蛋白质NEDD化修饰的研究进展及展望.pdf 7页

'中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn蛋白质NEDD化修饰的研究进展及展望#关俊宏1,2，郑晓峰1,2**（1.蛋白质与植物基因研究国家重点实验室；52.北京大学生命科学学院，北京100871）摘要：NEDD8(Neuralprecursorcell-expresseddevelopmentallydownregulated8)是一种类泛素蛋白，和泛素化修饰类似，NEDD8分子能够在E1、E2和E3酶促反应下共价结合到底物蛋白的赖氨酸残基上，介导底物蛋白发生NEDD化修饰。蛋白质NEDD化修饰参与细胞周期、DNA损伤应答及固有免疫等许多信号通路。Cullin蛋白家族、转录因子p53、组蛋白H2A10及核糖体蛋白RPL11等被报道能发生NEDD化修饰。由于NEDD8表达异常导致NEDD8分子通过泛素化修饰的酶促反应体系共价结合到蛋白的赖氨酸残基上，而目前报道的NEDD8的很多底物都是在NEDD8过表达体系中进行验证，因此底物蛋白内源NEDD化修饰的鉴定及生理功能有待深入研究。关键词：蛋白质翻译后修饰；NEDD化修饰；NEDD815中图分类号：Q503TheprogressandprospectofproteinNEDDylationGuanJunhong1,2,ZhengXiaofeng1,2(1.StateKeyLabofProteinandPlantGeneResearch;2.SchoolofLifeSciences,PekingUniversity,Beijing100871)20Abstract:NEDD8(neuralprecursorcell-expresseddevelopmentallydownregulated8),anubiquitin-likeprotein,canbecovalentlyconjugatedtothelysinesofsubstratesthroughE1,E2andE3ligase,whichissimilartothatofubiquitination,thisprocessiscalledNEDDylation.ProteinNEDDylationhasbeenreportedtoparticipateincellcycle,DNAdamageresponse,innateimmunityandothercellsignalingpathways.TheCullinproteinfamily,transcriptionfactorp53,histoneH2AandribosomalproteinRPL1125areidentifiedassubstratesofNEDDylation.AsoverexpressionofNEDD8leadstoatypicalNEDDylationwhichconjugatesNEDD8tolysinesofsubstratesthroughubiquitinenzymes,whilemostofthereportedtargetsofNEDD8arecharacterizedinNEDD8-overexpressionsystem,therefore,identificationofendogenousNEDD8substratesandelucidationoftheirphysiologicalrolesneedfurtherinvestigation.30Keywords:Proteintranslationalmodification;NEDDylation;NEDD80引言NEDD8(neuralprecursorcell-expresseddevelopmentallydownregulated8)是一种类泛素蛋白，和泛素蛋白的氨基酸序列有接近60%的一致性。NEDD8分子能利用与泛素化修饰类35似的方式结合到底物的赖氨酸残基上，通过NEDD8末尾C端的两个甘氨酸残基与底物赖氨酸残基的ε-氨基基团形成异肽键，这一过程称作NEDD化修饰[1]。NEDD化修饰参与基因转录调控、细胞周期、DNA损伤应答及固有免疫等细胞内生理过程，是调控真核细胞生理功能的一种非常重要的蛋白质翻译后修饰[2-4]。Cullin蛋白家族是目前报道最多的NEDD8的底物，包括CUL1，CUL2，CUL3，CUL4A，40CUL4B，CUL5，CUL7，另外含有Cullin同源结构域的PARC和APC2蛋白也能发生NEDD化修饰。Cullin蛋白是组成Cullin-RING泛素连接酶（CRL）的支架蛋白，Cullin蛋白的NEDD基金项目：教育部2013年度博士点基金优先发展领域课题（20130001130003）作者简介：关俊宏（1989-），男，博士研究生，主要研究方向：蛋白质泛素化修饰与类泛素化修饰通信联系人：郑晓峰（1968-），女，教授、博导，主要研究方向：蛋白质翻译后修饰及肿瘤生物学.E-mail:xiaofengz@pku.edu.cn-1- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn化修饰增强了CRL的E3连接酶活性，促进下游靶蛋白的多泛素化修饰及降解，进而影响底物的稳定性，调控不同的信号通路[2,5,6,7]。