长链菊粉对小鼠急性胰腺炎及相关肠道损伤的保护作用研究.pdf 9页

'中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn长链菊粉对小鼠急性胰腺炎及相关肠道损伤的保护作用研究**何月，孙嘉5（江南大学食品学院，无锡214122）摘要：目的探讨长链菊粉对小鼠急性胰腺炎及相关肠道损伤的保护作用及其机制。方法建立雨蛙素诱导的AP模型。将8周龄balb/c雌性小鼠按照随机分配原则平均分为三组。空白对照组与疾病对照组喂食正常饲料，预防组喂食3天5%长链菊粉添加饲料。取胰腺、结肠10组织进行病理组织切片观察形态，采用商业试剂盒对小鼠血清胰脂肪酶（lipase）、血清淀粉酶（amylase,AMY）、胰腺组织中炎症细胞释放髓过氧化物酶（MPO）的水平进行测定，采用ELISA检测血清和组织中抑炎性细胞因子白介素(IL)-10和促炎性细胞因子肿瘤坏死因子（TNF）-α与白介素(IL)-1β水平，采用Q-pcr检测结肠组织中紧密连接蛋白（zo-1,occludin）含量等。对小鼠胰腺组织的中性粒细胞所占百分比进行流式检测。结果与疾病组相比，预15防组小鼠的胰腺与结肠病理切片显示其组织完整性、水肿程度与炎症浸润程度明显减轻；血清lipase、AMY、胰腺MPO活性都明显降低；胰腺组织中中性粒细胞所占百分比明显降低；血清、胰腺以及结肠组织促炎因子IL-1β及TNF-α水平明显降低，抑炎因子IL-10水平明显升高；结肠组织的紧密连接蛋白含量明显升高。ITFIV对于AP过程中炎症因子的调节作用可能是通过减少胰腺中性粒细胞量来实现的。结论长链菊粉干预可有效缓解小鼠急性胰20腺炎及肠道损伤，其作用机制可能是与调节中性粒细胞与炎症因子释放，保护肠道屏障，阻断炎症由局部向全身发展有关。关键词：急性胰腺炎；长链菊粉；炎症因子；中性粒细胞；肠道屏障中图分类号：R576Protecteffectsoflongchaininulinonexperimentalacute25pancreatitisandrelatedintestinalinjuryinmiceHEYue,SUNJia(SchoolofFoodScienceandTechnology,JiangnanUniversity,WuXi,P.R.China214122)Abstract:AIMToinvestigatetheprotecteffectoflongchaininulin(ITF-IV)onacutepanreatitis(AP)andrelatedintestinalinjury,andillustrateitspossiblemechanisminmice.Methods8week-oldfemale30balb/cmicewererandomlydividedintocontrolgroup,APgroupandITF-IVtreatmentgroup.Normalfeedor5%ITF-IVfeedwasgiventothemiceinAPgrouporITF-IVtreatmentgrouprespectivelybeforeAPinduction.Themiceincontrolgroupwereintraperitoneallyinjectedwithequivalentvolumeofnormalsalineandfeedwithnormalfood.Biochemicalmarkers,histologyofpancreasandcolons,theserumlevelofamylase(AMY)andlipase,andpancreasmyeloperoxidase(MPO)levelswere35assessedwithrelevantcommerciallyavailablekits,respectively.ThelevelsofIL-10,IL-1βandTNF-αwereexaminedbyELISA.Theintestinaltightjunctionprotein(zo-1,occludin)levelweredeterminedbyQ-pcr.Thepercentageofneutrophilinpancreaswastestedbyflowcytomter.ResultsComparedwithAPgroup,themiceinITF-IVtreatmentgrouppresentedsignificantdecreasesinpathologicalhistologicaldamage,serumamylaseactivityandlipaseactivityandMPOactivityinpancreas,aswell40asIL-1βandTNF-αlevelinserumandtissues.AndthereweresignificantincreasesinIL10levelinserumandtissues,aswellasthetightjunctionproteinincolon.ThepercentageofneutrophilinpancreatictissuesincreasedsignificantlyinAPgroup,andreversedbyITFIV.ConclusionITF-IVprotectsagainstcaeruleininducedacutepancreatitisandrelatedintestinalinjuryinmice,whilecanmitigatethetissueinjuryofacutepancreatitis,andregulatethereleaseofinflammatorycytokines.The45mechanismisregulatingneutrophilandrelatedinflammatorycytokines,improvingintestinalbarriertoagainstsystemicandlocaldamage.Keywords:acutepancreatitis;inulintypefructose-IV;inflammatorycytokine;neutrophil;intestinalbarrier作者简介：何月（1995-），女，硕士研究生，营养免疫通信联系人：孙嘉（1982-），女，教授，营养免疫学.E-mail:jiasun@jiangnan.edu.cn-1- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn0引言50急性胰腺炎（acutepancreatitis,AP）是多种病因导致的胰酶在胰腺内被过早激活后[1]引起胰腺组织自身消化、水肿、出血甚至坏死的炎症性疾病。当胰腺组织的局部炎症进一步发展，即会引发全身性炎症反应综合征和与多器官功能障碍，从而导致较高的死[2]亡率。重症急性胰腺炎患者可能会发生肠动力障碍、肠道菌群失调、肠道缺血、细胞因子的过55度增长和肠粘膜上皮过渡凋亡而导致肠粘膜屏障功能损害，发生肠道衰竭，进一步出现肠道菌群移位，不但引起胰腺坏死组织感染，还可使肠源性内毒素及细菌进入人体循环，诱发和[3]加重SIRS和MODS，增加患者的死亡率。另一方面，局部炎症反应是机体受损害时发生的保护性反应，被严格限制在受损伤部位，但当炎症反应失控时，越来越多的炎症细胞及介质如TNF-α、IL-1β等被过度激活，大量释放，进入血液循环，导致SIRS的发生。60同时，由于局部炎症介质的作用使中性粒细胞发生凋亡延迟，凋亡延迟的中性粒细胞在炎症部位通过呼吸爆发产生大量自由基、蛋白水解酶及炎症介质等有害物质造成组织损伤，增[4]加组织的炎症反应，导致加重损伤。循环中大量存在的促炎介质可破坏毛细血管内皮细[5,6]胞屏障功能，使得血管通透性增加，更有利于各种炎症细胞进入组织中。菊粉（inulin）是一类天然果聚糖的混合物。果聚糖是果糖单元通过(2-1)链联接而成并65以葡萄糖单元终止的碳水化合物，以胶体形态含于细胞的原生质中。主要见于菊科植物，例[7]如，在菊芋的块茎、天竺牡丹（大理菊）的块根、蓟的根。研究表明，膳食中的长链菊粉（longchaininulinorinulintypefructansIV,ITF-IV）可以缓解坏死性结肠炎患者症状，低发酵寡聚糖、二糖、多元醇饮食可有效减少肠易激综合征患者功能性胃肠症状，这说明长链菊[8,9,10]粉在提供营养的同时对炎症也具有一定的调节作用。70因此，本研究中，我们探讨了ITF-IV作为有效的食源性肠道益生元对雨蛙素诱导急性胰腺炎的保护作用。1材料与方法1.1实验动物全部动物实验均由江南大学动物伦理委员会批准，并遵循国家、国际动物实验伦理原则7570开展。Balb/c小鼠(雌性，20–25g)被随机分为正常对照组组，疾病对照组和干预组，由江南大学动物房提供可控的饲养条件。1.2动物饲料ITF-IV购自荷兰Sensus公司。预防组小鼠喂食的5%（ITF-IV质量g/饲料总质量g）ITF-IV添加饲料。普通饲料由江南大学动物房提供。-2- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn801.3AP诱导造模和ITF-IV干预将8周龄雌性Balb/c小鼠随机分成空白对照组（control）、疾病对照组（AP）、长链菊粉预防组（ITF-IV+AP），采用腹腔注射的方式分别给对照组和疾病组小鼠注射生理盐水（0.90%）和雨蛙素（Sigma-Aldrich，美国）（50ug/kg）；每小时注射一次，连续注射8[8]次。预防组于注射雨蛙素造模前连续摄入三天的ITF-IV添加饲料。末针雨蛙素注射完毕85后1小时，向小鼠注射致死剂量的戊巴比妥钠后眼球取血、解剖小鼠，收集所需组织进行后续实验。1.4胰腺组织水肿程度的测定通过比较新鲜的胰腺样品重量（湿重）和经60℃烘干72小时的胰腺样品干重来对胰腺组织水肿程度进行评估。结果表示为胰腺组织水含量的百分比。