神经电生理检测推拿对CCI大鼠感觉功能的影响.pdf 8页

'中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn神经电生理检测推拿对CCI大鼠感觉功能#的影响**罗晔，姚斌彬，于天源5（北京中医药大学针灸推拿学院）摘要：目的：从神经电生理角度探讨推拿对CCI模型的大鼠感觉功能的影响，证实推拿拨法对慢性坐骨神经压迫性损伤的治疗作用。方法：SD雄性大鼠44只随机分为正常组、假手术组、模型组和拨法组，每组12只，采用CCI制作实验性坐骨神经慢性压迫性损伤模型，造模后7d和28d后对所有大鼠进行光热耐痛阈实验，神经电生理检测坐骨神经运动传导速10度（MCV）和感觉传导速度（SCV），取材做坐骨神经HE染色。拨法组大鼠进行推拿拨法治疗，其余组不做处理。结果：拨法组造模后7d的光热耐痛阈数值和坐骨神经MCV、SCV均与模型组无差异，经过拨法治疗20次后，二者之间有显著差异（P<0.05），且逐渐接近正常组水平。结论：推拿拨法可明显促进大鼠坐骨神经感觉功能的恢复，加快神经传导速度，升高光热耐痛阈值，缓解痛觉功能障碍。15关键词：推拿拨法；神经电生理；CCI中图分类号：R244.1EffectsofTuinaontheSensoryFunctionogtheCCIModelRatsthroughNerveElectrophysiology20LUOYe,YAOBinbin,YUTianyuan(BeijingUniversityofChineseMedicine,InstituteofAcupunctureandMassage)Abstract:Objective:ExploretheeffectsofBo’famethodonthesensoryfunctionoftheCCImodelratsfromnerveelectrophysiology,toverifythetherapeuticactionofBo’famethodonchronicconstrictioninjuryofsciaticnerve.Methods:44SDadultmaleratswererandomlydividedintoanormalgroup,a25sham-operatedgroup,acontrolgroupandaBo’fagroupwith12ratsineachgroup.ThenweestablishedCCImodelasexperimentalchronicconstrictioninjuryofsciaticnevermodel.After7daysand28daysweexperimentedthesolar-thermalpainthreshold、movementconductionvelocityandsensoryconductionvelocityofsciaticneverthroughtheneverelectrophysiologyofallrats.Attheendoftheexperiment,weremovedsciaticneverofalleviatelimbtodoHEstainingtest.WetreatedtheBo’fagroup30withBo’famethod,anddidnotingontheothergroups.Results:Therewasnosignificantdifferenceintheresultsofsolar-thermalpainthresholdandMCV、SCVofsciaticneverbetweentheBo’famethodgroupandthemodelgroupatthe7thdayaftermodeling.AftertwentytimesofBo’famethodtreatment,thedifferencesbetweenthetwogroupsbecamestatisticallysignificant(P<0.05),andtheresultswereatornearthenormalgrouplevel.Conclusion:ThroughBo’famethodtreatment,therecoveryofsensory35functioncanbepromoted,andthesciaticnerveconductionvelocitycanberisen.Bo’famethodcanalsoreduceobviouslythevaluesofsolar-thermalpainthreshold,andreliefpaindysfunction.Keywords:Bo’fa;neverelectrophysiology;CCI0引言40外周神经损伤常常引起神经病理性疼痛（NeuropathicPain，NPP），其主要表现为持续[1]性的触诱发痛、痛觉过敏和自发性痛。神经电生理检测是诊断神经病理性疼痛的重要手段，[2]神经传导速度等指标的检测，对证实、定位和量化周围感觉传导损害方面帮助很大。推拿基金项目：博士点基金资助项目（20130013110013）；国自然青年教师基金资助项目（2030071420006）；2016年大学生创新创业训练项目（1000062420000/069）；作者简介：罗晔（1995-），女，学生，针灸推拿对外交流专业，主要从推拿治疗周围神经损失的机理研究通信联系人：姚斌彬(1986-),男,讲师,主要研究方向是推拿治疗周围神经损失的机理研究.E-mail:316774153@qq.com-1- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn治疗NPP以其安全性高、侵袭性弱、效果明显而逐渐被现代医学所公认，经实验证明，其能有效改善周围神经损伤大鼠的行为学指标，促进轴浆运输功能的恢复，促进轴突再生，神[3]45经营养因子的表达，但推拿干预的效应机制尚不完全明确。本实验旨在通过神经电生理检测大鼠的感觉功能，以感觉神经传导速度为主进行观察探讨，为推拿干预治疗机制提供客观、直接的证据，定性定量地讨论推拿拨法对NPP功能的影响。1材料与方法1.1实验动物及分组50选取SPF级SD大鼠48只（由北京维通利华实验动物科技有限公司提供），雄性，体质量（200±20）g，实验动物许可证号：SCXK（北京）2012-0001，合笼（6只/笼）饲养于北京中医药大学SPF级实验动物中心，室温22-25℃，12/12h昼夜节律，自由进食与饮水，适应性饲养1周。按照随机数字表将48只SD大鼠随机分为4组，即正常组(Normal，N)12只、假手术组55(Sham-operated，S)12只、模型组(Model，M)12只、拨法治疗组(Bofa，B)12只。1.2实验仪器采用成都泰盟有限公司生产的BL-420生物机能实验系统（生物信号采集与分析系统）TM_WAVE软件2.0版。1.3造模方法60正常组：不做处理；假手术组：分离暴露左侧坐骨神经中段、不结扎，逐层消毒后行常规缝合；模型组、拨法组：按照Bennett-Xie的方法，建立CCI动物模型。①10%水合氯醛300-350mg/kg腹腔注射麻醉大鼠。②大鼠右侧俯卧位置于鼠板上，以左侧股骨中点为中心，2cm为直径，备皮、消毒。③从左侧大腿中部股骨外缘与股骨平行的方向切开皮肤，④肌间65隙钝性分离肌间筋膜，⑤暴露坐骨神经主干，⑥在坐骨神经分叉前游离6mm左右，⑦用4-0铬制羊肠线间隔lmm环绕结扎4道，松紧程度以引起小腿肌肉轻微颤动且不影响神经外膜血运为宜。⑧术毕，生理盐水冲洗，逐层消毒，缝合皮肤。⑨术后将大鼠置于保温毯上，等待苏醒，禁食水24小时。1.4治疗方法70正常组、假手术组和模型组行常规喂养。拨法组于造模第7天后开始治疗。每天用“按摩推拿手法模拟”仪（专利号：200710187403.1.）定性定量模拟拨法，依次刺激大鼠患侧殷门、承山、阳陵泉穴。每穴3min，每只总计9min。按摩头为光滑的接触面，直径10mm。每日1次，每治疗10次休息1天，共治疗20次。751.5行为学检测光热耐痛阈检测：评价大鼠温度觉和痛觉恢复情况。测试过程需保持安静，室温20~25℃。测试前将大鼠置于检测盒内，待其适应环境·后，用辐射灯光源照射其足跖中后1/3处，按下开始按钮，待大鼠抬脚时计时自动停止，记录此时时间，作为大鼠热痛缩腿反应潜伏期（PWL）。