最近的研究表明，非Cullin家族的蛋白质也能发生NEDD化修饰，这些底物包括抑癌45基因p53、组蛋白H2A、核糖体亚基蛋白RPL11、转录因子E2F1及泛素化E3连接酶Smurf1等[8-12]。然而，在大多数NEDD8的非Cullin底物蛋白研究中，NEDD8过表达会引起细胞异常的表型，因此，NEDD8的这些非Cullin家族的底物都存在争议[13-14]。目前NEDD化修饰的研究面临很大的挑战，我们需要在生理条件下对NEDD8的底物进行验证，并且要探究蛋白质NEDD化修饰的生理意义。本文主要介绍NEDD化修饰的基本过程，阐述蛋白质50NEDD化修饰如何参与DNA损伤应答和固有免疫信号通路，并探讨鉴定NEDD8底物的最新标准。1NEDD化修饰的基本过程蛋白质NEDD化修饰需要泛素化类似的酶促反应，其中参与NEDD化修饰的酶促反应体系主要包括E1、E2、E3和去NEDD化酶。55NEDD8蛋白的氨基酸序列在不同物种中非常保守，人中的NEDD8蛋白前体含有81个氨基酸，可以被C端水解异构酶UCHL3或半胱氨酸蛋白酶NEDP1加工切割，暴露C端末尾的2个甘氨酸残基，形成含有76个氨基酸的成熟NEDD8蛋白。UCHL3不仅可以加工NEDD8蛋白，同时还可以切割泛素蛋白，促进泛素蛋白的成熟[15]。而NEDP1有非常高的特异性，只能对NEDD8进行加工，不能加工泛素，并且NEDP1具有去NEDD化酶的活性，60可以特异性地去除非Cullin蛋白的NEDD化修饰[16]。NEDD8前体蛋白被切割后，可以在NEDD8活化酶E1（NAE）的作用下起始NEDD化修饰。NAE由两个亚基蛋白APPBP1和UBA3一起形成异源二聚体，NAE二聚体包含腺苷酰化位点和半胱氨酸硫酯结构域。首先，NEDD8可以结合到UBA3的腺苷酰化位点，在ATP的作用下，NEDD8C端的氨基酸残基和AMP形成腺苷酰中间产物。然后，NEDD8的65C端被NAE硫酯结构域的半胱氨酸催化形成硫酯中间产物，同时第二个NEDD8蛋白结合到UBA3的腺苷酰化位点，完成NEDD8的活化过程[17-18]。NEDD8蛋白被活化后，NEDD8的E2结合酶与结合两个NEDD8蛋白的NAE活化酶发生相互作用，催化NAE上半胱氨酸活性位点的NEDD8通过硫酯反应转移到E2结合酶上的半胱氨酸活性位点。已报道的NEDD8的E2结合酶只有两种：UBC12（又称UBE2M）和70UBE2F。大多数的底物主要通过UBC12发生NEDD化修饰，而UBE2F可以介导CUL5的NEDD化修饰[19-20]。NEDD化的E3连接酶可以催化NEDD8从E2结合酶的半胱氨酸位点转移到底物的赖氨酸残基上，形成异肽键。目前报道的介导NEDD化修饰的E3连接酶同时可以催化底物的泛素化修饰，主要包括RBX1、RBX2、c-CBL、RNF111、RNF168、MDM2、Smurf1和IAP175等。这些E3连接酶绝大多数都属于RING家族，含有RING结构域，能与E2结合酶发生相互作用，进而催化NEDD8的转移[9,12,21-25]。底物蛋白发生NEDD化修饰后，可以被去NEDD化酶将NEDD8从赖氨酸残基上去除，这个过程称作去NEDD化。目前报道的去NEDD化酶包括CSN5和NEDP1，其中CSN5是Cullin家族蛋白主要的去NEDD化酶。CSN5是COP9信号小体复合物的一个亚基，含有金80属蛋白酶活性位点，单独CSN5亚基的活性位点被自身抑制，CSN5的去NEDD化酶活性需要组装成8亚基COP9信号小体复合物[26-27]。半胱氨酸蛋白酶NEDP1不仅可以切割-2- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cnNEDD8前体，而且可以作为去NEDD化酶，特异性地去除大多数非Cullin家族蛋白的NEDD化修饰。研究表明NEDP1不能去除Cullin蛋白的单NEDD化修饰，但可以使Cullin的多NEDD化修饰成为单NEDD化修饰，进而抑制Cullin异常的多NEDD化修饰[16,28-29]。此85外，还有研究报道表明，部分去泛素化酶也具有去NEDD化酶的功能，但这些研究需要进一步的验证。2NEDD8的底物目前被完善鉴定的NEDD8的底物是Cullin家族蛋白，Cullin蛋白是报道最多的一类泛素E3连接酶CRL的骨架蛋白。Cullin的NEDD化修饰改变了Cullin蛋白C端结构域的构90象，促进RBX与Cullin的结合，进而激活CRL的E3连接酶活性。研究表明CSN5介导Cullin的去NEDD化修饰后，增强了CAND1与Cullin蛋白的相互作用，从而抑制CRL的活性[30]。除了Cullin蛋白能发生NEDD化修饰外，越来越多的NEDD8的底物逐渐被发现。最近研究表明，很多泛素的E3连接酶自身也能发生NEDD化修饰。Smurf1作为含HECT结构域的泛素E3连接酶，能介导自身在多个赖氨酸残基的NEDD化修饰，进而激活其泛素E395连接酶活性。在结肠癌细胞中，Smurf1的NEDD化修饰使其泛素E3连接酶过度激活，从而导致很差的预后效果[12]。