901.5血清淀粉酶（AMY）的表达活性测定已有数据显示，90%以上急性胰腺炎患者的血清中的AMY都会增高。AMY测试盒购自南京建成生物工程研究所。新鲜血液经离心后获得血清样品，于-80℃保存备用。该试剂盒工作原理为：淀粉酶能水解淀粉生成葡萄糖、麦芽糖及糊精，在底物浓度已知并且过量的情况下，加入碘液与未水解的淀粉生成蓝色复合物，根据蓝色的深浅可推算出水解的淀粉量，95从而计算出AMY的活力。1.6胰腺组织髓过氧化物酶（MPO）的表达活性测定白细胞尤其中性粒细胞的活化作为急性胰腺炎发病机制中的重要一环，在其病理过程中发挥着极其重要的作用。MPO是中性粒细胞的功能标志和激活标志，其水平及活性变化代表着嗜中性多形核白细胞的功能和活性状态。中性白细胞中存在有髓过氧化酶，每个细胞所100含的酶的量是一定的，约占细胞干重的5％，该酶具有使过氧化氢还原的能力，利用这一特点可以分析酶的活力，并测定中心白细胞的数目。MPO测试盒购自南京建成生物工程研究性测定。使用分光光度计于460nm测定MPO活性。1.7血清胰脂肪酶（lipase）的表达活性测定血清lipase在急性胰腺炎发病后活性升高，也可用于急性胰腺炎的测定。通常但其特异[1]105性更高，持续时间更长，已被验证比AMY有更高的灵敏度与特异性。血清lipase试剂盒购自上海迪奥生物科技有限公司。血清样品经稀释后按说明书操作，使用酶标仪于540nm测定lipase活性。1.8胰腺组织水肿及炎症浸润程度分析取小块新鲜胰腺组织样品，经4%多聚甲醛固定、脱水、石蜡包埋后，制成5μm厚110的组织切片，经烤片，脱水后对切片进行染色。切片先于苏木精中染色10min，洗涤后再经0.5%的伊红染色5min。再次洗涤后，将切片依次置于70%、96%、100%的乙醇及二甲苯中100进行脱水和透明。固封后的切片即可置于显微镜下进行观察，随机选取每张切片中的不同视野对胰腺组织损伤进行评价。存在炎症、损伤严重的胰腺组织表现为腺泡细胞变性、水肿及炎性细胞浸润。-3- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn1151.9血清及组织中炎症因子的释放分析ELISA试剂盒购自R&D公司。采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定小鼠血清或胰腺、结肠组织5%匀浆上清液IL-10、IL-1β和TNF-α水平。分别向预先包被了小鼠IL-10、IL-1β和TNF-α单克隆抗体的酶标孔中加入IL-10、IL-1β和TNF-α，温育；温育后，加入生物素标记的抗IL-10、IL-1β和TNF-α抗体，再与联袂亲和素-HRP结合，形成120免疫复合物，再经温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中小鼠IL-10、IL-1β和TNF-α的浓度呈正相关。1.10流式细胞术取适量新鲜胰腺组织剪碎，活塞研磨，同时用DHanks液冲洗，滤出的细胞悬液收至流67125式管。离心、洗涤三次（1000rpm，4℃）。取一定量的细胞悬液（浓度约1×l0-10个/ml），加入荧光素标记抗体APCRatAnti-MouseCD11b(BDPharmingen,USA)，AlexaFluor700RatAnti-MouseLy-6G(BDPharmingen,USA)进行免疫反应。4℃避光孵育30分钟后，洗涤2次，加入适量DHanks液重悬，使用Attune®NxT声波聚焦流式细胞仪进行检测。1.11结肠RNA提取与实时定量PCR分析130总RNA采用TRIzol法遵照说明书进行提取。TRIzol试剂购自加拿大的Invitrogen公司。组织样品使用高通量组织研磨机在TRIzol中进行破碎，之后使用氯仿进行抽提，离心后吸取上清，加入等体积的异丙醇沉淀RNA，离心后RNA聚于管底，用75%乙醇进行洗涤后溶于DEPC水中备用。采用PrimeScriptTM反转录试剂盒（Takara）将总RNA反转录成cDNA。采用SYBRGreenSupermix染料(Bio-Rad)和待测基因的特异性引135物(表1)于Bio-RadCFXConnect实时体系中进行定量PCR分析。PCR反应设定的程序为95℃预热5min后，95℃持续15s，60℃持续60s，共反应40个循环。采用2-ΔΔCT法来计算靶标基因较管家基因的mRNA表达水平。表1qRT-PCR所使用的特异性引物Tab.1SpecificprimersforqRT-PCRGeneForward(5"--3")Reverse(5"--3")zo-1GGCTGTATTCCCCTCCATCGCCAGTTGGTAACAATGCCATGToccludinCTTCTCTTGCTGGCCCTAAACTGGCTTCACTTGAGGTTTCTGβ-actinCACACTTGCTTGGGACAGAGTAGCCATAGCCTCCATAGCC1401.12统计分析所有实验数据采用Prism5（GraphPad,SanDiego,CA）统计学软件处理。