为防止大鼠组织热灼伤，设定光源自动切断时间为20s。每侧下肢测定802次，取其平均值。-2- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn1.6形态学-坐骨神经HE染色将展片40℃恒温烤箱中烤片12小时，烤干备用；使用二甲苯脱蜡；梯度乙醇水化；水洗3min；苏木精染液染色3min，以染核；再水洗3min；盐酸乙醇分色3~5s。带粉红色后立即取出；水洗30s；在碳酸锂饱和液中提插10下，细胞核变为蓝色后水洗1min；伊红染85液染色1min后水冲洗；梯度乙醇脱水；二甲苯透明；中性树胶封片。1.7神经电生理检测按照Foidart-Dessalle方法测定大鼠患侧坐骨神经感觉传导速度（SCV）、运动传导速度（MCV）。方法：用10﹪水合氯醛腹腔注射（0.35mg／100g）将大鼠麻醉后，俯卧位固定于手术90台上，依次切开皮肤、肌肉，暴露出手术段坐骨神经，游离坐骨神经，将两个绝缘双极针状电极分别钩在神经吻合处的两端，调节好电极的位置，使电极与神经干保持良好的接触，电流从近端流向远端。将双极针状记录电极置于近端刺激电极的上面进行刺激，以找出引起诱发动作电位的阈值和最大刺激后，再重复刺激几次，待屏幕上显示的动作电位图形稳定，伪迹及动作电位起点清楚后，截取图形，仪器自动显示出神经干动作电位波幅，测量神经干动95作电位波幅是从波形的最高点到最低点，潜伏期的测量是从刺激伪迹出现开始至动作电位的起始部位止，然后输入两刺激电极之间的距离，仪器自动显示出MCV。之后改变电极位置，[4]使电流方向从远端流向近端，测出SCV。MNCV(米／秒)=S(毫米)／T1－T2(毫秒)1.8统计学分析100用SPSS17.0统计软件进行分析，率的比较用卡方检验，均数比较用方差分析，组间两两比较方差齐时用Bonferroni检验，方差不齐时用Tamhane’sT2检验，P＜0.05为有统计学意义。2实验结果2.1大鼠患肢光热耐痛阈的变化情况105CCI模型大鼠光热耐痛阈的结果表明（见表1）：造模后7天的拨法组、模型组与正常组相比，阈值均明显下调，差异有统计学意义（P<0.01）；假手术组与正常组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。拨法治疗20次后，拨法组的光热耐痛阈值虽然仍低于正常组，差异有统计学意义（P<0.01），但其与模型组的光热耐痛阈值相比，已有显著性升高（P<0.01）。110表1各组大鼠患肢光热耐痛阈比较（x±s，s）Tab.Compareofsolar-thermalpainthresholdbetweenratsindifferentgroups（x±s，s）组别n7天28d正常组614.27±0.9514.70±1.21假手术组612.70±1.4414.32±0.67拨法组67.53±1.32**12.03±1.04**##模型组66.47±1.21**8.25±0.85**-3- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn2.2电镜观察HE染色结果正常组：电镜下可见坐骨神经神经元轴突及雪旺细胞排列整齐，形态规则，结构完整。115假手术组：该组电镜下结果大体同正常组。模型组：电镜下可见部分神经元轴突及雪旺细胞排列不规则，出现肿胀、破溃、甚至崩裂，胶质细胞出现明显增生等。拨法组：电镜下可见有坐骨神经神经元髓鞘及雪旺细胞结构大多数趋于完整，轴突无明显肿胀，部分线粒体可见肿胀、破溃、甚至崩裂（见图1）。正常组（×400）假手术组（×400）拨法组×400模型组×400图128d大鼠坐骨神经HE染色120Fig.1HEstainingonthesciaticnerveofratsafter28days2.3各组治疗前后坐骨神经电生理检测情况2.3.1运动传导速度CCI模型大鼠坐骨神经运动传导速度比较结果表明（见表2）：造模后7天的拨法组、模型组相比，坐骨神经运动传导速度变化不大，差异无统计学意义（P＞0.05）；两组与正125常组相比，坐骨神经运动传导速度明显减慢，且差异均有统计学意义（P＜0.01）；假手术组与正常组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。