另外，VHL、PTEN、HDM2和BRAP2等RING家族的E3连接酶也被报道能够发生NEDD化修饰[4,8,31]。其中PTEN的NEDD化修饰也可以促进其泛素E3连接酶的活性。因此，是否有更多的泛素E3连接酶活性受到NEDD化修饰的调控还有待深入研究。100此外，很多转录因子也被发现能发生NEDD化修饰，转录因子的NEDD化修饰可以通过改变蛋白的稳定性，改变蛋白相互作用，以及改变蛋白亚细胞定位等方式来抑制其转录活性，进而调控下游靶基因的表达，参与不同信号通路的应答。例如转录因子p73的NEDD化修饰促进其在细胞质的定位，进而抑制自身转录活性；转录因子E2F1的NEDD化修饰减弱了其蛋白稳定性，从而抑制自身转录活性[32]。105核糖体亚基蛋白是另一大类被报道能发生NEDD化修饰的底物[33]。核糖体大亚基蛋白RPL11发生NEDD化修饰后主要定位在核仁内，自身非常稳定。当细胞遇到核糖体压力时，RPL11的NEDD化修饰减弱，导致RPL11转移到核质，并与p53和MDM2发生相互作用，促进p53的稳定性，进而激活p53的转录因子活性，调控下游基因的表达，应答核糖体压力[10]。1102.1NEDD化修饰调控固有免疫通路NEDD化修饰可以参与不同信号通路的调控，已有的研究表明，NEDD化修饰能调控转录因子NF-κB的活性，进而参与固有免疫应答。在没有外界因素刺激时，转录因子NF-κB主要定位在细胞质内，并被IκBα抑制；当细胞受到TNFα、IL-1β等细胞因子刺激时，磷酸激酶IKK复合物（由IKKα、IKKβ和NEMO组成）催化IκBα的磷酸化，进而促进E3连接115酶SCFβTrCP介导的IκBα的多泛素化降解，促使NF-κB转运到细胞核内，发挥转录因子的活性，激活下游基因的表达。在NF-κB信号通路中，Cullin的NEDD化修饰可以激活E3连接酶SCFβTrCP活性，进而促进IκBα的多泛素化修饰。抑制NEDD化修饰可以稳定IκBα，从而抑制NF-κB的转录活性[34]。同时，IKK复合物亚基NEMO能够被TRIM40介导发生NEDD化修饰，NEDD化修饰120的NEMO可以抑制NF-κB信号通路[35]。另外，非Cullin蛋白BCA3能与NF-κB的亚基蛋-3- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn白p65相互作用，发生NEDD化修饰的BCA3可以招募组蛋白去乙酰化酶SIRT1，进而抑制NF-κB转录因子的活性[36]。然而后续的研究表明，只有在很高TNF浓度时，BCA3才能抑制NF-κB的活性。当TNF浓度接近生理水平时，BCA3可以正调控NF-κB的转录活性[37]。因此，BCA3的NEDD化修饰对NF-κB的调控还有待进一步地在生理水平上进行研究。125此外，接头蛋白MyD88也被报道能发生NEDD化修饰，MyD88的NEDD化修饰拮抗其泛素化，进而抑制NF-κB信号通路，该研究还有待进一步验证[38]。2.2NEDD化修饰调控DNA损伤应答NEDD化修饰还可以参与DNA损伤应答通路。研究表明，细胞遇到DNA双链断裂损伤时，E3连接酶RNF111可以介导组蛋白H4发生NEDD化修饰，增强对泛素E3连接酶130RNF168的招募，进而促进组蛋白H2A的泛素化修饰及修复蛋白BRCA1聚集到损伤位点，协助细胞完成DNA双链断裂修复[22]。组蛋白H2A也被报道能被NEDD8修饰，它的NEDD化修饰可以拮抗其泛素化修饰，进而使两者维持平衡。在细胞遇到DNA双链断裂损伤时，组蛋白H2A的NEDD化修饰减弱，泛素化修饰增强，促进了下游靶蛋白BRCA1和53BP1的招募。修复完成后，H2A的135NEDD化修饰增强，泛素化减弱，重新达成平衡[9]。此外，NEDD化修饰还可以通过调节CRL连接酶的活性来调控DNA损伤应答。研究表明，Cullin的NEDD化修饰可以通过调控Ku二聚体的泛素化修饰来调节NHEJ核心复合物的解离，从而维持NHEJ的正常进行[39]。3NEDD化修饰的抑制剂MLN4924140研究表明，在多种肿瘤中，NAE活化酶、UBC12和NEDD8都是表达上调的，意味着NEDD化修饰与肿瘤形成有密切联系[40-41]。另外Cullin家族蛋白和CRL连接酶的其他组分也被发现在癌细胞中高表达，表明NEDD化可能通过促进CRL的活性，增强底物蛋白的泛素化降解来促进肿瘤的发生发展[42]。因此，抑制NEDD化修饰，进而抑制CRL连接酶活性及底物蛋白的降解可以作为治疗肿瘤的一种方案。145Soucy等人通过筛选化学小分子库发现，MLN4924可以特异性地抑制NAE活化酶的活性并阻断NEDD化通路。MLN4924是一种AMP类似物，能与ATP竞争性地结合到NAE的腺苷酰化位点。MLN4924与NEDD8形成的中间产物阻止了NEDD8转移到E2结合酶，进而抑制NEDD化通路[43]。研究报道MLN4924能抑制不同肿瘤细胞的生长并促进细胞凋亡，表明NEDD8的抑制剂具有广泛的抑癌效果，目前MLN4924已经进入三期临床试验[7]。150利用MLN4924处理肿瘤细胞时，Cullin的NEDD化修饰明显减弱，CRL连接酶的底物蛋白的稳定性增加。