实验数据均表示为平均值±标准差。数据间的统计分析采用one-wayANOVA方差分析（*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001）。当one-wayANOVA方差分析无显著性时，采用独立t-test145进行两组数据间的统计分析（#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001）。-4- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn2结果2.1ITF-IV可以改善雨蛙素诱导的胰腺组织损伤急性胰腺炎发生时，胰腺组织会发生水肿、血清中淀粉酶，脂肪酶表达量增加，中性粒细胞也会释放大量髓过氧化物酶。如图1A，1B及1C所示，AP组小鼠胰腺损伤严重，表150现为胰腺水肿严重，AMY、MPO、血清lipase水平剧烈升高。在注射雨蛙素前，ITF-IV的膳食添加可以明显减弱胰腺组织水肿，并降低AMY，MPO，血清lipase水平。同时，对胰腺切片的形态学观察也进一步证实了ITF-IV对小鼠急性胰腺炎的保护作用（图2）。注：A图为胰腺组织水含量，B图为AMY水平，C图为胰腺MPO水平，D图为lipase水平。155图1小鼠胰腺组织水含量、AMY、MPO及lipase水平Fig.1Pancreaticwatercontent,serumamylaseactivity,pancreaticMPOactivityandserumlipaseactivityinmice图2各组小鼠胰腺组织病理改变结果Fig.2Pathologicalchangesofpancreatictissuesindifferentgroupsofmice1602.2ITF-IV可以调节雨蛙素诱导的血清炎症因子释放[11]我们对血清中的IL-10、IL-1β和TNF-α水平进行了测定。由血清中炎症因子变化可以得出，雨蛙素诱导明显导致炎症反应的产生，而造模前ITF-IV的膳食添加有效改善了这一现象。如图3A所示，疾病组中抑炎因子IL-10较正常组明显降低，而ITF-IV处理组有效增加了IL-10水平。如图3B所示，疾病组中促炎因子IL1β水平较正常组明显升高，而-5- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn165ITF-IV处理组有效下调了IL-1β水平。但血清中TNF-α水平无显著变化（图3C）。血清中TNF-α无明显变化趋势。分析可能的原因是炎症反应发生早期会立即导致TNF-α的大量释放进而引发其他包括IL-1β，IL-10在内的炎症因子参与其中，到炎症后期时变化趋势大大减弱。170注：A图为血清中IL-10水平，B图为血清中IL-1β水平，C图为血清中TNF-α水平。图3小鼠血清中的IL-10、IL-1β和TNF-α水平Fig.3IL-10,IL-1βandTNF-αlevelofserumindifferentgroups2.3ITF-IV可以调节雨蛙素诱导的胰腺中性粒细胞量与炎症因子释放我们检测了胰腺中的中性粒细胞所占百分比的变化。可以看出雨蛙素诱导后胰腺中中性175粒细胞明显增多，而经ITF-IV干预后中性粒细胞量较疾病对照组明显减少（图4A）。接着我们进一步检测了胰腺组织匀浆液中的IL-10、IL-1β。疾病组中胰腺组织匀浆液中的促炎因子IL-1β水平较正常组明显升高，而ITF-IV处理组有效下调了IL-1β水平（图4B）。病组中胰腺组织匀浆液中的抑炎因子IL-10水平较正常组明显降低，而ITF-IV处理组有效上调了IL-10水平（图4C）。IL-10、IL-1β结果与血清中的因子变化相同。同时，疾病组中胰腺180组织匀浆液中的促炎因子TNF-α水平较正常组明显升高，而ITF-IV处理组有效下调了TNF-α水平（图4D）。-6- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn注：A图为胰腺中中性粒细胞占总细胞数的百分比，B图为胰腺组织匀浆液中IL-10水平，C图为胰腺组织匀浆液中IL-1β水185平，D图为胰腺组织匀浆液中TNF-α水平。图4小鼠胰腺组织中的中性粒细胞所占百分比和IL-10、IL-1β、TNF-α水平Fig.4ThepercentageofneutrophilandIL-10,IL-1βandTNF-αlevelofpancreatictissuesindifferentgroups2.4ITF-IV可以改善急性胰腺炎小鼠的肠道损伤急性胰腺炎的发生会导致肠道屏障受损，肠道通透性降低。紧密连接蛋白（zo-1,[12]190occludin）的含量是反映肠道组织紧密与通透程度的重要指标。由于ITF-IV仅在结肠被消化吸收，故我们检测了结肠组织的zo-1和occludin的mRNA含量，并对结肠组织进行形态学分析。