠普遍行动迟缓，行为笨重，易于抓取，而给予酵母油和多烯康灌胃的小鼠此类现象有明显改善，这可能与不饱和脂肪酸、抗氧化功能因子对小鼠的体重与血脂有所改善有关。135由表5可知，实验初期（造模初）各组小鼠的体重无显著差异，造模结束时，BC组体重显著低于其他5组，且该5组小鼠之间无显著差异。这是由于小鼠每日能量摄入高于BC，-5- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn过多的能量摄入导致小鼠体重增长。给药结束后，HM组小鼠体重显著高于其他5组。对比6组小鼠给药期间的体重增长量可知，HM组的体重增长量最大，且与SL、PC组的增长量无显著差异；BC组的增长量最小；SH、SM组的增长量介于它们之间。可见，锁掷酵母油140对小鼠体重增长有良好的控制作用。2.3锁掷酵母油对血脂异常小鼠血脂水平的影响血浆中的脂质统称为血脂，包括胆固醇、甘油三酯、磷脂等。这些脂质并不是以游离状态存在，而是与血浆蛋白结合形成可溶性脂蛋白，便于生物体内各组织间的脂质转运。HDL和LDL都是血浆脂蛋白——HDL由肝细胞和小肠粘膜细胞合成，主要功能是运载周围组织[11]145中的胆固醇到肝脏进行代谢，防止脂质在动脉壁沉积造成动脉粥样硬化；LDL富含脂类，是乳糜微粒和极低密度脂蛋白（VLDL）的代谢产物，是肝脏向肝外组织运输胆固醇的主要形式。临床对血脂的分析具有重要意义，当人体对血脂的调节发生障碍时，血液中胆固醇和甘油三酯的浓度增高，使一些原本不能渗入动脉壁的血脂也渗透进去，并且沉积在动脉内膜，引起动脉粥样硬化，引发一系列心血管疾病。流行病学研究已证实，HDL和LDL是心血管[12,13]150疾病发生的独立危险因素，降低血浆LDL水平和（或）升高血浆HDL水平能够降低心[14-19]血管疾病的风险。表6造模结果对照Tab.6Comparisonofbasicmiceandhighfatdiet-fedmiceaftermolding组别TC（mmol/L）TG（mmol/L）HDL-C（mmol/L）LDL-C（mmol/L）AI空白对照2.07±0.191.34±0.101.06±0.200.35±0.050.98±0.19造模小鼠4.76±0.47*1.63±0.32*1.96±0.26*1.07±0.19*1.46±0.33*155图1酵母油对小鼠总胆固醇、甘油三酯、HDL-C、LDL-C和动脉粥样硬化指数的影响Fig.1EffectsofS.pararoseusoilontotalcholesterol,triglyceride,HDL-C,LDL-CandAIofthedyslipidemiamice由表6可知：实验初期各组小鼠的TC、TG、HDL-C和LDL-C水平无显著差异。经过-6- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn1604周的高脂饲料喂养后，造模小鼠的TC、TG、HDL-C、LDL-C、和AI值显著高于BC组的各项值。这说明长期的高胆固醇高脂饮食造成了模型小鼠的血脂异常，并使小鼠的动脉粥样硬化风险显著上升。由图1可知：经过8周的灌胃给药，SM、SH组小鼠的TC值显著低于HM组的水平，PC组与HM组无显著性差异；与HM相比，SH组与PC组的TG水平显著降低，且PC组效果更好。酵母油各组、PC组与HM组之间的HDL-C水平无显著差异，且165都高于BC组小鼠；SM、SH组小鼠的LDL-C水平显著低于HM组，PC组与HM组无显著差异。可见，本实验所提取的锁掷酵母油能够一定程度地调整血脂异常小鼠的脂质代谢，能够显著降低小鼠的TC、TG和LDL-C值，降低动脉粥样硬化风险。且酵母油的降TC、LDL-C效果优于多烯康，多烯康的降TG效果显著优于酵母油。总体来说，酵母油的抗动脉粥样硬170化效果要优于多烯康。2.4小鼠肝脏与脂肪组织病理学变化BC组小鼠肝脏呈鲜艳的红棕色，血液丰富，质地柔软，弹性较好。而HM小鼠的肝脏呈暗淡的土黄色，形状肿大，体积约为BC组的2倍，表面油光发亮，触摸有油腻感。经锁掷酵母油干预后的小鼠，肝脏外观有所改善，且SH组的干预效果好于SM、SL组。175实验中对各组小鼠的肝组织进行了固定、脱水、切片及HE染色，各组典型组织切片见图2。由图可知，BC小鼠的肝小叶结构正常，肝索规则清晰，肝细胞大小均一，分布均匀。肝细胞呈多边形，胞质均匀，结构完整。细胞核大而圆，位于细胞中心，着色清晰，无异常变化。而HM组小鼠的肝索分布紊乱，细胞大小不一，形状迥异。细胞内存在大小、数量不等的脂肪液滴，整体呈现严重的弥漫性脂肪变性。与此相比，经过酵母油干预的小鼠肝脏180细胞形状得以恢复，肝索更为清晰有序，脂肪囤积现象有明显改善。单就减轻细胞内的脂肪积累效果而言，SH组好于PC、SM组，更好于SL组。