例如MLN4924可以抑制CUL4Cdt2和CUL1Skp2的CRL活性，使复制执照因子CDT1大量积累，进一步使细胞周期阻滞在S期，诱导DNA损伤应答和细胞凋亡[44]。MLN4924还能通过抑制Cul1βTrCP和CUL2VHL连接酶的活性，使Deptor和HIF1α积累，激活自噬通路[45-47]。总之，MLN4924治疗癌症的临床效果主要是通过抑制CRL连接酶活性及155增强下游底物蛋白的稳定性实现的。此外，MLN4924还可能通过抑制非Cullin蛋白的NEDD化修饰实现抑癌效果，但这些结论还需要临床研究的进一步验证。-4- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn4鉴定NEDD化修饰底物的标准泛素化和NEDD化修饰具有很高的特异性，泛素蛋白72位的精氨酸决定了泛素只能被160泛素活化酶UAE识别，而NEDD872位的丙氨酸决定NEDD8只能被NAE识别。然而，当NEDD8异常表达时，NEDD8分子也可以结合泛素活化酶UBA1，进而通过泛素化修饰的E2和E3共价结合到底物蛋白的赖氨酸残基。研究表明，NEDD8可以在UBA1的作用下，与泛素一起形成NEDD8-泛素混合链[14]。由于在正常生理条件下，NEDD化修饰水平很低，此前鉴定NEDD化修饰的底物大多165都是在NEDD8过表达体系中进行的，因此，这些底物的NEDD化修饰的生理意义还有待进一步验证。考虑到NEDD化修饰的重要性，Enchev等人提出了鉴定NEDD8底物的科学标准[4]：（1）底物蛋白发生NEDD化修饰需要NEDD8分子C端甘氨酸残基的共价结合；（2）NEDD化修饰需要在生理条件下检测，NEDD8和底物蛋白的表达都是内源水平；170（3）检测MLN4924能否抑制底物NEDD化修饰时需要控制浓度，MLN4924不能影响泛素化E1活化酶；（4）鉴定介导底物蛋白发生NEDD化修饰的E2和E3连接酶；（5）探究NEDD化修饰的调控作用及生物功能。5展望175综上所述，本文介绍了NEDD化修饰的基本过程，概括了NEDD化修饰的部分底物及功能，同时阐述了NAE活化酶抑制剂MLN4924作为抑癌药物如何在临床中发挥作用。由于此前很多关于NEDD化修饰的研究都是在过表达NEDD8的系统中进行验证，而NEDD8的异常表达可以导致NEDD8分子通过泛素化修饰的UBA1、E2s和E3s修饰底物，关于NEDD化修饰的研究面临很大的挑战。本文也总结了鉴定NEDD8底物的科学标准，但目前只有180Cullin蛋白完全符合上述标准，因此非Cullin蛋白的NEDD化修饰的生理功能还需要进一步的验证。考虑到NEDD8抗体与泛素抗体的特异性，未来研究可以利用CRISPR-CAS9基因编辑技术在NEDD8基因组的起始密码子前面knock-in特定标签，然后通过标签抗体富集NEDD8的底物，再通过质谱鉴定来筛选更加可信的底物。我们相信knock-in技术可以很好的解决185NEDD8过表达的问题，能使我们更方便地检测内源NEDD化修饰以及探究NEDD化修饰的生理功能。[参考文献](References)[1]KamitaniT,KitoK,NguyenHP,YehET.CharacterizationofNEDD8,adevelopmentallydown-regulatedubiquitin-likeprotein[J].JBiolChem,1997,272(45):28557-28562.190[2]RabutG,PeterM.Functionandregulationofproteinneddylation."Proteinmodifications:beyondtheusualsuspects"reviewseries[J].EMBORep,2008,9(10):969-976.[3]HochstrasserM.Originandfunctionofubiquitin-likeproteins[J].Nature,2009,458(7237):422-429.[4]EnchevRI,SchulmanBA,PeterM.Proteinneddylation:beyondcullin-RINGligases[J].NatRevMolCellBiol,2015,16(1):30-44.195[5]ReadMA,BrownellJE,GladyshevaTB,HotteletM,ParentLA,CogginsMB,etal.Nedd8modificationofcul-1activatesSCF(beta(TrCP))-dependentubiquitinationofIkappaBalpha[J].MolCellBiol,2000,20(7):2326-2333.[6]OhhM,KimWY,MoslehiJJ,ChenY,ChauV,ReadMA,etal.AnintactNEDD8pathwayisrequiredforCullin-dependentubiquitylationinmammaliancells[J].EMBORep,2002,3(2):177-182.200[7]AbidiN,XirodimasDP.Regulationofcancer-relatedpathwaysbyproteinNEDDylationandstrategiesforthe-5- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cnuseofNEDD8inhibitorsintheclinic[J].Endocrine-relatedcancer,2015,22(1):T55-70.