如图5A和5B所示，雨蛙素诱导的急性胰腺炎导致肠道紧密连接蛋白的mRNA含量降低，而ITF-IV处理后，zo-1和occludin的mRNA含量有所上升。如图6A所示，ITF-IV处理改善了由雨蛙素诱导所导致的肠道受损。195注：A图为结肠组织中zo-1的mRNA含量，B图为结肠组织中occludin的mRNA含量。图5小鼠结肠中的zo-1和occludin的mRNA含量Fig.5RelativemRNAexpressionofzo-1andoccludinincolons200图6各组小鼠结肠组织病理改变结果Fig.6Pathologicalchangesofcolonictissuesindifferentgroupsofmice2.5ITF-IV可以改善急性胰腺炎小鼠的肠道炎症因子释放[3]AP会导致肠道屏障受损，其中包括肠道炎症的发生。如图7A、7B及7C所示，结肠组织匀浆液中IL-10、IL-1β和TNF-α水平变化与胰腺组织匀浆液及血清中结果一致，即-7- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn205ITF-IV干预可以有效逆转由雨蛙素带来的结肠各因子水平变化，表明ITF-IV的膳食添加对AP小鼠的肠道炎症具有改善作用。注：A图为结肠组织匀浆液中IL-10水平，B图为结肠组织匀浆液中IL-1β水平，C图为结肠组织匀浆液中TNF-α水平。图7小鼠结肠中的IL-10、IL-1β和TNF-α水平210Fig.7IL-10,IL-1βandTNF-αlevelofcolonictissuesindifferentgroups3结论本文给出了长链菊粉的膳食添加对小鼠AP及相关的肠道损伤的保护作用的依据，这一保护作用可能是通过调节中性粒细胞与炎症因子释放，保护肠道屏障，阻断炎症由局部向全身发展实现的。215AP的特征是导致胰腺出血坏死与全身炎症反应。胰腺炎的发病机制与炎症因子损害胰腺局部有关，局部炎症引起机体应激导致系统性炎症反应，最终导致胰腺外脏器功能[13]损害。因此，检测炎症细胞因子水平对AP的预防与治疗评估具有重要意义。目前已有研究表明早期肠内营养能够有效改善AP患者的营养状况，保护肠道屏障功能，防止细菌移位，减少感染并发症的发生。长链菊粉作为肠道益生元的一种，在结220肠被消化吸收。益生元强化的肠内营养更有助于降低AP患者的感染性并发症发生率和[14,15]死亡率，加速患者康复。然而，目前并无相关研究证实ITF-IV对AP的改善作用。抑制炎症进程对控制AP及其引起的全身性并发症至关重要。在本研究中，我们发现，ITF-IV干预可有效缓解雨蛙素诱导的AP，表现为血清淀粉酶、血清脂肪酶、胰腺MPO水平降低，胰腺组织水肿与病理程度减轻。经ITF-IV干预后中性粒细胞量较疾225病对照组明显减少。AP小鼠血清与胰腺中存在TNF-α和IL-1β水平升高现象，抑制或阻[16][11]断TNF-α和IL-1β的表达可显著改善全身炎症反应；IL-10在发生AP时显著降低，与TNF-α、IL-1β协同作用诱导免疫损伤，诱发全身炎症反应。经测定，我们发现，ITF-IV干预后可以逆转由AP带来的炎症细胞因子IL-10、IL-1β和TNF-α水平变化。血清中TNF-α有下降趋势但无显著性。随后，我们通过测定结肠紧密连接蛋白zo-1和occludin230的mRNA含量，结肠病理切片以及炎症因子对ITF-IV保护肠道屏障功能进行了验证。我们发现，ITF-IV预处理可以显著保护雨蛙素诱导的局部（胰腺、结肠）及全身炎症。综上，ITF-IV可以缓解雨蛙素诱导的胰腺及肠道损伤，这一保护作用可能是调节中性粒细胞及炎症因子释放，保护肠道屏障，阻断炎症由局部向全身发展实现的。因此，膳食纤维——长链菊粉ITF-IV可能是一种有益于AP防治的食源性物质。-8- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn235[参考文献](References)[1]BELLD,KEANEMG,PEREIRASP.Acutepancreatitis[J].Medicine,2015,43(3):174-81.[2]KOLODECIKT,SHUGRUEC,ASHATM,etal.Riskfactorsforpancreaticcancer:underlyingmechanismsandpotentialtargets[J].Frontiersinphysiology,2013,4(415.[3]DENGWS,ZHANGJ,JUH,etal.Arpincontributestobacterialtranslocationanddevelopmentofsevere240acutepancreatitis[J].Worldjournalofgastroenterology,2015,21(14):4293-301.