经过推拿拨法治疗20次后（造模后28天），拨法组大鼠坐骨神经运动传导速度与治疗前显著提高,差异有统计学意义（P＜0.05）；且接近正常组大鼠的坐骨神经运动传导速度，差异无统计学意义（P＞0.05）；模型组大鼠的坐骨神经运动传导速度减慢，与拨法组有明显差异，且差异有统计学意义（P＜0.01）；-4- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn130假手术组大鼠的坐骨神经运动传导速度改变不大，与正常组相比仍无统计学意义（P＞0.05）。表2各组治疗前后坐骨神经运动传导速度检测比较Tab.2CompareonMCVofsciaticnerveinpretherapyandpost-treatment组别n造模7d造模28d正常组636.57±3.1536.85±5.26假手术组635.69±3.3535.58±3.67拨法组622.35±6.2019.67±5.39模型组621.88±6.4133.97±2.48图27d后大鼠的运动传导速度135Fig.2MCVofratsafter7days图328d后大鼠的运动传导速度Fig.3MCVofratsafter28days2.3.2感觉传导速度-5- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn140CCI模型大鼠坐骨神经神经电生理感觉传导速度比较结果表明（见表3）：造模后7天的拨法组、模型组相比，坐骨神经感觉传导速度基本相同，差异无统计学差异（P＞0.05）；两组与正常组相比，坐骨神经感觉传导速度减慢，且差异均有统计学意义（P＜0.01）；假手术组与正常组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。经过推拿拨法治疗20次后（造模后28天），拨法组大鼠坐骨神经感觉电位传导速度显著提高,且差异有统计学意义（P＜0.05），145且接近正常组大鼠的坐骨神经运感觉传导速度，差异无统计学意义（P＞0.05）；模型组大鼠的坐骨神经感觉传导速度减慢，与拨法组有明显差异，且差异有统计学意义（P＜0.01）；假手术组大鼠的坐骨神经感觉传导速度改变不大，与正常组相比仍无统计学意义（P＞0.05）。图3各组治疗前后坐骨神经感觉传导速度检测比较150Tab.3CompareonSCVofsciaticnerveinpretherapyandpost-treatment组别n造模7d造模28d正常组646.00±3.6545.82±3.95假手术组643.62±3.0243.49±3.48拨法组632.96±6.6229.92±5.97模型组633.19±6.9043.15±2.30图47d后大鼠的感觉传导速度Fig.4SCVofratsafter7days155-6- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn图528d后大鼠的感觉传导速度Fig.5SCVofratsafter28days3讨论160神经病理性疼痛是由神经系统的原发性损害和神经功能障碍所激发或引起的慢性疼痛[3]，其发病机制复杂，且由多种机制引起，是医学界的一大难题。从中医学角度出发，已经对疼痛的病因病机有较系统的认识，根据疼痛的症候类型辨证论治。《素问·举痛论》曰:“痛而闭不通矣。”《证治要诀》云:“痛则不通，通则不痛。”由此可知，气血瘀滞是疼痛的发病原因之一。故此，中医的推拿治疗，因其活血化瘀，通经止痛特点，在临床上广泛应用于165镇痛。现代医学认为，推拿镇痛与脑中的神经递质、γ2氨基丁酸、P物质、阿片肽、杏仁核[6]及心理因素等有关。拨法是推拿的重要组成部分，也是运用较广的外治法之一。拨法对于缓解肌肉的痉挛作用性强，伤科疾病中应用十分广泛，当作用于神经干处，可以通过拨动神[7]经干，及周围肌肉韧带，达到治疗远端肢体的麻木或疼痛症状。