[8]XirodimasDP,SavilleMK,BourdonJC,HayRT,LaneDP.Mdm2-mediatedNEDD8conjugationofp53inhibitsitstranscriptionalactivity[J].Cell,2004,118(1):83-97.[9]LiT,GuanJ,HuangZ,HuX,ZhengX.RNF168-mediatedH2Aneddylationantagonizesubiquitylationof205H2AandregulatesDNAdamagerepair[J].JCellSci,2014,127(Pt10):2238-2248.[10]SundqvistA,LiuG,MirsaliotisA,XirodimasDP.Regulationofnucleolarsignallingtop53throughNEDDylationofL11[J].EMBORep,2009,10(10):1132-1139.[11]LoftusSJ,LiuG,CarrSM,MunroS,LaThangueNB.NEDDylationregulatesE2F-1-dependenttranscription[J].EMBORep,2012,13(9):811-818.210[12]XieP,ZhangM,HeS,LuK,ChenY,XingG,etal.ThecovalentmodifierNedd8iscriticalfortheactivationofSmurf1ubiquitinligaseintumorigenesis[J].NatCommun,2014,5:3733.[13]HjerpeR,ThomasY,ChenJ,ZemlaA,CurranS,ShpiroN,etal.ChangesintheratiooffreeNEDD8toubiquitintriggersNEDDylationbyubiquitinenzymes[J].BiochemJ,2012,441(3):927-936.[14]LeideckerO,MaticI,MahataB,PionE,XirodimasDP.TheubiquitinE1enzymeUbe1mediatesNEDD8215activationunderdiversestressconditions[J].CellCycle,2012,11(6):1142-1150.[15]WadaH,KitoK,CaskeyLS,YehET,KamitaniT.CleavageoftheC-terminusofNEDD8byUCH-L3[J].BiochemBiophysResCommun,1998,251(3):688-692.[16]Gan-ErdeneT,NagamalleswariK,YinL,WuK,PanZQ,WilkinsonKD.IdentificationandcharacterizationofDEN1,adeneddylaseoftheULPfamily[J].JBiolChem,2003,278(31):28892-28900.220[17]BohnsackRN,HaasAL.ConservationinthemechanismofNedd8activationbythehumanAppBp1-Uba3heterodimer[J].JBiolChem,2003,278(29):26823-26830.[18]WaldenH,PodgorskiMS,HuangDT,MillerDW,HowardRJ,MinorDL,Jr.,etal.ThestructureoftheAPPBP1-UBA3-NEDD8-ATPcomplexrevealsthebasisforselectiveubiquitin-likeproteinactivationbyanE1[J].MolCell,2003,12(6):1427-1437.225[19]HuangDT,MillerDW,MathewR,CassellR,HoltonJM,RousselMF,etal.AuniqueE1-E2interactionrequiredforoptimalconjugationoftheubiquitin-likeproteinNEDD8[J].NatureStructural&MolecularBiology,2004,11(10):927-935.[20]HuangDT,AyraultO,HuntHW,TaherbhoyAM,DudaDM,ScottDC,etal.E2-RINGexpansionoftheNEDD8cascadeconfersspecificitytocullinmodification[J].MolCell,2009,33(4):483-495.230[21]ScottDC,SviderskiyVO,MondaJK,LydeardJR,ChoSE,HarperJW,etal.StructureofaRINGE3trappedinactionrevealsligationmechanismfortheubiquitin-likeproteinNEDD8[J].Cell,2014,157(7):1671-1684.