[4]NOVOVICS,ANDERSENAM,NORDM,etal.Activityofneutrophilelastasereflectstheprogressionofacutepancreatitis[J].Scandinavianjournalofclinicalandlaboratoryinvestigation,2013,73(6):485-93.[5]PETROVMS,SHANBHAGS,CHAKRABORTYM,etal.Organfailureandinfectionofpancreaticnecrosisasdeterminantsofmortalityinpatientswithacutepancreatitis[J].Gastroenterology,2010,139(3):813-20.245[6]GUNJACAI,ZUNICJ,GUNJACAM,etal.Circulatingcytokinelevelsinacutepancreatitis-modelofSIRS/CARScanhelpintheclinicalassessmentofdiseaseseverity[J].Inflammation,2012,35(2):758-63.[7]VOGTL,MEYERD,PULLENSG,etal.Immunologicalpropertiesofinulin-typefructans[J].Criticalreviewsinfoodscienceandnutrition,2015,55(3):414-36.[8]HIJOVE,SZABADOSOVAV,ŠTOFILOVJ,etal.Chemopreventiveandmetaboliceffectsofinulinon250coloncancerdevelopment[J].JournalofVeterinaryScience,2013,14(4):387.[9]Shiu-MK,WanCC,ZH.Wild-TypeandIL10-NullMiceHaveDifferentialColonicEpithelialGeneExpressionResponsestoDietarySupplementationwithSynbioticBifidobacteriumanimalisSubspecieslactisandInulin[J].TheJournalofNutrition,2014,245-251.[10]HEIMESAATMM,VOGTL,RAMASAMYU,etal.ImmuneModulationbyDifferentTypesof255β2→1-FructansIsToll-LikeReceptorDependent[J].PLoSONE,2013,8(7):e68367.[11]MOFIDIR,DUFFMD,WIGMORESJ,etal.Associationbetweenearlysystemicinflammatoryresponse,severityofmultiorgandysfunctionanddeathinacutepancreatitis[J].TheBritishjournalofsurgery,2006,93(6):738-44.[12]COHENL,SEKLERI,HERSHFINKELM.Thezincsensingreceptor,ZnR/GPR39,controlsproliferation260anddifferentiationofcolonocytesandtherebytightjunctionformationinthecolon[J].Celldeath&disease,2014,5(e1307.[13]XiPZ,ZhiJL,JieZ.Inflammatorymediatorsandmicrocirculatorydisturbanceinacutepancreatitis[J].HepatobiliaryPancreatDisInt.2009,8(4):351-357.[14]PANDEYKR,NAIKSR,VAKILBV.Probiotics,prebioticsandsynbiotics-areview[J].Journaloffood265scienceandtechnology,2015,52(12):7577-87.[15]SZABA,HORVTHM,MOLNRP,etal.Nutritionaltherapyofpatientswithacutepancreatitis[J].ClinicalNutritionESPEN,2016,11(e73.[16]PEREDAJ,SABATERL,CASSINELLON,etal.EffectofSimultaneousInhibitionofTNF-αProductionandXanthineOxidaseinExperimentalAcutePancreatitis[J].AnnalsofSurgery,2004,240(1):108-16.-9-'