图2酵母油对血脂异常小鼠肝脏组织形态的影响(200倍)Fig.2EffectsofS.pararoseusoilonhepatictissueofthedyslipidemiamice（×200）-7- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn185图3酵母油对血脂异常小鼠脂肪组织形态的影响(200倍)Fig.3EffectsofS.pararoseusoilonadiposetissueofthedyslipidemiamice（×200）实验亦对小鼠体内睾周脂肪组织行进了切片观察。由图3可见，空白对照组小鼠脂肪细胞大小均匀，形状规则。而在相同的放大倍数下，HM小鼠的脂肪细胞显著胀大，体积为190BC组的数倍，可见其脂肪堆积的严重程度。经锁掷酵母油干预的小鼠的脂肪细胞明显形状缩小，且缩小程度相近。结合以上两点可知，血脂异常小鼠的肝脏脂肪堆积严重，脂肪细胞变大数倍，从而造成体内脂肪囤积过多，表现为体重大幅增加，体脂含量过高。而不同剂量的锁掷酵母油能在不同程度上，通过直接减少血脂异常小鼠肝脏内的脂肪堆积，缩小脂肪细胞的形状，从而控制小鼠体重及体脂的过快增长。且酵母油的效果随着剂量的加大而增长，195与多烯康作用相近。2.5锁掷酵母油对小鼠脂肪酸代谢相关基因的影响肝脏是脂质代谢的主要器官，肝在脂类的消化、吸收、分解、合成以及运输等代谢过程中均起重要作用。脂肪酸代谢分为脂肪酸合成和氧化——（1）脂肪酸合成通路中，乙酰CoA在乙酰CoA羧化酶（ACC）的催化下变成丙二酰CoA，再经脂肪酸合成酶（FAS）催化生200成棕榈酸盐后进一步合成脂肪酸。其中ACC和FAS是脂肪酸合成中的关键限速酶。固醇调节元件结合蛋白（SREBP）家族是调节胆固醇和脂肪酸代谢过程重要的转录因子，其中SREBP-1c能够调节ACC和FAS的合成，从而促进TG的生成；（2）肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ（CPT-1）可将长链乙酰CoA运送至线粒体内膜，是脂肪酸β氧化的限速酶，CPT-1的表达上调能够促进脂肪的β氧化。本实验检测了各组小鼠肝脏组织中ACC、FAS、SREBP-1c和205CPT-1的mRNA表达情况。由图4可知，HM组小鼠的ACC、FAS、SREBP-1c、CPT-1基因的表达显著上升。与HM组相比，SH、SM组能够显著下调ACC和SREBP-1c基因的表达，且显著上调FAS和CPT-1的表达。与PC组相比，酵母油下调ACC基因的效果较弱，下调SREBP-1c基因的效果无显著差异，酵母油上调CPT-1基因的效果优于多烯康。由此可知，酵母油能够总体下210调小鼠脂肪酸合成相关基因，并上调脂肪酸氧化相关基因，从而降低小鼠体内TG含量，与前文结果相符。-8- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn图4酵母油对血脂异常小鼠脂肪合成相关基因表达的影响Fig.4TheEffectsofS.pararoseusoilonlipogenesisgeneexpressioninthedyslipidemiamice2153结论在高脂膳食饲喂后，小鼠体重增加，血清TC、TG、HDL、LDL均显著上升，动脉粥样硬化风险上升。本实验发现，相比于高脂模型小鼠，酵母油干预小鼠的体重减轻，血清TC、TG、LDL均显著下降，且动脉粥样硬化风险下降。酵母油干预小鼠的肝脏脂肪堆积现象有所改善，脂肪细胞显著变小。RT-PCR结果表明，HM小鼠肝脏SREBP-1c、FAS、ACC、220CPT-1表达均显著上升；与HM组相比，SH、SM组均能够显著下调SREBP-1c和ACC的mRNA表达，上调CPT-1和FAS的表达。CPT-1和FAS表达的同时上调，说明锁掷酵母油可能是通过提高小鼠脂肪酸的整体代谢率，使小鼠体内TG含量降低。由此可知，锁掷酵母油具有良好的降血脂功效，其降TC与降LDL效果优于多烯康，但降TG效果不如多烯康。美国国家胆固醇教育计划成人治疗组（theNationalCholesterolEducationProgramAdult[20]225TreatmentPanel,NCEPATP）发表指南强调，在治疗成人高胆固醇血症时，LDL-C是降脂治疗的主要目标。显然，相比于降脂药物多烯康，锁掷酵母油在此方面有更大的优势。[8]由前期杜超的研究可知，锁掷酵母油中的类胡萝卜素具有良好的抗氧化性，而先前大量的研究证实，营养物质的抗氧化功能与降血脂存在一定的相关性。锁掷酵母油抗氧化与降血脂功能之间的相关机理有待下一步研究。且本实验仅从脂肪酸代谢机理解释了酵母油的降230血脂功效，而其对于胆固醇代谢的机理还有待进一步研究。[参考文献](References)[1]许法岭,刘俊孚.心血管内科医护手册[M].天津：天津科学技术出版社,2007.[2]韩梅.β-类胡萝卜素产生菌的选育及其发酵条件的优化[D].无锡:江南大学,2011.[3]杜庆生,魏成和,庞惠珍.保险医学实用手册.北京：中国金融出版社,2005.235[4]HanM,HeQ,ZhangWG.CarotenoidsproductionindifferentcultureconditionsbySporidiobolus-9- 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