[22]MaT,ChenY,ZhangF,YangCY,WangS,YuX.RNF111-dependentneddylationactivatesDNAdamage-inducedubiquitination[J].MolCell,2013,49(5):897-907.[23]ZuoW,HuangF,ChiangYJ,LiM,DuJ,DingY,etal.c-Cbl-mediatedneddylationantagonizes235ubiquitinationanddegradationoftheTGF-betatypeIIreceptor[J].MolCell,2013,49(3):499-510.[24]ZhuangM,GuanS,WangH,BurlingameAL,WellsJA.SubstratesofIAPubiquitinligasesidentifiedwithadesignedorthogonalE3ligase,theNEDDylator[J].MolCell,2013,49(2):273-282.[25]HarperJW.Neddylatingtheguardian:Mdm2catalyzedconjugationofNedd8top53[J].Cell,2004,118(1):2-4.240[26]CopeGA,SuhGS,AravindL,SchwarzSE,ZipurskySL,KooninEV,etal.RoleofpredictedmetalloproteasemotifofJab1/Csn5incleavageofNedd8fromCul1[J].Science,2002,298(5593):608-611.[27]EchalierA,PanY,BirolM,TavernierN,PintardL,HohF,etal.InsightsintotheregulationofthehumanCOP9signalosomecatalyticsubunit,CSN5/Jab1[J].ProcNatlAcadSciUSA,2013,110(4):1273-1278.[28]WuK,YamoahK,DoliosG,Gan-ErdeneT,TanP,ChenA,etal.DEN1isadualfunctionproteasecapable245ofprocessingtheCterminusofNedd8anddeconjugatinghyper-neddylatedCUL1[J].JBiolChem,2003,278(31):28882-28891.[29]ChanY,YoonJ,WuJT,KimHJ,PanKT,YimJ,etal.DEN1deneddylatesnon-cullinproteinsinvivo[J].JCellSci,2008,121(Pt19):3218-3223.[30]ZhengJ,YangX,HarrellJM,RyzhikovS,ShimEH,Lykke-AndersenK,etal.CAND1bindsto250unneddylatedCUL1andregulatestheformationofSCFubiquitinE3ligasecomplex[J].MolCell,2002,10(6):1519-1526.[31]ChooYS,VoglerG,WangD,KalvakuriS,IliukA,TaoWA,etal.RegulationofparkinandPINK1byneddylation[J].HumMolGenet,2012,21(11):2514-2523.[32]WatsonIR,BlanchA,LinDC,OhhM,IrwinMS.Mdm2-mediatedNEDD8modificationofTAp73regulates255itstransactivationfunction[J].JBiolChem,2006,281(45):34096-34103.[33]XirodimasDP,SundqvistA,NakamuraA,ShenL,BottingC,HayRT.RibosomalproteinsaretargetsfortheNEDD8pathway[J].EMBORep,2008,9(3):280-286.[34]AmirRE,IwaiK,CiechanoverA.TheNEDD8pathwayisessentialforSCF(beta-TrCP)-mediatedubiquitinationandprocessingoftheNF-kappaBprecursorp105[J].JBiolChem,2002,277(26):23253-23259.260[35]NoguchiK,OkumuraF,TakahashiN,KataokaA,KamiyamaT,TodoS,etal.TRIM40promotesneddylationofIKKgammaandisdownregulatedingastrointestinalcancers[J].Carcinogenesis,2011,32(7):995-1004.