因此在本次实验中选择拨法进行治疗，直接而有效的作用于治疗部位。170实验根据循经取穴和局部取穴的原则，选取殷门、承山、阳陵泉三穴治疗，其中殷门、承山穴位于足太阳膀胱经，阳陵泉位于足少阳胆经。三穴位于坐骨神经及其分支上，殷门位于坐骨神经干上，承山位于坐骨神经的分支胫神经上，阳陵泉位于坐骨神经的分支腓总神经上；并分别作用于坐骨神经、胫神经、腓总神经所支配的肌肉区——股二头肌、腓肠肌、胫[8]前肌。三穴对治疗坐骨神经慢性压迫性损伤所引起的神经性疼痛针对性强，治疗效果明显，175在推拿拨法治疗20次后，使得拨法组大鼠坐骨神经感觉电位传导速度显著提高,且差异有统计学意义（P＜0.05），且接近正常组大鼠的坐骨神经运感觉传导速度，三穴合用，能起到活血通络、祛瘀止痛的作用。目前认为氧化应激水平增高是外周神经损伤重要的致病因素。在神经病理性疼痛模型[9]中，CCI模型的氧化应激水平较高，热和机械疼痛域均有下降，本实验结果表明，CCI手180术后，拨法组、模型组与正常组相比，大鼠光热耐痛阈显著下降（P＜0.01），而经过推拿-7- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn治疗后，拨法组大鼠光热耐痛阈较模型组升高（P＜0.05），持续接近正常组水平（P＜0.01），说明推拿对改善CCI大鼠的痛觉和温度觉具有一定程度的效用。形态学可以对治疗疗效进行有效评价，是对行为学的一种验证。本次实验对大鼠的坐骨神经进行HE染色，在经过推拿拨法的治疗之后，发现拨法组大鼠的神经元轴突及雪旺细胞185较模型组损伤轻，排列整齐，结构完整。对形态学的研究，是又一个客观而公正的证据，从神经的角度证明推拿拨法对神经病理痛产生疗效。神经电生理检测技术已经逐步成熟，是现代医学中公认的评估神经损害、功能状态和预后最客观而精确的方法和指标，广泛应用于临床实践，协助医生诊断、治疗、评估疗效及预后。神经电生理常用的神经电图(ENG)检测指标为感觉传导速度（SCV）、运动传导速度190（MCV）、H反射、F波、重复神经电刺激（RNS）、皮肤交感反应和瞬目反射等；诱发电位(EP)的检测指标为听觉诱发电位(AEP)、视觉诱发电位(VEP)、运动诱发电位(MEP)和体感[10]诱发电位(SEP)。在本实验中，通过神经电生理技术检测大鼠患肢坐骨神经的感觉传导速度和神经传导速度，发现拨法组经过推拿拨法治疗后，与模型组相比差异显著（P＜0.01）），且接近正常组。虽然拨法通过CCI模型大鼠探究NPP相关疾病的治疗过程取得了一定成果，195但仍需进一步全面深入地研究，以期更加清晰地阐明其作用机制，并且开拓更广泛的应用前景。[参考文献](References)[1]刘先国,庞瑞萍,周利君,魏绪红,臧颖.感觉神经损伤，还是运动神经损伤引起神经病理性疼痛？[J].中国疼痛杂志.2015,21(3):162200[2]神经病理性疼痛诊疗专家.神经病理性疼痛诊疗专家共识[J].中国疼痛医学杂志.2013,19(12):706[3]张大鹏,潘世奇,侯明明,杨琪,王延忠.周围神经损伤后最佳修复时间时机的选择[J].中国组织工程研究与临床康复,2010,20:3726-3729.[4]李野,针刺环跳穴不同组织部位对坐骨神经损伤大鼠电生理和c-fos影响的实验研究[D],辽宁中医药大学,2012205[5]潘宁芳,杜俊英,俞婕等,神经病理性疼痛机制及电针干预作用的研究进展[J].上海针灸杂志.2017,36(1):103[6]张磊,李征宇,岳旭迎,傅瑞阳.推拿镇痛临床及机理研究进展[J].辽宁中医药大学学报.2014,16(1):115-118[7]于天源,林彩霞,付国兵,等.按摩推拿学(第3版)[M].北京:中国协和医科大学出版社，2012.[8]林露,陶国才,易斌.3种神经病理性疼痛大鼠模型的评价[J].重庆医学.2011,40(1):3-5[9]姚斌彬.基于马达蛋白及NGF探寻推拿对坐骨神经损伤大鼠轴浆运输功能的影响及机理[D].2013210[10]王俊峰.临床神经电生理检查的应用现状与进展[J].现代医学仪器与应用.2008,20(1):54-56-8-'