[36]GaoF,ChengJ,ShiT,YehET.Neddylationofabreastcancer-associatedproteinrecruitsaclassIIIhistonedeacetylasethatrepressesNFkappaB-dependenttranscription[J].NatCellBiol,2006,8(10):1171-1177.[37]GaoN,AsamitsuK,HibiY,UenoT,OkamotoT.AKIP1enhancesNF-kappaB-dependentgeneexpression265bypromotingthenuclearretentionandphosphorylationofp65[J].JBiolChem,2008,283(12):7834-7843.[38]YanF,GuanJ,PengY,ZhengX.MyD88NEDDylationnegativelyregulatesMyD88-dependentNF-kappaBsignalingthroughantagonizingitsubiquitination[J].BiochemBiophysResCommun,2017,482(4):632-637.-6- 中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn[39]BrownJS,LukashchukN,Sczaniecka-CliftM,BrittonS,leSageC,CalsouP,etal.NeddylationPromotesUbiquitylationandReleaseofKufromDNA-DamageSites[J].CellRep,2015.270[40]LiL,WangM,YuG,ChenP,LiH,WeiD,etal.Overactivatedneddylationpathwayasatherapeutictargetinlungcancer[J].JNatlCancerInst,2014,106(6):dju083.[41]HuaW,LiC,YangZ,LiL,JiangY,YuG,etal.Suppressionofglioblastomabytargetingtheoveractivatedproteinneddylationpathway[J].Neuro-oncology,2015,17(10):1333-1343.[42]WangZ,LiuP,InuzukaH,WeiW.RolesofF-boxproteinsincancer[J].NaturereviewsCancer,2014,14(4):275233-247.[43]SoucyTA,SmithPG,MilhollenMA,BergerAJ,GavinJM,AdhikariS,etal.AninhibitorofNEDD8-activatingenzymeasanewapproachtotreatcancer[J].Nature,2009,458(7239):732-736.[44]MilhollenMA,NarayananU,SoucyTA,VeibyPO,SmithPG,AmidonB.InhibitionofNEDD8-activatingenzymeinducesrereplicationandapoptosisinhumantumorcellsconsistentwithderegulatingCDT1turnover[J].280CancerRes,2011,71(8):3042-3051.[45]RyuJH,LiSH,ParkHS,ParkJW,LeeB,ChunYS.Hypoxia-induciblefactoralphasubunitstabilizationbyNEDD8conjugationisreactiveoxygenspecies-dependent[J].JBiolChem,2011,286(9):6963-6970.[46]LuoZ,PanY,JeongLS,LiuJ,JiaL.InactivationoftheCullin(CUL)-RINGE3ligasebytheNEDD8-activatingenzymeinhibitorMLN4924triggersprotectiveautophagyincancercells[J].Autophagy,2012,2858(11):1677-1679.[47]LuoZ,YuG,LeeHW,LiL,WangL,YangD,etal.TheNedd8-activatingenzymeinhibitorMLN4924inducesautophagyandapoptosistosuppresslivercancercellgrowth[J].CancerRes,2012,72(13):3360-3371.-7-'